Die Rolle der AMP-Kinase bei der Regulation des Vasotonus:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 8
1.1 DIE REGULATION DES BLUTKREISLAUFS 8
1.1.1 ALLGEMEINE PRINZIPIEN 8
1.1.2 DIE ROLLE VON WIDERSTANDSGEFAESSEN 9
1.1.3 GLATTMUSKULAERE KONTRAKTION 9
1.1.4 BEEINFLUSSUNG DER KONTRAKTION DURCH DAS MEMBRANPOTENTIAL 11
1.1.5 ENDOTHELIALER HYPERPOLARISIERENDER FAKTOR EDHF 13
1.2 ADENOSINMONOPHOSPHAT-ABHAENGIGE PROTEINKINASE ANIPK 16
1.2.1 ENTDECKUNG EINER AMP-ABHAENGIGEN PROTEINKINASE 16
1.2.2 AKTIVIERUNG UND REGULATION DER AMP-KINASE 16
1.2.3 FUNKTIONEN DER AMP-KINASE 18
1.3 FRAGESTELLUNG UND ZIELE DER ARBEIT 20
2 MATERIAL UND METHODEN 21
2.1 LOESUNGEN UND CHEMIKALIEN 21
2.1.1 PUFFERLOESUNGEN 21
2.1.2 LEIBOVITZ L15 MEDIUM 23
2.1.3 VORBEREITUNG DER AGONISTEN UND INHIBITOREN 24
2.1.4 CHEMIKALIEN UND MEDIKAMENTE 24
2.1.5 ANTIKOERPER UND PLASMIDE 26
2.2 PRAEPARATION UND KANUELIERUNG DER WIDERSTANDSGEFAESSE 28
2.2.1 PRAEPARATION DER GEFAESSE 28
2.2.2 KANUELIERUNG DER GEFAESSE 29
2.3 MESSUNG DER INTRAZELLULAEREN KALZIUMKONZENTRATION 30
2.3.1 FUNKTIONSPRINZIP DER FLUORESZENZMIKROSKOPISCHEN KALZIUMMESSUNG 30
2.3.2 BELADUNG DER GEFAESSE MIT FURA2 33
2.3.3 AUFBAU DES KALZIUMMESSPLATZES 33
2.4 REGISTRIERUNG DES GEFAESSDURCHMESSERS 34
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2
2.5 TRANSFEKTION DER GLATTEN MUSKULATUR 36
2.6 WESTERN BLOT 36
2.7 VERSUCHSPROTOKOLLE 38
2.7.1 APPLIKATION UND AUSWASCHEN VON AGENZIEN 38
2.7.2 KRITERIEN DER ENDOTHELIALEN UND GLATTMUSKULAEREN REAKTIVITAET 38
2.7.3 BLOCKADE DER NO-SYNTHASE UND DER CYCLOOXYGENASE 39
2.7.4 EFFEKTE VON A76 UND DOSISWIRKUNGSKURVEN 39
2.7.5 EFFEKTE VON AICAR UND METFPRMIN 40
2.7.6 VORDEPOLARISATION MIT KALIUM 40
2.7.7 EFFEKTE VERSCHIEDENER INHIBITOREN 40
2.8 TECHNISCHE GERAETE, VERBRAUCHSMATERIAL UND SONSTIGES 41
2.9 AUSWERTUNG UND DARSTELLUNG
DER ERGEBNISSE 44
3 ERGEBNISSE 47
3.1 ALLGEMEINE GEFAESSCHARAKTERISTIKEN 47
3.2. NACHWEIS DER AMP-KINASE IN DEN GEFAESSEN
DER VERSUCHSTIERE 48
3.3 A76 INDUZIERTE DILATATION 50
3.4 HERABSETZUNG DER AMPK-AKTIVITAET DURCH
TRANSFEKTION 54
3.5 EFFEKTE VON AICAR 56
3.6 EFFEKTE VON METFORMIN 57
3.7 A76 EFFEKTE NACH VORDEPOLARISATION MIT
HOHEM EXTRAZELLULAEREM
KALIUM 59
3.8 PHARMAKOLOGISCHE BLOCKADE VERSCHIEDENER KALIUMKANAELE 61
3.9 BLOCKADE DER NA -K -ATPASE 66
3
4 DISKUSSION 68
4.1 AUSWAHL DES VERSUCHSMODELLS 68
4.2 AKTIVIERUNG DER AMPK DURCH A76 70
4.3 DIE ROLLE DES
ENDOTHELS 75
4.4 AKTIVIERUNG DER AMPK DURCH
WEITERE AGONISTEN 76
4.4.1 AICAR ALS AKTIVATOR DER AMPK 76
4.4.2 METFORMIN ALS AKTIVATOR DER AMPK 77
4.5 BLOCKADE VON KALIUMKANAELEN 79
4.5.1 BLOCKADE VON KALIUMKANAELEN DURCH ERHOEHUNG DER EXTRAZELLULAEREN
KALIUMKONZENTRATION 79
4.5.2 BLOCKADE SPANNUNGS- UND KALZIUMABHAENGIGER KALIUMKANAELE (KCA) 80
4.5.3 BLOCKADE ATP-ABHAENGIGER KALIUMKANAELE (
KATP
) 83
4.6 BEDEUTUNG EINER KALZIUMDESENSITIVIERUNG 84
4.7 AKTIVIERUNG DER AMPK ALS THERAPEUTISCHE OPTION BEI
METABOLISCHEM SYNDROM UND ARTERIELLER
HYPERTONIE? 86
5 ZUSAMMENFASSUNG 88
6 LITERATURVERZEICHNIS 90
7 ^ DANKSAGUNG 101
8 . LEBENSLAUF 102
ANHANG
103
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