Untersuchung humaner tissue-engineerter Knorpelkonstrukte im präfabrizierten Durchflussmodell der Maus:
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2013
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1 EINLEITUNG 5
2 ALLGEMEINER TEIL 7
2.1 TISSUE ENGINEERING 8
2.2 TISSUE ENGINEERING VON KNORPELGEWEBE 13
2.3 PRAEFABRIKATION 17
2.4 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 19
3 MATERIAL UND
METHODEN 21
3.1 VERSUCHSTIERE 21
3.2 KNORPELGEWEBE 22
3.3 ZELLTRAEGER 23
3.3.1 POLYURETHANKONSTRUKTE 23
3.3.2 FIBRINKLEBER 24
3.4 ANFERTIGUNG DER KONSTRUKTE 24
3.4.1 GEWEBEVERDAU UND ZELLISOLIERUNG 24
3.4.2 BESTIMMUNG VON ANZAHL UND VITALITAET DER ZELLEN 25
3.4.3 AUSSAAT IN MONOLAYER-KULTUR UND PASSAGIEREN DER ZELLEN 25
3.4.4 EINBRINGEN DER ZELLEN IN DAS KONSTRUKT UND 3-D-KULTUR 26
3.5 OPERATIONSTECHNIK UND VERSUCHSABLAUF 27
3.5.1 OPERATIONSBEDINGUNGEN UND NARKOSE 27
3.5.2 IMPLANTATION DER KONSTRUKTE 27
3.5.3 SCHWENK DES KONSTRUKTES 29
3.5.4 EXPLANTATION DER KONSTRUKTE 29
3.6 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 31
3.6.1 ANFERTIGUNG DER PARAFFINSCHNITTE 31
3.6.2 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG 31
3.6.3 AZAN-NOVUM-FAERBUNG 32
3.6.4 ALCIANBLAU-KEMECHTROT-FAERBUNG 32
3.6.5 SAFRANIN O/FAST GREEN-FAERBUNG 33
3.7 IMMUNHISTOCHEMIE 33
3.8 BIOCHEMISCHE ANALYSEN 34
3.8.1 VITALITAETSFAERBUNG 34
3
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3.8.2 PAPAINVERDAU 35
3.8.3 BESTIMMUNG DES DNA-GEHALTS 36
3.8.4 BESTIMMUNG DES GEHALTS AN GLYKOSAMINOGLYKANEN 37
3.9 STATISTIK 38
4 ERGEBNISSE 39
4.1 ZELLKULTUREN 39
4.2 VERSUCHSTIERE 39
4.3 AUSWERTUNG DER HISTOLOGISCHEN
UNTERSUCHUNGEN 40
4.3.1 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG 40
4.3.2 AZAN-NOVUM-FAERBUNG 42
4.3.3 ALCIANBLAU-KERNECHTROT-FAERBUNG 44
4.3.4 SAFRANIN-0 / FAST GREEN-FAERBUNG 46
4.4 AUSWERTUNG DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN UNTERSUCHUNGEN 48
4.5 AUSWERTUNG DER QUANTITATIVEN ANALYSEN 49
4.5.1 GEWICHT 50
4.5.2 DNA-ASSAY *. 51
4.5.3 GAG-ASSAY 52
5 DISKUSSION 54
5.1 KULTURBEDINGUNGEN UND DREIDIMENSIONALITAET 55
5.2 KNORPEL UND VASKULARISIERUNG 56
5.3 KNORPELQUALITAET UND VASKULAERE INTEGRATION 58
5.4 AUSBLICK 63
6 ZUSAMMENFASSUNG 64
7 LITERATURVERZEICHNIS 66
8 DANKSAGUNG 76
4
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