Verfügbarkeit: Untersuchungen zu Protein-Protein-Interaktionen des SecYEG-Translokons

Untersuchungen zu Protein-Protein-Interaktionen des SecYEG-Translokons:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Kuhn, Patrick (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	2013
Schlagworte:	Hochschulschrift
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 ZUSAMMENFASSUNG 1 1.1 ZUSAMMENFASSUNG 1 2 EINLEITUNG 3 2.1 EINLEITUNG 3 2.1.1 PROTEINTRANSPORT IN DEM GRAM-NEGATIVEN BAKTERIUM E. COLI 4 2.2 AUFBAU DER BETEILIGTEN KOMPONENTEN 6 2.2.1 AUFBAU DES RIBOSOMS UND DES RIBOSOMALEN TUNNELS ... 6 2.2.2 CO-TRANSLATIONALE ZIELSTEUERUNG 9 2.2.3 POEST-TRANSLATIONALE ZIELSTEUERUNG 16 2.2.4 AUFBAU DES SECYEG TRANSLOKONS 20 3 MATERIAL UND METHODEN 25 3.1 MATERIAL 25 3.1.1 GERAETE 25 3.1.2 CHEMIKALIEN 27 3.1.3 ANTIKOERPER 29 3.1.4 E. COLI STAEMME 29 3.1.5 SOFTWARE 30 3.1.6 INTERNET RESSOURCEN 30 3.2 METHODEN 30 3.2.1 MEDIEN UND ANZUCHT VON E. COLI 30 3.2.2 ANTIBIOTIKA 31 3.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 31 3.2.4 PROTEINBIOCHEMIE 34 3.2.5 INKORPORATION DES PBPA 39 3.2.6 IN VIVO QUERVERNETZUNGEN 40 3.2.7 KOMPONENTEN UND DURCHFUEHRUNG DER IN VITRO QUERVERNETZUNGEN 44 I HTTP://D-NB.INFO/1044611294 4 ERGEBNISSE 55 4.1 ORTSGERICHTETE IN VIVO QUERVERNETZUNG ALS ASSAY FUER DIE SECY- FTSY INTERAKTION 55 4.1.1 DAS AMBER STOP-CODON UND DER EINBAU DES UV-AKTIVIERBAREN PHENYLALANIN-DERIVATS PBPA 55 4.1.2 KONSTRUKTION EINES PLASMID-KODIERTEN SECY// IS EG .... 56 4.1.3 AKTIVITAET DER SECY-PBPA KONSTRUKTE 57 4.2 IN VIVO QUERVERNETZUNGEN ZWISCHEN SECY UND FTSY 59 4.2.1 IN VIVO QUERVERNETZUNG ZWISCHEN SECY 357PSSPA UND FTSY SIND SOWOHL IM WESTERN BLOT ALS AUCH IN DER MASSEN- SPEKTROMETRIE SICHTBAR 59 4.2.2 MASSENSPEKTROMETRISCHE ANALYSE WEITERER KONTAKTE VON SECY 357PBPA 61 4.2.3 FTSY-QUERVERNETZUNGEN WURDEN NUR NOCH VON DER C4- SCHLEIFE VON SECY AUS GEFUNDEN 65 4.2.4 ZUSAMMENFASSUNG DER SECY-FTSY KONTAKTE, UND DER MASSENSPEKTROMETRISCHEN ANALYSE DER SECY 3O7PSSPA QUERVERNETZUNGEN 66 4.3 IN VIVO QUERVERNETZUNGEN VON FTSY 67 4.3.1 DER C-TERMINALE TEIL DER A-DOMAENE LIEFERT KONTAKTE ZU SECY 67 4.3.2 WEITERE IN VIVO QUERVERNETZUNGEN ZWISCHEN FTSY UND SECY WURDEN NICHT GEFUNDEN 69 4.3.3 DIE N-DOMAENE VON FTSY LAESST SICH NICHT ZU SECY QUERVER NETZEN, ABER ZU FFH UND TF 71 4.3.4 DIE A-DOMAENE VON FTSY INTERAGIERT MIT KOMPONENTEN DES CYTOSKELETTS 79 4.3.5 KOMPONENTEN DER GLYKOLYSE WURDEN IN SECY UND FTSY PROBEN MASSENSPEKTROMETRISCH IDENTIFIZIERT 83 4.3.6 DIE KOMPONENTEN DES RNA DEGRADOSOMS WURDEN EBEN FALLS IN SECY UND FTSY PROBEN MASSENSPEKTROMETRISCH IDENTIFIZIERT 85 4.3.7 AUCH RNA-MODIFIZIERENDEN ENZYME WURDEN MASSENSPEKTRO METRISCH IDENTIFIZIERT 86 4.3.8 ZUSAMMENFASSUNG DER IN VIVO KONTAKTE VON FTSY .... 88 4.4 IN VIVO QUER VERNETZUNGEN ZWISCHEN SECY UND DEM POST-TRANS- LATIONALEN SECA, UND DEM RIBOSOMALEN PROTEIN L23 89 4.4.1 DIE CYTOSOLISCHEN SCHLEIFEN C2, C4. C5 UND C6 VON SECY LASSEN SICH ZU SECA QUERVERNETZEN 89 4.4.2 IN VIVO QUERVERNETZUNGEN ZWISCHEN SECY UND DEM RIBO SOMALEN PROTEIN L23 FINDEN SICH NUR VON POSITION 357 AUS 91 4.4.3 WEITERE IN VIVO QUERVERNETZUNGEN DER CYTOSOLISCHEN SCHLEIFEN VON SECY 92 4.4.4 TABELLARISCHE UEBERSICHT DER CYTOSOLISCHEN SECY-KONTAKTE 93 4.4.5 ZUSAMMENFASSUNG DER KONTAKTE VON SECY ZU SECA, RIBOSOMALEN PROTEINEN UND WEITEREN KONTAKTEN 95 4.5 IN VIVO QUERVERNETZUNGSMUSTER VON VERSCHIEDENEN SECY MUTANTEN 96 4.5.1 DIE SECY40- UND SECY205-MUTANTEN WEISEN EIN VOM WILD TYP ABWEICHENDES QUERVERNETZUNGSMUSTER AUF 96 4.5.2 EINFLUSS DER CYTOSOLISCHEN SCHLEIFEN VON SECY AUF SECY QUERVERNETZUNGSPRODUKTE 97 4.5.3 DIE SCHLEIFE C5 BESITZT EINE ANSAMMLUNG GELADENER AMINOSAEUREN 99 4.5.4 ZUSAMMENFASSUNG DER AUSWIRKUNGEN VERSCHIEDENER SECY-MUTANTEN 100 4.6 REKONSTITUIERUNG DER SECY-FTSY QUERVERNETZUNGEN IN VITRO, UND NACHFOLGENDE KOMPETITONSVERSUCHE 100 4.6.1 KOMPONENTEN DER IN VITRO REKONSTITUIERUNG DER QUER VERNETZUNGEN 101 4.6.2 SECY 357SSPO EG LAESST SICH IN VITRO ZU FTSY QUERVERNETZEN . 103 4.6.3 SECA VERDRAENGT FTSY VON SECY UND WIRD SELBST WIE FTSY DURCH RNCS VON SECY VERDRAENGT 112 4.6.4 ZUSAMMENFASSUNG DER IN VITRO ERGEBNISSE 118 5 DISKUSSION 119 5.1 EIN PROTEIN-INTERAKTIONSNETZWERK BESTIMMT UEBER FALTUNG. PROZESSIERUNG UND TRANSPORT RIBOSOMEN-ASSOZIIERTER NASZIERENDER KETTEN 119 5.2 ZIEL, METHODE UND ZUSAMMENFASSUNG 121 5.2.1 ZIEL 121 5.2.2 ORTSGERICHTETE IN VIVO QUERVERNETZUNG ALS VERSUCHS-AUFBAU FUER PROTEIN-PROTEIN INTERAKTIONEN DES CO-TRANSLATIONALEN ZIELSTEUERUNGS-WEGES 122 5.2.3 ZUSAMMENFASSUNG 122 5.3 IN VIVO QUERVERNETZUNGEN ZWISCHEN SECY UND FTSY. SECA UND DEM RIBOSOM 124 5.4 DIE QUERVERNETZUNG ZWISCHEN SECY 357PSSPA EG UND ANDEREN ZIEL STEUERUNGSKOMPONENTEN LAESST SICH IN VITRO REPRODUZIEREN .... 127 5.4.1 SYSTEMATISCHE UNTERSUCHUNG VON FTSY 136 5.5 DIE UMGEBUNG DES SECYEG TRANSLOKONS UND VON FTSY 139 5.5.1 CO-LOKALISATION MIT DEM BAKTERIELLEN CYTOSKELETT .... 139 5.5.2 ENZYME DER GLYKOLYSE SIND AN DER INNENMEMBRAN LOKALISIERT 141 5.5.3 ALLE VIER KOMPONENTEN DES RNA DEGRADOSOMS WURDEN IDENTIFIZIERT 142 5.5.4 RNA-MODIFIZIERENDE ENZYME 144 5.6 AUSBLICK 144 A APPENDIX 169 A.L PRIMER-LISTE 169 A.2 SEQUENZ VON SECY/^EG IN PTRC99A 174 A.3 ABKUERZUNGEN 177 B DANKSAGUNGEN 181
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