Evaluierung eines miniaturisierten, biofunktionalisierten Stents im Maus-Modell:
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2012
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGEN IX
I. EINLEITUNG 1
1.1. ATHEROSKLEROSE, KARDIOVASKULAERE ERKRANKUNGEN, EPIDEMIOLOGIE 1
1.2. THERAPIEN VON ATHEROSKLEROTISCHEN LAESIONEN UND IHRE KOMPLIKATIONEN
8
1.3. GESCHICHTE DER STENT-ENTWICKLUNG UND AKTUELLE STENT-BESCHICHTUNGEN
12
1.4. LIMITATIONEN DER STENT-LMPLANTATION 14
1.5. GRUNDLAGEN DER RE-ENDOTHELIALISIERUNG 17
1.5.1. CHEMOKINE UND KC BZW. GRO-A 20
1.5.2. DIE LEUKOZYTEN-ADHAESIONSKASKADE UND DAS P-SELEKTIN 25
1.5.3. DAS CATHELICIDIN LL-37 30
1.5.4. STAR-PEG UND RGD-PEPTID 30
1.5.5. THROMBOSE UND EXTRAZELLULAERE RNA 33
1.5.6. TIER-MODELLE ZUR RESTENOSE UND NEOINTIMA-FORMATION 33
1.5.6.1. RATTEN-CAROTISARTERIEN-MODELL 35
1.5.6.2. HYPERCHOLESTERINAEMISCHES KANINCHEN-ILIACA-MODELL 35
1.5.6.3. SCHWEINE-KORONARARTERIEN-MODELL 36
1.5.6.4. MAUS-MODELLE DER BALLON-ANGIOPLASTIE MIT STENT-LMPLANTATION 36
1.5.6.5. THROMBOSE UND RESTENOSE IN TIER-MODELLEN 41
1.5.6.6. ZEITLICHER VERLAUF DER WUNDHEILUNG NACH EINER
STENT-LMPLANTATION IM TIER-
MODELL 42
1.5.6.7. SICHERHEITSSTUDIEN 43
1.6. ZIEL DER ARBEIT 44
II. MATERIAL UND METHODEN 48
II.L. BESCHICHTUNGSVERFAHREN 48
11.1.1. HERSTELLUNG VON PVDF-FOLIEN 48
11.1.2. FUNKTIONALISIERUNG VON PVDF- UND NITINOL-FOLIEN 48
11.1.2.1. BESCHICHTUNG VON PVDF-FOLIEN UEBER CVD-POLYMERISATION 48
11.1.2.2. BESCHICHTUNG VON NITINOL-FOLIEN UEBER AMINOSILANISIERUNG 50
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INHALTSVERZEICHNIS
|V
11.1.3. HERSTELLUNG VON NITINOL-STENTS 51
11.1.4. BESCHICHTUNG VON NITINOL-STENTS 53
11.2. ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 54
11.2.1. ZELLKULTUR 54
11.2.2. ADHAESIONSVERSUCHE UNTER STATISCHEN BEDINGUNGEN 56
11.2.3. ADHAESIONSVERSUCHE UNTER FLUSSBEDINGUNGEN 56
11.2.3.1. ADHAESIONSVERSUCHE UNTER FLUSSBEDINGUNGEN AUF PVDF- ODER
NITINOL-
FOLIEN 57
11.2.3.2. ADHAESIONSVERSUCHE UNTER FLUSSBEDINGUNGEN AUF ZELL-MONOLAYERN
57
11.2.4. ZYTOTOXIZITAETSVERSUCHE/VIABILITAETSVERSUCHE 58
11.2.5. PROLIFERATIONSVERSUCHE 58
11.3. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 59
11.3.1. RNA-ISOLIERUNG AUS ZELLFREIEN IN VIVO SERUM-PROBEN UND IN VITRO
UEBERSTAENDEN 59
11.3.2. REVERSE TRANSKRIPTION DER RNA IN CDNA 60
11.3.3. QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 60
11.4. HISTOLOGISCHE METHODEN 61
11.4.1. HERSTELLUNG VON SCHNITTEN UND SCHLIFFEN AUS PRAEPARATEN 61
11.4.1.1. KRYOSCHNITTE 61
11.4.1.2. DIAMANTBAND-SCHLIFFE DER STENT-PRAEPARATE 63
11.4.2. HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 65
11.4.2.1. GIEMSA-FAERBUNGEN 65
11.4.2.2. HAEMATOXYLIN-EOSIN (HE)-FAERBUNG 66
11.4.2.3. MASSON-TRICHROM-GOLDNER-FAERBUNG 66
11.4.2.4. TOLUIDIN-BLAU-FAERBUNG 67
11.4.2.5. GOMORI-FAERBUNG 67
11.4.2.6. LADEWIG-FAERBUNG 68
11.4.2.7. EVG (ELASTICA VAN GIESON)-FAERBUNG 68
11.4.3. IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN 69
11.4.3.1. ENTPLASTEN VON IN TECHNOVIT 9100NEU EINGEBETTETEN
STENT-SCHLIFFEN 69
11.4.3.2. ANTIGEN-DEMASKIERUNG VON STENT-SCHLIFFEN 70
11.4.3.3. DETEKTION VON ZELLMARKERN UEBER
FLUORESZENZ-FARBSTOFF-KONJUGIERTE
SEKUNDAER-ANTIKOERPER 70
11.4.3.3.1. FAERBUNGEN VON STENT-SCHLIFFEN 70
11.4.3.3.2. NACHWEIS VON EPCS (BEI ADHAESIONSVERSUCHEN UNTER STATISCHEN
BEDINGUNGEN) 71
11.4.3.3.3. NACHWEIS VON A-SMOOTH MUSCLE ACTIN AUF HCARSMCS (BEI
ADHAESIONSVERSUCHEN UNTER STATISCHEN BEDINGUNGEN) 72
11.4.3.4. DETEKTION UEBER ALKALISCHE PHOSPHATASE 72
11.4.3.5. IN SITU DETEKTION VON EXTRAZELLULAERER RNA MITTELS
SYTORNASELECT 73
11.5. TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 74
11.5.1. HALTUNG UND FUETTERUNG DER TIERE 74
11.5.2. NARKOSE UND SCHMERZBEHANDLUNG DER VERSUCHSTIERE 74
11.5.3. DRAHT-INDUZIERTE ARTERIELLE VERLETZUNG UND RNASE A-BEHANDLUNG 75
11.5.4. STENT-IMPLANTATION 77
11.5.5. IN VIVO ADHAESION VON THROMBOZYTEN AN DER ARTERIA CAROTIS
COMMUNIS NACH
EINER DRAHT-INDUZIERTEN VERLETZUNG 78
11.6. BILDGEBENDE VERFAHREN 79
11.6.1. ZWEI-PHOTONEN LASER-SCANNING MIKROSKOPIE 79
11.6.2. KONFOKALE LASER-SCANNING MIKROSKOPIE 80
11.6.3. FLUORESZENZ-MIKROSKOPIE 81
11.6.4. MIKRO-COMPUTERTOMOGRAPHIE (MIKRO-CT) 81
11.6.5. INTRAVITALMIKROSKOPIE 82
11.7. STATISTISCHE AUSWERTUNG 82
III. ERGEBNISSE 83
III.L. DIE BESCHICHTUNG VON MINIATURISIERTEN STENTS MIT
NCO-SP(EO-S(FL/-PO),
RGD UND GRO-A REDUZIERT DIE IN-STENT-STENOSE IM MAUS-MODELL 84
111.1.1. ETABLIERUNG DES BESCHICHTUNGSVERFAHRENS UND ADHAESIONSVERSUCHE
UNTER
STATISCHEN BEDINGUNGEN 84
111.1.2. ADHAESIONSVERSUCHE UNTER FLUSSBEDINGUNGEN 92
111.1.3. PROLIFERATIONSVERSUCHE 93
INHALTSVERZEICHNIS
|VII
111.1.4. IN VITRO VIABILITAETSVERSUCHE 96
111.1.5. NACHWEIS DER BESCHICHTUNG UND IMPLANTATION DER MINI-STENTS 98
111.1.6. STENT-IMPLANTATION IN APCE^-MAEUSEN 100
111.1.6.1. NEOINTIMA-, THROMBUS-FORMATION UND RE-ENDOTHELIALISIERUNG
NACH EINER
STENT-IMPLANTATION IN APOE
+
-MAEUSEN FUER EINE ODER DREI WOCHEN 101
111.1.6.2. NEOINTIMA-FORMATION NACH EINER STENT-IMPLANTATION IN
APOE -MAEUSEN
UNTER EINER ANTIKOAGULATIONSTHERAPIE 105
111.2. MIT NCO-SP(EO-SFAF-PO), RGD, P-SELEKTIN UND LL-37 BESCHICHTETE
MINI-
STENTS SENKEN DIE NEOINTIMA-BILDUNG IM MAUS-MODELL 107
111.2.1. ADHAESION UNTER STATISCHEN BEDINGUNGEN 108
111.2.2. NACHWEIS DER BESCHICHTUNG MITTELS ZWEI-PHOTONEN-LASER-SCANNING-
MIKROSKOPIE 109
111.2.3. IMPLANTATION VON MIT P-SELEKTIN UND LL-37 BESCHICHTETEN STENTS
IN APOE --
MAEUSE UNTER EINER ANTIKOAGULATIONSTHERAPIE 110
111.2.4. RE-ENDOTHELIALISIERUNG NACH EINER IMPLANTATION VON MIT
P-SELEKTIN UND
LL-37 BESCHICHTETEN STENTS IN APO R ~-MAEUSEN UNTER EINER
ANTIKOAGULATIONSTHERAPIE 112
111.2.5. STENT-IMPLANTATION IN KNOCHENMARKTRANSPLANTIERTEN APOE -MAEUSEN
UNTER
EINER ANTIKOAGULATIONSTHERAPIE 113
111.3. RNASE A VERHINDERT EINE STARKE NEOINTIMA-BILDUNG NACH EINER
DRAHT
INDUZIERTEN ARTERIELLEN GEFAESSVERLETZUNG IM MAUS-MODELL 114
111.3.1. GEHALT AN UND QUELLE VON EXTRAZELLULAERER RNA IM SERUM VON APOE
MAEUSEN NACH EINER DRAHT-INDUZIERTEN ARTERIELLEN VERLETZUNG 115
111.3.2. RNASE A UND NEOINTIMA-FORMATION NACH DRAHT-INDUZIERTER
ARTERIELLER
VERLETZUNG VON APOE -MAEUSEN UNTER ATHEROGENER DIAET 120
111.3.3. GEHALT AN EXTRAZELLULAERER RNA NACH STIMULATION IN VITRO 122
111.3.4. IN VITRO ADHAESION VON MONONUKLEAEREN ZELLEN AUF HCARSMCS 123
111.3.5. VIABILITAET VERSCHIEDENER ZELLTYPEN UNTER RNASE A-BEHANDLUNG IN
VITRO ..124
111.3.6. ADHAESION VON LEUKOZYTEN AN DIE GEFAESSWAND NACH DRAHT-INDUZIERTER
ARTERIELLER VERLETZUNG IN APOE -MAEUSEN UNTER ATHEROGENER DIAET UND RNASE
A-BEHANDLUNG 126
IV. DISKUSSION 128
INHALTSVERZEICHNIS
|
VIII
IV.L. ETABLIERUNG EINES MINIATURISIERTEN STENTS IM MAUS-MODELL UND
REDUZIERUNG DER NEOINTIMA-FORMATION DURCH EINE BESCHICHTUNG MIT
NCO-SP(EO-STAF-PO), RGD UND GRO-A 128
IV.2. EINE BESCHICHTUNG MIT P-SELEKTIN UND LL-37 SCHUETZT VOR
NEOINTIMALER
HYPERPLASIE 141
IV.3. RNASE A VERRINGERT EINE EXZESSIVE NEOINTIMA-FORMATION UND
THROMBOZYTENAGGREGATION NACH EINER DRAHT-INDUZIERTEN ARTERIELLEN
VERLETZUNG IN APOE
1
--MAEUSEN 146
V. ZUSAMMENFASSUNG 152
VI. SUMMARY 155
VII. REFERENZEN 158
VIII. LEBENSLAUF XI
IX. DANKSAGUNG XIV
|
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