Analyse der Dynamik von Plasmazellen im Knochenmark:
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2014
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| adam_text | INHALTSANGABE
DANKSAGUNG 3
INHALTSANGABE 4
1. EINLEITUNG 7
1.1. ANGEBORENES UND ADAPTIVES IMMUNSYSTEM 7
1.2. PLASMAZELLENTWICKLUNG: VON DER B-ZELLE ZUR LANGLEBIGEN PLASMAZELLE
8
1.2.1. HUMORALES IMMUNSYSTEM 8
1.2.2. REIFESTADIEN VON PLASMAZELLEN 9
1.2.3. AKTIVIERUNG UND DIFFERENZIERUNG DER B-ZELLEN 10
1.2.4. WICHTIGE TRANSKRIPTIONSFAKTOREN BEI DER PLASMAZELLENTWICKLUNG 11
1.2.5. LANGLEBIGE PLASMAZELLEN 13
1.2.6. UEBERLEBENSNISCHEN FUER PLASMAZELLEN 14
1.3. AUFBAU DES KNOCHENS 17
1.4. 2-PHOTONEN MIKROSKOPIE 19
1.5. ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT 22
2. MATERIAL UND METHODEN 23
2.1. UEBERSICHT UEBER DIE VERWENDETEN MATERIALIEN 23
2.1.1. MEDIEN UND PUFFER 23
2.1.2. REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 23
2.1.3. ANTIKOERPER 24
2.1.4. ALLGEMEINE VERBRAUCHSMATERIALIEN 25
2.1.5. ZUBEHOER FUER INTRAVITALMIKROSKOPIE 25
2.1.6. ZUBEHOER FUER INTRAARTERIELLEN TRANSFER 26
2.2. MAUSSTAEMME UND BEHANDLUNGEN 27
2.2.1. VERWENDETE MAUSSTAEMME UND TIERHALTUNG 27
2.2.2. IMMUNISIERUNG DER TIERE 27
2.2.3. NARKOSE DER TIERE 27
2.2.4. INTRAARTERIELLER TRANSFER 28
2.3. KNOCHENHISTOLOGIE 29
2.3.1. ENTNAHME, FIXIERUNG UND EINBETTUNG VON KNOCHEN 29
2.3.2. GEFRIERMIKROTOMIE DES KNOCHENS 30
2.3.3. IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN DER KNOCHENSCHNITTE 30
2.4. INTRAVITALMIKROSKOPIE DES KNOCHENS 31
4
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2.4.1. PRAEPARATION DER TIBIA 31
2.4.2. PRAEPARATION DES SCHAEDELS 32
2.4.3. INTRAVITALMIKROSKOPIE 32
2.4.4. AUSWERTUNG DER KONTAKTE ZWISCHEN APZ UND STROMA 33
2.5. PRAEPARATION DER ZELLEN 34
2.5.1. HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN 34
2.5.2. ZELLZAEHLUNG 34
2.5.3. FLUORESZENZMARKIERUNG VON APZ FUER DIE INTRAVITALMIKROSKOPIE 35
2.6. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 35
2.6.1. OBERFLAECHENFAERBUNGEN 35
2.6.2. INTRAZELLULAERE UND INTRANUKLEAERE FAERBUNG 36
2.7. ANALYSE DER CHEMOTAXIS 37
2.7.1. CHEMOTAXISASSAY IM TRANSWELL-SYSTEM 37
2.7.2. ELISPOT 38
2.8. GENERIERUNG VON CHIMAEREN 39
2.9. GENEXPRESSIONSANALYSEN 40
2.10. GRAPHISCHE DARSTELLUNG UND STATISTISCHE AUSWERTUNG 41
3. ERGEBNISSE 42
3.1. ANALYSE DER LOKALISATION UND DYNAMIK VON APZ IM KNOCHENMARK
MIT BLIMP-1-GFP
+/
TIEREN IM ZEITLICHEN VERLAUF NACH
SEKUNDAERIMMUNISIERUNG 42
3.1.1. DARSTELLUNG VON APZ MIT BLIMP-1
GFP/+
REPORTERTIEREN 42
3.1.2. RAEUMLICHE VERTEILUNG DER APZ IM KNOCHENMARK IM ZEITLICHEN
VERLAUF NACH SEKUNDAERIMMUNISIERUNG 44
3.1.3. DYNAMIK DER APZ IM KNOCHENMARK ZU VERSCHIEDENEN
ZEITPUNKTEN NACH SEKUNDAERIMMUNISIERUNG MITTELS
INTRAVITALMIKROSKOPIE
45
3.2. ETABLIERUNG DES TRANSFERS VON APZ 48
3.2.1. ETABLIERUNG DES INTRAARTERIELLEN TRANSFERS VON FLUORESZENTEN
ZELLEN .;... 48
3.2.2. NACHWEIS VON APZ IM REZIPIENTEN NACH INTRAARTERIELLEM TRANSFER
VON MILZZELLEN IMMUNISIERTER TIERE ZU VERSCHIEDENEN ZEITPUNKTEN NACH
TRANSFER 50
3.2.2.1. NACHWEIS VON TRANSFERIERTEN APZ MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE 50
3.2.2.2. NACHWEIS VON TRANSFERIERTEN APZ MITTELS HISTOLOGIE 51
3.2.3. VERWENDUNG ISOLIERTER APZ FUER DEN TRANSFER 53
5
3.3. ANALYSE TRANSFERIERTER APZ MITTELS INTRAVITAL 2-PHOTONEN-
MIKROSKOPIE IM KNOCHENMARK 56
3.3.1. VERGLEICH DER MOTILITAET VON TRANSFERIERTEN APZ UND B-ZELLEN 56
3.3.2. KONTAKTANALYSEN VON APZ MIT STROMAZELLEN MITTELS INTRAVITAL
2-PHOTONEN MIKROSKOPIE 58
3.4. ANALYSE DES PROLIFERATIONSVERHALTEN VON APZ 60
3.4.1. GENEXPRESSIONSANALYSEN VON APZ MIT AFFYMETRIX CHIPS 60
3.4.2. UNTERSUCHUNG VON APZ IM ZELLZYKLUS MIT FLUORESZENTEN
ZELLZYKLUSREPORTERN 61
3.4.3. RAEUMLICHE VERTEILUNG DER APZ IN DER GI-PHASE IM KNOCHENMARK 64
4. DISKUSSION 66
4.1. DISKUSSION DER METHODIK 66
4.1.1. ANFAERBUNG DER GEFAESSE 66
4.1.2. AUTOFLUORESZENTE STRUKTUREN BEI DER ANALYSE DER
BLIMP-1
GFP/+
REPORTER IN DER INTRAVITALMIKROSKOPIE 67
4.1.3. ETABLIERUNG DES APZ-TRANSFERS 68
4.1.4. TECHNISCHE LIMITATIONEN BEI DER ANALYSE DER KONTAKTE
ZWISCHEN APZ UND STROMA 71
4.1.5. SCHWIERIGKEITEN DER GENEXPRESSIONSANALYSE VON APZ IN DER MILZ 73
4.2. DISKUSSION DER ERGEBNISSE 74
4.2.1. BEDEUTUNG DER VERTEILUNG DER APZ IM KNOCHENMARK IM
ZEITLICHEN VERLAUF NACH SEKUNDAERIMMUNISIERUNG 74
4.2.2. EINORDNUNG UND VERGLEICH DER BEWEGUNG DER APZ NACH
SEKUNDAERIMMUNISIERUNG 75
4.2.3. VERGLEICH DER MOTILITAET VON TRANSFERIERTEN APZ UND B-ZELLEN 78
4.2.4. BIOLOGISCHE RELEVANZ DER KONTAKTE ZWISCHEN APZ UND
STROMAZELLEN 80
4.2.5. APZ UND PROLIFERATION 82
4.2.6. MODELL ZUR EINWANDERUNG UND DIFFERENZIERUNG DER APZ IM
KNOCHENMARK 86
5. ZUSAMMENFASSUNG / SUMMARY 88
5.1. ZUSAMMENFASSUNG 88
5.2. SUMMARY 89
6. LITERATURVERZEICHNIS 90
7. ANHANG 103
6
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