Funktionelle Analyse der Zink-Cluster-Transkriptionsfaktorfamilie von Candida albicans durch artifizielle Aktivierung:
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2013
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ZUSAMMENFASSUNG 1
SUMMARY 3
1. EINLEITUNG 5
1.1. ALLGEMEINE EINFUEHRUNG 5
1.2. THERAPIE VON CAND/DA-INFEKTIONEN 7
1.3. RESISTENZMECHANISMEN 8
. 1.4. REGULATION DER EFFLUXPUMPEN 10
1.5. ZINK-CLUSTER-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 11
1.6. GENETIK VON C. ALBICANS 13
1.7. GENANALYSEMETHODEN IN C. ALBICANS 14
1.8. DIE ARTIFIZIELLE AKTIVIERUNG VON
ZINK-CLUSTER-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 16
1.9. ZIEL DER ARBEIT 18
2. MATERIAL UND METHODEN 21
2.1. ANZUCHT VON ESCHERICHIA COLI 21
2.2. ANZUCHT VON CANDIDA-STAEMMEN 21
2.3. PLASMIDHERSTELLUNG 21
2.3.1. HERSTELLUNG DER PLASMIDBIBLIOTHEK MIT DEN ARTIFIZIELL AKTIVIERTEN
ZINK-CLUSTER-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 22
2.3.2. PLASMIDE 26
2.3.3. OLIGONUKLEOTIDE 27
2.4. HERSTELLUNG VON GENETISCH VERAENDERTEN C.-ALBICANS-STAEMMEN 34
2.4.1. TRANSFORMATION VON C. ALBICANS 35
2.4.2. ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA UND SOUTHERN HYBRIDISIERUNG 35
2.4.3. PROTEINEXTRAKTION UND WESTERN BLOT ANALYSEN 36
2.4.4. HERSTELLUNG VON DELETIONSMUTANTEN, UEBEREXPRESSIONS- UND
REPORTERSTAEMMEN 37
2.4.5. HERGESTELLTE/VERWENDETE C.-ALBICANS-STAEMME 38
2.5. FLUCONAZOLSENSITIVITAETS-ASSAY 47
2.6. TRANSKRIPTIONSPROFIL-ANALYSEN 48
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2.6.1. RNA-ISOLIERUNG 48
2.6.2. MICROARRAY-ANALYSEN 49
2.6.3. NORTHERN HYBRIDISIERUNG 49
2.7. NACHWEIS DER GFP-EXPRESSION MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS) 51
2.8. BIOFILM ASSAY 51
2.9. LOESUNGEN 52
3. ERGEBNISSE 55
3.1. ETABLIERUNG DER METHODE DER ARTIFIZIELLEN AKTIVIERUNG 56
3.2. DIE BIBLIOTHEK DER ARTIFIZIELL AKTIVIERTEN
ZINK-CLUSTER-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN...58
3.3. NEUE REGULATOREN DER FLUCONAZOLRESISTENZ 60
* 3.4. GENEXPRESSIONSPROFILE VON CTA4*,
STB5*, MRR2*
& ZNC1
* 63
3.5. MRR2, EIN NEUER REGULATOR VON CDR1 66
3.5.1. MRR2* UND ZNC1
* ERHOEHEN DIE CDR1
-EXPRESSION 67
3.5.2. DIE UEBEREXPRESSION VON CDR1 IST FUER DIE FLUCONAZOLRESISTENZ VON
MRR2* UND ZNC1
* VERANTWORTLICH 70
3.5.3. MRR2 REGULIERT DIE BASALE EXPRESSION VON CDR1 71
3.5.4. MRR2 UND TAC1 SIND FUER DIE CDR1 -EXPRESSION NOTWENDIG 74
4. DISKUSSION 77
4.1. DIE ARTIFIZIELLE AKTIVIERUNG DER
ZINK-CLUSTER-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 77
4.2. DIE BIBLIOTHEK DER ARTIFIZIELL AKTIVIERTEN
ZINK-CLUSTER-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN...80
4.3. NEUE REGULATOREN DER FLUCONAZOLRESISTENZ 83
4.4. MRR2 - EIN WICHTIGER REGULATOR VON CDR1 87
4.5. ABSCHLIESSENDE WORTE UND AUSBLICK 91
LITERATURVERZEICHNIS 93
ANHANG 101
1. UEBERSICHT DER MICROARRAY-DATEN 101
2. DANKSAGUNG 111
3. LEBENSLAUF 113
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