Modulation der Astrozytenfunktion über Vinculin-vermittelte Zellkontaktregulation: Analyse in vivo
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Elektronisch Software E-Book |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2012
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Beschreibung: | 119 S. Ill., graph. Darst. 12 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
BIBLIOGRAPHISCHE DARSTELLUNG
1 EINLEITUNG
1.1 CHARAKTERISTIKA UND BEDEUTUNG VON ASTROZYTEN 1.1.1 FUNKTIONEN VON
ASTROZYTEN 1.1.2 INTERAKTION VON ASTROZYTEN MIT ANDEREN ZELLTYPEN 1.1.3
BERGMANN-GLIAZELLEN DES KLEINHIRNS
1.2 ZELLADHAESION UND FUNKTION VON VINCULIN 1.2.1 AUFBAU VON VINCULIN
1.2.2 FUNKTION VON VINCULIN
1.3 DAS CRE/LOXP-SYSTEM
2 ZIELSETZUNG
3 MATERIAL UND METHODEN
3.1 MATERIAL
3.1.1 REAGENZIEN, PUFFER UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 3.1.2 OLIGONUKLEOTIDE
3.1.3 GROESSENSTANDARDS 3.1.4 ANTIKOERPER
3.1.5 MAUSLINIEN 3.1.6 KOMMERZIELLE REAKTIONSSYSTEME 3.1.7 GERAETE
3.2 METHODEN 3.2.1 SCHWANZBIOPSIEN 3.2.2 PRAEPARATION GENOMISCHER DNA AUS
SCHWANZBIOPSIEN 3.2.3 GENOTYPISIERUNG TRANSGENER MAEUSE
3.2.4 APPLIKATION VON TAMOXIFEN 3.2.5 PRAEPARATION VON GESAMT-RNA AUS
MAUSGEWEBE 3.2.6 REVERSE TRANSKRIPTION 3.2.7 QUANTITATIVE REAL TIME PCR
(QPCR) 3.2.8 HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN FUER DIE
FACS-SORTIERUNG 3.2.9 FACS-SORTIERUNG EINZELNER ZELLEN 3.2.10 NESTED-PCR
3.2.11 HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN FUER IMMUNZYTOCHEMIE 3.2.12
IMMUNZYFOCHEMISCHE ANALYSE VON AKUT ISOLIERTEN EINZELZELLEN 3.2.13
HERSTELLUNG VON VIBRATOMSCHNITTEN 3.2.14 IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSE VON
VIBRATOMSCHNITTEN 3.2.15 HERSTELLUNG VON KRYOSCHNITTEN 3.2.16
IMMUNHISTOCHEMSICHE ANALYSE VON KRYOSCHNITTEN
3.2.17 VERHALTENSEXPERIMENTE 3.2.18 DATENVERARBEITUNG UND STATISTIK
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INHALTSVERZEICHNIS
4 ERGEBNISSE 46
4.1 GENERIERUNG EINER MAUSLINIE MIT EINER INDUZIERBAREN UND
ASTROZYTEN-SPEZIFISCHEN DELETION DES VINCULINGENS 46
4.2 UEBERPRUEFUNG DES ASTROZYTEN-SPEZIFISCHEN VINCULIN-KNOCKOUTS 48
4.2.1 NACHWEIS DER REKOMBINATION DES VCL FLX -ALLELS IN DEN TRANSGENEN
GYSD-MAEUSEN 49 4.2.2 NACHWEIS DER REKOMBINATION DES VCL^-ALLELS IN
EINZELNEN ASTROZYTEN 50
4.2.3 NACHWEIS DER REKOMBINATION DES VCL FLX -ALLELS AUF MRNA-EBENE 58
4.2.4 NACHWEIS DER REKOMBINATION DES VCL FLX -ALLELS AUF PROTEIN-EBENE
60
4.3 AUSWIRKUNGEN DES ASTROZYTEN-SPEZIFISCHEN VINCULIN-KNOCKOUTS 64
4.3.1 AUSWIRKUNG DES VINCULIN-KNOCKOUTS AUF DIE LOKALISATION UND
EXPRESSION DES GAP JUNCTION- PROTEINS CONNEXIN43 64
4.3.2 AUSWIRKUNG DES VINCULIN-KNOCKOUTS AUF DIE GFAP-EXPRESSION 67
4.3.3 AUSWIRKUNGEN DES VINCULIN-KNOCKOUTS AUF DIE LOKALISATION UND
EXPRESSION DES GLUTAMAT-ASPARTAT-TRANSPORTERS GLAST 70
4.3.4 AUSWIRKUNG DES VINCULIN-KNOCKOUTS AUF DIE LOKALISATION UND
EXPRESSION DES EXTRAZELLULAEREN MATRIXPROTEINS LAMININ 72
4.3.5 AUSWIRKUNG DES VINCULIN-KNOCKOUTS AUF DIE LOKALISATION UND
EXPRESSION WEITERER FUER DIE FUNKTION VON ASTROZYTEN WICHTIGER PROTEINE
75
4.3.6 ANALYSE DES VERHALTENS VON MAEUSEN MIT ASTROZYTAEREM
VINCULIN-KNOCKOUT 77
5 DISKUSSION 83
5.1 ERFOLGREICHE GENERIERUNG DES ASTROZYTEN-SPEZIFISCHEN
VINCULIN-KNOCKOUTS IN VIVO 83
5.2 EFFEKTE DES ASTROZYTAEREN VINCULIN-KNOCKOUTS 86
5.3 UNTERSCHIEDLICHE VINCULIN-EXPRESSION BEI ASTROZYTEN IN VIVO UND IN
VITRO 94
5.4 AUSBLICK 96
6 ZUSAMMENFASSUNG 98
7 SUMMARY 100
8 DANKSAGUNG 102
9 LITERATURVERZEICHNIS 103
10 LEBENSLAUF 116
11 PUBLIKATIONSVERZEICHNIS 117
12 SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG 120
6
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