Neutralisation des porzinen endogenen Retrovirus (PERV) durch Antikörper gegen das transmembrane Hüllprotein p15E:
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2013
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| Beschreibung: | Nebentitel: Neutralisation of the porcine endogenous retrovirus (PERV) by antibodies targeting the transmembrane envelope protein p15E |
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| adam_text | I. INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG/ABSTRACT
I. INHALTSVERZEICHNIS
II. ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS I
III. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS I:
1. EINLEITUNG -1
1.1 IMMUNSYSTEM -1
1.2 IMPFSTOFFE -1
1.3 INDUKTION VON ANTIKOERPER UND DEREN AUFREINIGUNG - 3
1.4 RETROVIREN - 5
1.4.1 EINFUEHRUNG - 5
1.4.2 AUFBAU DER RETROVIRALEN PARTIKEL - 7
1.4.3 GENOMORGANISATION - 8
1.4.4 REPLIKATIONSZYKLUS -9
1.5 DAS PORZINE ENDOGENE RETROVIRUS (PERV) -12
1.5.1 AUFBAU UND GENETIK VON PERV -13
1.5.2 VORKOMMEN UND INFEKTION MIT DEM VIRUS -14
1.5.3 ANTIKOERPER GEGEN PERV -16
1.6 TRANSPLANTATION -18
1.6.1 ALTERNATIVEN ZUR ALLOTRANSPLANTATION -18
1.6.2 XENOTRANSPLANTATION ! -19
1.7 DAS HUMANE IMMUNDEFIZIENZ-VIRUS - 23
1.7.1 GENETIK UND MORPHOLOGIE VON HIV ; - 23
1.7.2 UEBERTRAGUNG UND KRANKHEITSVERLAUF - 23
1.7.3 ANTIKOERPER UND IMPFSTOFFE GEGEN HIV - 24
1.8 VERGLEICH ZWISCHEN PERV UND HIV-1 - 26
2. ZIELSETZUNG -29
3. MATERIAL -30
3.1 REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN - 30
3.2 LOESUNGEN UND PUFFER -31
3.3 ENZYME - 32
3.4 ZELLKULTURMEDIEN -32
I
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3.5 SEPHAROSEN/GEKOPPELTE BEADS - 33
3.6 KITS I ......33
3.7 ANTIKOERPER -33
3.8 FILTER UND MEMBRANEN - 34
3.9 VEKTOREN, BAKTERIENSTAEMME UND ZELLLINIEN - 34
3.10 PRIMER UND SONDEN -35
3.11 PEPTIDE UND PEPTID-MICROARRAYS - 36
3.12 VERSUCHSTIERE - 36
3.13 GERAETE UND SOFTWARE - 37
3.14 MARKER - 37
4. METHODEN - 38
4.1 ARBEITEN MIT NUKLEINSAEUREN - 38
4.1.1 ISOLATION VON NUKLEINSAEUREN - 38
4.1.2 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) - 39
4.2 PROTEIN-TECHNIKEN -44
4.2.1 PROTEIN-EXPRESSION IN E. COLI UND AUFREINIGUNG VON GST-GEKOPPELTEN
PROTEINEN - 44
4.2.2 ISOLIERUNG VON IMMUNGLOBULINEN G - 45
4.2.3 AUFREINIGUNG VON SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN - 45
4.2.4 AUFKONZENTRATION VON PROTEINLOESUNGEN - 46
4.2.5 DIALYSE. : -46
4.2.6 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG - 47
4.2.7 SDS-POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) - 47
4.2.8 GELFILTRATION -48
4.3 ZELLBIOLOGISCHE ARBEITEN - 49
4.3.1 KULTIVIEREN VON 293T-ZELLEN - 49
4.3.2 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN - 49
4.3.3 HERSTELLUNG NEUER VIRUS-STOCKS - 50
4.3.4 IMMUNPRAEZIPITATION - 50
4.3.5 ERZEUGUNG KOMPETENTER BAKTERIEN - 50
4.4 IMMUNOLOGISCHE TECHNIKEN - 51
4.4.1 ELISA -51
4.4.2 WESTERN BLOT - 52
4.4.3 EPITOP-KARTIERUNG -53
4.4.4 NEUTRALISATIONSASSAY - 53
4.4.5 FLUORESZENZMIKROSKOPIE UND FACS-ANALYSE - 54
II
4.5 GEWINNUNG VON IMMUNSEREN - 55 -
5. ERGEBNISSE - 57 -
5.1 INDUKTION UND CHARAKTERISIERUNG VON PL5E-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN -
57 -
5.1.1 CHARAKTERISIERUNG DER REKOMBINANTEN PROTEINE - 58 -
5.1.2 CHARAKTERISIERUNG VON PL5E-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN - 59 -
5.1.3 INTERAKTION ZWISCHEN PERV UND PL5E-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER - 62 -
5.1.4 ISOLATION VON NHR- UND CHR-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN - 62 -
5.1.5 HEMMUNG VON PERV DURCH MPER-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER - 64 -
5.1.6 VERGLEICH ZWISCHEN DEN IMMUNSEREN NACH DER IMMUNISIERUNG MIT
PL5E(AA478-
602) UND PL5E(AA488-596) - 66 -
5.2 INDUKTION VON NHR- UND CHR-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN - 68 -
5.2.1 CHARAKTERISIERUNG DER ANTIGENE - 68 -
5.2.2 CHARAKTERISIERUNG DER IMMUNSEREN - 69 -
5.2.3 ISOLIERUNG VON NHR- UND CHR-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN - 71 -
5.2.4 EPITOP-KARTIERURIG VON KANINCHEN-SEREN - 73 -
5.3 IMMUNISIERUNG MIT PL5E(C549A) - 74 -
5.3.1 HEMMUNG DER NEUTRALISATION DURCH REKOMBINANTE PROTEINE - 77 -
5.4 EINFLUSS VON PL5E-ABGELEITETEN PEPTIDEN AUF DIE PERV-INFEKTION - 79
-
5.5 INDUKTION VON FPPR- UND MPER-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN - 82 -
5.6 INTERAKTION ZWISCHEN DEN PERV-PEPTIDEN - 83 -
6. DISKUSSION - 85 -
6.1 NEUTRALISIERENDE ANTIKOERPERN GEGEN PERV - 86 -
6.1.1 NEUTRALISATION DURCH MPER-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER - 88 -
6.1.2 BETEILIGUNG VON NHR-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER AN DER
PERV-NEUTRALISATION - 89 -
6.2 VERGLEICH VON NEUTRALISIERENDEN ANTIKOERPERN ZWISCHEN PERV UND HIV-1
- 94 -
6.2.1 HOMOLOGIE ZWISCHEN MPER-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN BEI PERV UND
HIV-1 - 94 -
6.2.2 NHR-SPEZIFISCHE NEUTRALISATIONSANTIKOERPER GEGEN HIV-1 - 97 -
6.3 EINFLUSS DER NHR AUF DIE INDUKTION VON MPER-SPEZIFISCHEN
NEUTRALISATIONSANTIKOERPERN
GEGEN PERV UND HIV-1 - 99 -
6.4 CHARAKTERISIERUNG DER PL5E-ABGELEITETEN PEPTIDE -101 -
6.4.1 INDUKTION VON PEPTID-ANTIKOERPERN -104-
6.5 FAZIT -106-
III
7. ANHANG -107-
7.1 NEUTRALISATION MIT MPER-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN VON HIV-1 GEGEN
PERV -107 -
7.2 CHARAKTERISIERUNG VON PERV-INFIZIERTEN ZELLEN UND DEREN ZELLFREIER
UEBERSTAND.... -107 -
7.3 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN CT-WERT UND KOPIENZAHL : -110 -
7.4 DATENBASIERENDER VERGLEICH DES TM-PROTEINS PL5E UND GP41 VON PERV-A
UND HIV-1...-
112 -
IV. DANKSAGUNG X
V. EIGENE VEROEFFENTLICHUNGEN XI
VI. EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG XII
VII. LITERATURVERZEICHNIS XIII
IV
|
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