Vergleichender Nachweis und mögliche Bedeutung der Vimentin-Spleißvariante 3 im renalen Onkozytom versus den Subtypen des Nierenzellkarzinoms mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR):
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 TUMOREN DER NIERE 1
1.1.1 DAS KLARZELLIGE NIERENZELLKARZINOM 2
1.1.2 DAS CHROMOPHOBE NIERENZELLKARZINOM 4
1.1.3 DAS RENALE ONKOZYTOM 5
1.2 DAS INTERMEDIAERFILAMENT VIMENTIN UND SEIN SPLEISSPRODUKT VIMENTIN 3 7
1.2.1 DIE STRUKTUR DES CODIERENDEN GENS 7
1.2.2 VIMENTIN IN DER ZELLE 7
1.2.3 MECHANISMEN DES SPLEISSENS UND VIMENTIN 3 8
1.3 DAS TGF-SS-SYSTEM 9
1.3.1 TGF-SS 9
1.3.2 TGF-SS-REZEPTOREN UND INTRAZELLULAERE SIGNALTRANSDUKTION 10
1.3.3 DIE ROLLE VON TGF-SS IN TUMOREN 10
1.4 EPITHELIALE-MESENCHYMALE TRANSITION 11
1.4.1 WAS IST EMT? 11
1.4.2 EMT, TGF-SS UND VIMENTIN 12
2 F RAGE*
TELLURIG 13
3 MATERIAL UND METHODEN 15
3.1 MATERIAL 15
3.1.1 CHEMIKALIEN 15
3.1.2 REAGENZIEN UND ZELLKULTUR 15
3.1.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION 16
3.1.4 LABORAUSRUESTUNG 16
3.1.5 ARBEITSMATERIAL UND VERBRAUCHSGEGENSTAENDE 17
3.1.6 QRT-PCR PRIMER 17
3.1.7 LOESUNGEN UND PUFFER 18
3.1.8 PARAFFINGEWEBEPROBEN 19
3.1.9 ZELLLINIE CAKI-1 19
3.2 METHODEN 19
3.2.1 STANDARDPRAEPARATION ENTNOMMENER GEWEBEPROBEN IN DER PATHOLOGIE 19
3.2.2 DEPARAFFINIERUNG UND RNA-EXTRAKTION AUS DEN ZELLEN 20
3.2.3 PHOTOMETRISCHE RNA-QUANTIFIZIERUNG 21
3.2.4 QUANTITATIVE REAL-TIME-POLYMERASE-KETTENREAKTION ZUM NACHWEIS
EINER VIM3-EXPRESSION 21
3.2.5 TECHNIK DER ZELLKULTIVIERUNG 23
3.2.6 TAUVORGANG DER ZELLEN 23
3.2.7 ZAEHLMETHODE DER ZELLEN 24
3.2.8 BEHANDLUNG DER ZELLEN MIT ENDOTHELIN-1 24
3.2.9 BEHANDLUNG DER ZELLEN MIT TNF-A 24
3.2.10 BEHANDLUNG DER ZELLEN MIT TGF-SS 24
3.2.11 RNA-EXTRAKTION AUS DEN ZELLEN 24
3.2.12 PHOTOMETRISCHE RNA-QUANTIFIZIERUNG 25
3.2.13 QUANTITATIVE REAL-TIME-POLYMERASE-KETTENREAKTION ZUM NACHWEIS DES
VERANTWORTLICHEN STIMULUS .26
3.2.14 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 29
3.2.15 QUANTITATIVE REAL-TIME-POLYMERASE-KETTENREAKTION ZUM NACHWEIS
EINER TGF-SS-EXPRESSION 30
3.2.16 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER POLYMERASE-KETTENREAKTION 30
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4 ERGEBNISSE 31
4.1 ZUSAMMENFASSENDE VORSTELLUNG 31
4.2 VIM3-EXPRESSION IN DEN AUSGEWAEHLTEN SUBTYPEN DES RCC SOWIE DES RO 32
4.3 EVALUATION EINES SPEZIFISCHEN STIMULUS FUER DIE VIM3-EXPRESSION IN
CAKI-1 ZELLEN 37
4.3.1 ERGEBNIS DER QRT-PCR NACH ZELLSTIMULATION 37
4.3.2 ERGEBNIS DER AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 40
4.4 NACHWEIS EINER EXPRESSION DES ERUIERTEN STIMULUS IN DEN BENUTZTEN
GEWEBEPROBEN.. 41
4.5 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 42
4.5.1 TEIL A 42
4.5.2 TEIL B 42
5 DISKUSSION 44
TEIL A 44
5.1 EXPRESSION VON VIMENTIN 3 IM RO UND IN DEN SUBTYPEN DES RCC 44
TEIL B 48
5.2 STIMULATION DER EXPRESSION VON VIM3 DURCH TGF-SS 48
6 ZUSAMMENFASSUNG 52
7 LITERATURVERZEICHNIS 54
8 ANHANG 61
8.1 TABELLEN 61
8.2 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 63
9 LEBENSLAUF 65
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