Mechanismen der Entstehung einer Überlebensnische für murine CLL-Leukämiezellen in sekundären lymphatischen Organen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2013
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Datensatz im Suchindex
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| adam_text | ABBILDUNGSVERZEICHNIS I
TABELLENVERZEICHNIS III
*
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
ZUSAMMENFASSUNG 1
SUMMARY 3
1 EINLEITUNG 5
1.1 B-ZELL-DIFFERENZIERUNG UND MALIGNE ENTARTUNG 5
1.1.1 MALIGNE LYMPHOME DER B-ZELL-REIHE 9
1.1.2 CHRONISCH LYMPHATISCHE LEUKAEMIE VOM B-ZELL-TYP (B-CLL) 11
1.2 TIERMODELLE DER CLL 13
1.2.1 DIE E[I-TCLL TRANSGENE MAUS 13
1.2.2 DELETION DES DLEU2/MIR-15A/16-L LOKUS 14
1.3 LYMPHOIDE MIGRATION UND HOMING 14
1.3.1 CHEMOKINE UND ADHAESIONSMOLEKUELE 14
1.3.2 DISSEMINATION UND LOKALISATION VON TUMORZELLEN IN SEKUNDAER
LYMPHATISCHEN ORGANEN 22
1.4 TUMOR-STROMA MIKROUMGEBUNG 24
1.4.1 LYMPHOIDE ORGANOGENESE UND AUFRECHTERHALTUNG DER ARCHITEKTUR VON
SEKUNDAER LYMPHATISCHEN ORGANEN 24
1.4.2 STROMAZELLPOPULATIONEN DES B-ZELL-FOLLIKELS DER MILZ 27
1.4.3 TUMORSTROMA WACHSTUMSNISCHE 29
1.5. AUFGABENSTELLUNG 32
2 MATERIAL 33
2.1 ZELLLINIEN 33
2.2 MAEUSE 33
2.3 OLIGONUKLEOTIDE 33
2.4 ENZYME 34
2.5 REKOMBINANTE PROTEINE/LIPIDE 35
2.6 FARBSTOFFE FUER MARKIERUNG VON ZELLEN 35
2.7 ANTIKOERPER 35
2.8 ZELLKULTURMEDIEN 37
2.9 KITS 37
2.10 CHEMIKALIEN 38
2.11 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 39
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INHALTSVERZEICHNIS
2.12 SOFTWARE 41
3 METHODEN 43
3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 43
3.1.1 DNA ISOLATION AUS MAUSSCHWAENZEN 43
3.1.2 KONZENTRATIONSMESSUNG VON DNA 43
3.1.3 RNA ISOLATION AUS SUSPENSIONSZELLEN 43
3.1.4 RNA ISOLATION AUS MILZ GESAMTGEWEBE 44
3.1.5 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON RNA 44
3.1.6 QUALITAETSKONTROLLE VON RNA 45
3.1.7 REVERSE TRANSKRIPTION ZUR HERSTELLUNG KOMPLEMENTAERER EINZELSTRANG
DNA 45
3.1.8 POLYMERASE-KETTENREAKTIONEN 45
3.1.9 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 47
3.2 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 48
3.2.1 HERSTELLUNG VON PROTEINLYSATEN 48
3.2.2 SDS- POLYACRYLAMID- GELELEKTROPHORESE 48
3.2.3 IMMUNOBLOT 49
3.3 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 50
3.3.1 ISOLIERUNG MONONUKLEAERER ZELLEN AUS LYMPHATISCHEN ORGANEN 50
3.3.2 ANALYSE MONONUKLEAERER ZELLEN 51
3.4 HISTOLOGIE UND MIKROSKOPIE 54
3.4.1 HERSTELLUNG VON KRYOSCHNITTEN 54
3.4.2 IMMUNFLUORESZENZFARBUNG 54
3.4.3 *SEQUENTIELL STATIC IMAGING 55
3.4.4 FLUORESZENZMIKROSKOPIE 56
3.4.5 INTRAVITALE MIKROSKOPIE/ 2-PHOTONEN MIKROSKOPIE 56
3.5 TIEREXPERIMENTELLE ARBEITEN 57
3.5.1 GENOTYPISIERUNG VON MAEUSEN 57
3.5.3 BEHANDLUNG EU-TCLL TRANSGENER TIERE MIT DEM LYMPHOTOXIN SS
REZEPTOR-IMMUNGLOBULIN FUSIONSPROTEIN 57
3.5.4 ADOPTIVER ZELLTRANSFER 58
4 ERGEBNISSE 59
4.1 IMMUNPHAENOPTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER TRANSGENEN
MAUSSTAEMME E
I-TCLL
UND CXCR5
7
E I-TCL1
59
4.1.1 WT E X-TCL1 TRANSGENE MAEUSE SIND CHARAKTERISIERT DURCH DIE
EXPANSION
REIFER B-ZELLEN 59
4.1.2 WT E I-TCLL LEUKAEMIEZELLEN WANDERN IN DIE B-ZELL-FOLLIKEL DER MILZ
60
4.1.3 GENERIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER CXCR5 E I-TCL1 TRANSGENEN
MAUS 61
4.1.4 MALIGNE B-ZELLEN EXPRIMIEREN EIN CHARAKTERISTISCHES MUSTER AN
CHEMOKINREZEPTOREN UND ADHAESIONSMOLEKUELEN 63
4.1.5 MALIGNE B-ZELLEN EXPRIMIEREN FUNKTIONELLE CHEMOKINREZEPTOREN 64
2
INHALTSVERZEICHNIS
4.2 CXCR5 BEEINFLUSST DIE DISSEMINATION DER MALIGNEN B-ZELLEN UND DIE
LYMPHOMPATHOGENESE IN DER E
I-TCLL
TRANSGENEN MAUS 66
4.2.1 CXCR5 REGULIERT DIE MIGRATION MALIGNER B-ZELLEN IN VIVO 66
4.2.2 CXCR5 EXPRESSION MALIGNER B-ZELLEN SPIELT EINE ESSENTIELLE ROLLE
FUER
DIE LYMPHOMPATHOGENESE 68
4.2.3 SIPI HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE MIGRATION UND LOKALISATION
MALIGNER B-
ZELLEN IN VIVO 71
4.2.4 CXCR5 VERMITTELT KEINE ERHOEHTE APOPTOSERESISTENZ DER
LEUKAEMIEZELLEN 75
4.2.5 QUANTIFIZIERUNG AKZESSORISCHER ZELLPOPULATIONEN IN DER MILZ
SPONTAN
KRANKER WT UND CXCR5 E I-TCL1 TIERE 76
4.2.6 AUSSCHLUSS AUS DER STROMAZELLNISCHE RESULTIERT IN VERSTAERKTER
EXPRESSION
DES ZELLZYKLUS-INHIBITORS P21 IN CXCR5
A
E X-TCL1 LEUKAEMIEZELLEN 79
4.3 DIE STROMAZELLNISCHE DER WT E I-TCLL LEUKAEMIEZELLEN IM B-ZELL-
FOLLIKEL DER MILZ 82
4.3.1 SEQUENTIELL STATIC IMAGING: ZEITLICH AUFGELOESTE UNTERSUCHUNG DER
MIGRATIONSWEGE WT E X-TCL1 MALIGNER B-ZELLEN IN DER MILZ 82
4.3.2 WT E I-TCL1 LEUKAEMIEZELLEN INTERAGIEREN MIT FDC-
STROMAZELLNETZWERKEN IM B-ZELL-FOLLIKEL DER MILZ 90
4.3.3 WT E I-TCL1 LEUKAEMIEZELLEN SIND AUSSCHLIESSLICH IN DER LIGHT ZONE
DES
KEIMZENTRUMS IN ENGER ASSOZIATION MIT DEM FDC-NETZWERK ZU FINDEN 92
4.3.4 DIE INTERAKTION ZWISCHEN FDC-NETZWERKEN UND WT E I-TCL1
LEUKAEMIEZELLEN IST NICHT ABHAENGIG VON CXCR4 93
4.4 LOKALISATION DER LEUKAEMIEZELLEN IN DER STROMAZELLNISCHE BEEINFLUSST
PROLIFERATION UND MOTILITAET DER LEUKAEMIEZELLEN 95
4.4.1 KONTAKT MIT FDC-NETZWERKEN VERAENDERT DIE MOTILITAET DER MALIGNEN B-
ZELLEN 95
4.4.2 INTERAKTION DER WT E I-TCL1 LEUKAEMIEZELLEN MIT FDCS IM B-ZELL-
FOLLIKEL FUHRT ZUR PROLIFERATION DER TUMORZELLEN 100
4.5 REZIPROKE STIMULATION UEBER DAS LT-LTSSR-SYSTEM BEEINFLUSST DIE
INTEGRITAET VON FDC-NETZWERKEN EBENSO WIE LOKALISATION UND
WACHSTUM DER MALIGNEN B-ZELLEN 103
4.5.1 DE NOVO INDUZIERTE FDC-NETZWERKE IN RAG
7
MAEUSEN BEEINFLUSSEN DIE
LOKALISATION DER MALIGNEN B-ZELLEN 103
4.5.2 ADOPTIVER TRANSFER VON E I-TCL1 LEUKAEMIEZELLEN IN RAG
7
MAEUSE FUEHRT
ZUR DE NOVO INDUKTION VON FDC-NETZWERKEN 107
4.5.3 ADOPTIVER TRANSFER HUMANER CLL-ZELLEN FUEHRT ZUR INDUKTION VON FDC-
NETZWERKEN IN DER MILZ VON NOD/SCID MAEUSEN 109
4.5.4 LTOF ~ EJX-TCLL TRANSGENE TIERE ZEIGEN VERLANGSAMTES TUMORWACHSTUM
111
4.5.5 DAS TUMORWACHSTUM IN WT E X-TCLL TRANSGENEN TIEREN IST ABHAENGIG
VON LT-ABHAENGIGEN STROMAZELLEN DER MILZ 112
3
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