Tumorstroma-Immuntherapie und spontane Immunsuppression im Grm1-transgenen Melanom-Modell:
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2012 [erschienen] 2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS I
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS MELANOM 1
1.2 INDUKTION VON IMMUNANTWORTEN IM TUMORGEWEBE 2
1.3 IMMUNE ESCAPE MECHANISMEN IM TUMORGEWEBE 5
1.3.1 VERMINDERTE EXPRESSION VON TUMORANTIGENEN 5
1.3.2 MODULATION DER IMMUNANTWORT DURCH IL-10 UND TGF-SSL 5
1.3.3 REGULATORISCHE T-LYMPHOZYTEN 7
1.4 DAS
TUMORSTROMA UND SEIN EINFLUSS AUF DIE TUMORPROGRESSION 9
1.4.1 ENDOGLIN (ENG; CD105) 10
1.4.2 FIBROBLAST ACTIVATION PROTEIN ALPHA (FAP; SEPRASE) 11
1.5 DAS GRML
-TRANSGENE MELANOM-MODELL (TG-3) 13
1.6 FRAGESTELLUNGEN 14
1.6.1 IMMUNTHERAPIE MIT VOM TUMORSTROMA ABGELEITETEN PEPTIDEN 14
1.6.2 IMMUNSUPPRESSIVE MECHANISMEN IM GRM
1 -TRANSGENEN MELANOM-MODELL 15
2 MATERIAL UND METHODEN 17
2.1 VERSUCHSTIERE UND MATERIAL 17
2.1.1 VERSUCHSTIERE 17
2.1.2 GEBRAUCHSFERTIGE KITS 17
2.1.3 CHEMIKALIEN, REAGENZIEN UND FERTIGLOESUNGEN 18
2.1.4 PUFFER, LOESUNGEN UND MEDIEN 19
2.1.5 ANTIKOERPER 20
2.1.6 PRIMER 21
2.2 METHODEN 22
2.2.1 ZELLKULTUR 22
2.2.1.1 ZELLZAHLBESTIMMUNG 22
2.2.1.2 ZELLKULTURFUHRUNG 22
2.2.2 TIEREXPERIMENTE, DC-VAKZINIERUNG UND ZELLISOLATIONSTECHNIKEN 22
2.2.2.1 TUMORTRANSPLANTATION BEI C57B16/J MAEUSEN 22
2.2.2.2 EINTEILUNG DER TUMORGRUPPEN FUER DAS LLA-TG-3 MODELL 23
2.2.2.3 ISOLIERUNG VON DENDRITISCHEN ZELLEN (DC) AUS DEM KNOCHENMARK 23
2.2.2.4 DC-VAKZINIERUNGSPROTOKOLL 24
2.2.2.5 ISOLIERUNG VON LYMPHOZYTEN AUS MILZ, LYMPHKNOTEN UND HERZBLUT 25
2.2.2.6 ENTNAHME UND FIXIERUNG DES TUMORGEWEBES 26
2.2.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 27
2.2.4 PROLIFERATIONSASSAY (
3
H-THYMIDIN-INKORPORATIONSASSAY) 27
2.2.5 FUNKTIONELLE ASSAYS 28
2.2.5.1 ZYTOTOXIZITAETS-/4^AY (
3L
CHROMIUM RELEASE ASSAY) 28
2.2.5.2 CFSE ZYTOTOXIZITAETS-./4S,SAY 29
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INHALTSVERZEICHNIS II
2.2.5.3 ELISPOT ASSAY (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT SPOT ASSAY) 29
2.2.6 IMMUNHISTOLOGIE 30
2.2.7 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 31
2.2.7.1 RNA-ISOLATION 31
2.2.7.2 CDNA-SYNTHESE 31
2.2.7.3 REAL TIME PCR FUER
11-10 UND TGF-SSL 32
2.2.8 STATISTISCHE ANALYSEN 33
3 ERGEBNISSE 35
3.1 IMMUNTHERAPIE MIT VOM TUMORSTROMA ABGELEITETEN PEPTIDEN 35
3.1.1 PROPHYLAKTISCHE VAKZINIERUNG MIT H2-K
B
-RESTRINGIERTEN ENDOGLIN-PEPTIDEN.... 35
3.1.1.1 TUMORWACHSTUM NACH PROPHYLAKTISCHER ENDOGLIN-PEPTID-VAKZINIERUNG
35
3.1.1.2 ENDOGLIN-PEPTID-VAKZINIERUNG INDUZIERT PEPTID-REAKTIVE T-ZELLEN
IN VIVO 36
3.1.2 PROPHYLAKTISCHE VAKZINIERUNG MIT H2-K
B
-RESTRINGIERTEN FAP-PEPTIDEN 38
3.1.2.1 TUMORWACHSTUM NACH PROPHYLAKTISCHER FAP-PEPTID-VAKZINIERUNG 38
3.1.2.2 FAP-PEPTID-VAKZINIERUNG INDUZIERT PEPTID-REAKTIVE T-ZELLEN IN
VIVO 39
3.2 IMMUNSUPPRESSIVE MECHANISMEN IM GRM
1 -TRANSGENEN MELANOM-MODELL 41
3.2.1 ZUNAHME AKTIVIERTER T-ZELLEN IN TUMORTRAGENDEN LLA-TG-3 MAEUSEN EX
VIVO. 42
3.2.2 VERMINDERTE PROLIFERATIONSKAPAZITAET NACH MITOGENSTIMULATION MIT
ZUNEHMENDER
TUMORLAST IN LLA-TG-3 MAEUSEN 45
3.2.3 VERMINDERTE EXPRESSION VON AKTIVIERUNGSMARKERN NACH
MITOGENSTIMULATION MIT
ZUNEHMENDER TUMORLAST IN LLA-TG-3 MAEUSEN 46
3.2.4 ZUNAHME REGULATORISCHER T-ZELLEN (CD4
+
CD25
+
FOXP3
+
)
IN TUMORTRAGENDEN
LLA-TG-3 MAEUSEN EX VIVO 49
3.2.5 ERHOEHTE 11-10
UND TGF-SSL MRNA-EXPRESSION IN LLA-TG-3 MAEUSEN MIT HOHER
TUMORLAST 50
4 DISKUSSION 53
4.1 IMMUNTHERAPIE MIT VOM TUMORSTROMA ABGELEITETEN PEPTIDEN 53
4.2 IMMUNSUPPRESSIVE MECHANISMEN IM GRML -TRANSGENEN MELANOM-MODELL 58
4.3 AUSBLICK 63
4.3.1 IMMUNTHERAPIE MIT VOM TUMORSTROMA ABGELEITETEN PEPTIDEN 63
4.3.2 IMMUNSUPPRESSIVE MECHANISMEN IM GRM
1 -TRANSGENEN MELANOM-MODELL 64
5 ZUSAMMENFASSUNG 65
5.1 IMMUNTHERAPIE MIT VOM TUMORSTROMA ABGELEITETEN PEPTIDEN 65
5.2 IMMUNSUPPRESSIVE MECHANISMEN IM GRML -TRANSGENEN MELANOM-MODELL 66
6 SUMMARY 67
6.1 IMMUNOTHERAPY WITH PEPTIDES DERIVED FROM TUMOR STROMA-ASSOCIATED
ANTIGENS 67
6.2 IMMUNOSUPPRESSIVE MECHANISMS OF GRML -TRANSGENIC MURINE MELANOMA 68
7 LITERATURVERZEICHNIS 69
INHALTSVERZEICHNIS III
8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 83
9 T ABELLENVERZEICHNIS 84
10 ABKUERZUNGEN 85
11 PUBLIKATIONEN 89
12 DANKSAGUNG 91
13 LEBENSLAUF 93
14 EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 95
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