Charakterisierung der Norrin-vermittelten Neuroprotektion auf retinale Ganglienzellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2013
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| Beschreibung: | 86 Bl. Ill., graph. Darst. |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS SEITE
1. EINLEITUNG 7
1.1 DIE NORRIE DISEASE
- VOM PHAENO- ZUM GENOTYP 7
1.2 EXPRESSION VON NORRIN 8
1.3 WNT/SS-CATENIN-SIGNALWEG 8
1.4 WIRKUNG VON NORRIN IN VIVO UND
IN VITRO 9
1.4.1 ANGIOGENE WIRKUNG VON NORRIN 9
1.4.2 ANGIOGENE WIRKUNG VON NORRIN
UNTER PATHOLOGISCHEN
BEDINGUNGEN 11
1.4.3 NEUROPROTEKTIVE WIRKUNG VON
NORRIN 12
2. ZIELSETZUNG DER ARBEIT 14
3. MATERIAL UND METHODEN 15
3.1 GERAETE UND
ALLGEMEINE VERBRAUCHSMATERIALIEN 15
3.2 ZELLBIOLOGISCHE TECHNIKEN 17
3.2.1 ARBEITSTECHNIKEN UND REAGENZIEN
DER ZELLKULTUR 17
3.2.2 VERWENDETE ZELLLINIEN UND
DEREN KULTURBEDINGUNGEN 18
3.2.3 WECHSEL DES KULTURMEDIUMS,
SPLITTEN DER ZELLEN 19
3.2.4 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL MIT
DEM CASY-ZAEHLGERAET 20
3.2.5 DIFFERENZIERUNG VON RGC-5 20
3.2.6 DURCHFUEHRUNG DER ZELLKULTUREXPERIMENTE 21
3.2.7 HERSTELLUNG VON
KONDITIONIERTEM MUELLERZELLMEDIUM 21
3.2.8 AUSWERTUNG MIT DEM WST-1-ASSAY 22
3.2.9 AUSWERTUNG MIT DEM
MTT-ASSAY 22
3.2.10 BEHANDLUNG
DER ZELLEN FUER PROTEINANALYSEN 23
3.3 TIERVERSUCHE 24
3.3.1 ALLGEMEINES 24
3.3.2 VERWENDETE VERSUCHSTIERE 24
3.3.3 INTRAOKULAERE INJEKTION 25
3.3.4 PRAEPARATION DER NETZHAUT UND
DES NERVUS OPTICUS 25
3.3.5 HERSTELLUNG VON SEMIDUENNSCHNITTEN 26
3.3.6 X-GAL-FAERBUNG UND ANFERTIGUNG
VON PARAFFINSCHNITTEN 27
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INHALTSVERZEICHNIS
3.4 PROTEINBIOCHEMISCHE TECHNIKEN 29
3.4.1 REAGENZIEN 29
3.4.2 PROBENMATERIAL FUER DIE
SILBERFAERBUNG 30
3.4.3 EXTRAKTION DES GESAMTPROTEINS 31
3.4.4 EXTRAKTION DES
KERNPROTEINS 32
3.4.5 SDS-POLYACRYLAMID-GEIELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 33
3.4.6 SILBERFAERBUNG 35
3.4.7 PROTEINTRANSFER AUF PVDF-MEMBRAN 36
3.4.8 WESTERN BLOT-ANALYSE 37
3.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE TECHNIKEN 39
3.5.1 REAGENZIEN UND OLIGONUKLEOTIDE
DER MOLEKULARBIOLOGIE 39
3.5.2 PROBENMATERIAL 40
3.5.3 RNA-ISOLATION 41
3.5.4 HERSTELLUNG DER CDNA 41
3.5.5 DURCHFUEHRUNG DER QUANTITATIVEN
REAL-TIME PCR 43
3.6 AUSWERTUNG UND STATISTIK 45
4. ERGEBNISSE 46
4.1 NORRIN ZEIGT KEINEN
DIREKTEN PROTEKTIVEN
EFFEKT AUF 661W
IN VITRO 46
4.2 DIFFERENZIERUNG VON RGC-5 MIT
STAUROSPORIN 49
4.2.1 MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNG VON RGC-5
NACH
STAUROSPORINBEHANDLUNG 49
4.2.2 REDUKTION DER ZELLZAHL VON RGC-5 DURCH
INKUBATION MIT
STAUROSPORIN ZUR DIFFERENZIERUNG 50
4.3 INKUBATION VON RGC-5 MIT
STAUROSPORIN UND NORRIN FUER
24 STUNDEN 51
4.3.1 UNDIFFERENZIERTE RGC-5 51
4.3.2 MIT STAUROSPORIN DIFFERENZIERTE RGC-5 53
4.4 NORRIN VERMITTELT DIREKT PROTEKTIVE
EIGENSCHAFTEN AUF
RGC-5 IN VITRO 55
4.5 DER NEUROPROTEKTIVE EFFEKT VON NORRIN
AUF RGC-5 IN VITRO WIRD NICHT
UEBER DEN KLASSISCHEN
WNT/SS-CATENIN-SIGNALWEG VERMITTELT 57
4.6 PROTEKTIVER EFFEKT VON KONDITIONIERTEM MUELLERZELLMEDIUM AUF RGC-5...
59
INHALTSVERZEICHNIS
4.7 EINFLUSS VON ENDOTHELIN-2
AUF DIE NORRIN-VERMITTELTE NEUROPROTEKTION... 60
4.7.1 VERMINDERTE TRANSKRIPTION VON
WACHSTUMSFAKTOREN IN DER
RETINA 60
4.7.2 EINFLUSS VON EDN2
AUF DIE NORRIN-VERMITTELTE
NEUROPROTEKTION
VON RGC IN VIVO 61
4.7.3 QUANTIFIZIERUNG DER AXONZAHL 63
4.8 UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES
DES ENDOGENEN WNT-SIGNALWEGS 64
4.8.1 RETINALER PHAENOTYP IN DER X-GAL-FAERBUNG 64
4.8.2 RETINALER PHAENOTYP NACH VERLUST DES
SS-CATENIN-SIGNALS 66
4.8.3 QUANTIFIZIERUNG DER AXONZAHL 67
5. DISKUSSION 68
5.1 CHARAKTERISIERUNG DER 661W-ZELLLINIE 68
5.2 ETABLIERUNG EINES ZELLKULTURSYSTEMS ZUM
NACHWEIS EINER NEURO-
PROTEKTIVEN WIRKUNG VON
NORRIN AUF RGC-5 69
5.3 DIE NEUROPROTEKTIVE WIRKUNG VON
NORRIN AUF RGC-5 IN VITRO 71
5.4 EINFLUSS VON ENDOTHELIN-2 NACH
SCHAEDIGUNG RETINALER
GANGLIENZELLEN IN VIVO 75
5.5 PHAENOTYP NACH VERLUST DES
SS-CATENIN-SIGNALS 77
6. ZUSAMMENFASSUNG 78
7. LITERATURVERZEICHNIS 79
8. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 82
9. DANKSAGUNG 85
10.
ERKLAERUNG 86
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