Effekte von Interferon-B auf Transkription und Funktion von Mikroglia:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
1. EINLEITUNG 1
1.1 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 1
1.2 MIKROGLIA 1
1.2.1 FUNKTIONEN DER MIKROGLIA IM ZENTRALEN NERVENSYSTEM UND DER
NETZHAUT.... 2
1.2.2 MIKROGLIA UND AUTOIMMUNERKRANKUNGEN 4
1.3 INTERFERON-SS 6
1.3.1 WIRKUNG UND VERWENDUNG IN DER BIOMEDIZIN 8
1.3.2 IFNSS-EFFEKT AUF MIKROGLIAZELLEN 10
2. MATERIAL 11
2.1 ZELLEN 11
2.2 OLIGONUKLEOTIDE UND TAQMAN-SONDEN 11
2.3 ENZYME 13
2.4 CHEMIKALIEN UND KIT-SYSTEME 13
2.5 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 14
2.6 VERBRAUCHSMATERIALIEN 15
2.7 GERAETE UND SOFTWARE 15
3. METHODEN 17
3.1 ZELLKULTUR 17
3.1.1 ZELLLINIE BV-2 17
3.1.2 WEITERKULTUR 17
3.1.3 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL UND ZELLERNTE 17
3.1.4 KRYOKONVERSIERUNG VON ZELLEN 18
3.2 MAUSLINIEN UND HALTUNG 18
3.2.1 PRAEPARATION UND KULTIVIERUNG VON EX VIVO MIKROGLIA 19
3.3 IN VITRO STIMULATIONEN MIT LPS UND IFNSS 19
3.4 RNA-SPEZIFISCHE MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 20
3.4.1 RNA-ISOLIERUNG 20
3.4.2 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON RNA 21
3.4.3 RNA QUALITAETSKONTROLLE MIT DEM AGILENT BIOANALYZER 21
3.4.4 RNA-MIKROARRAY ANALYSE 22
3.4.5 BIOINFORMATISCHE DATENANALYSE 23
HTTP://D-NB.INFO/1053478313
INHALTSVERZEICHNIS II
3.4.6 REVERSE TRANSKRIPTION 24
3.4.7 QUANTITATIVE REALTIME PCR MITTAQMAN TECHNOLOGIE 25
3.4.8 RELATIVE QUANTIFIZIERUNG 26
3.5 FUNKTIONSASSAYS 28
3.5.1 MIGRATIONS-ASSAY 28
3.5.2 PHAGOZYTOSE-ASSAY 29
3.6 MORPHOLOGISCHE METHODEN 29
3.6.1 DURCHLICHTMIKROSKOPIE 29
3.6.2 FLUORESZENZMIKROSKOPIE UND IMMUNZYTOCHEMIE 30
4. ERGEBNISSE 31
4.1 INTERFERON-SS EFFEKT AUF BV-2 MIKROGLIA 31
4.1.1 TRANSKRIPTIONELLE VERAENDERUNGEN NACH IFNSS-STIMULATION: GENOMWEITE
EXPRESSIONSANALYSE UND QRT-PCR-VALIDIERUNG 31
4.1.2 INTEGRATIVE ANALYSE DER GENOMWEITEN EXPRESSIONSAKTIVITAETEN 35
4.2 GENVALIDIERUNG DES IFNSS-EFFEKTS IN PRIMAEREN MIKROGLIAZELLEN DES
GEHIRNS .... 36
4.3 INTERFERON-SS EINFLUSS AUF MIKROGIIAFUNKTIONEN 38
4.3.1 IFNSS-EFFEKT AUF DAS MIGRATIONSVERHALTEN VON BV-2 MIKROGLIA 38
4.3.2 IFNSS-EFFEKT AUF DIE PHAGOZYTOSEAKTIVITAET VON BV-2 MIKROGLIA 40
4.4 AENDERUNGEN DER AKTINFILAMENTANORDNUNG DURCH INTERFERON-SS:
IMMUNZYTOCHEMIE
IN BV-2 MIKROGLIA 43
5. DISKUSSION 46
5.1 DAS IMMUNMODULATORISCHE POTENTIAL VON INTERFERON-SS 46
5.2 KEINE SIGNIFIKANTE BEEINFLUSSUNG DES MIGRATIONSPOTENTIALS DURCH LPS-
ODER
IFNSS-STIMULATION 50
5.3 GESTEIGERTE PHAGOZYTOSEAKTIVITAET UNTER IFNSS- UND LPS-STIMULIERUNG 51
5.4 INDUKTION EINES ALTERNATIVEN AKTIVIERTEN MIKROGLIAPHAENOTYPS 52
6. ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 54
LITERATURVERZEICHNIS 56
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 65
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 69
TABELLENVERZEICHNIS 70
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