Reinigung, Charakterisierung und Verbreitung des Klasse-II-Benzoyl-Coenzym- A-Reduktase-Komplexes:
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2012
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Beschreibung: | 119 Bl. Ill., graph. Darst. 30 cm Beil. (1 S.) |
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 7
S U M M A R Y 10
EINLEITUNG 14
1. AROMATEN IN DER NATUR 14
2. ABBAU VON AROMATISCHEN VERBINDUNGEN DURCH MIKROORGANISMEN 14
3. DER BENZOYL-COA-ABBAUWEG 16
4. KLASSE-I-BCR AUS T H A U E R A A R O M A T I C A 18
5. VERBREITUNG DER KLASSE-I-BCR IN ANAEROBEN AROMATENABBAUERN 19
6. KLASSE-II-BCR AUS G E O B A C T E R M E T A L L I R E D U C E N S 21
7. MECHANISTISCHE UND ENERGETISCHE ASPEKTE VON BENZOYL-COA-REDUKTASEN 2
4
8. ZIELSETZUNG 2 7
MATERIAL U N D M E T H O D E N 2 8
1. MATERIAL 2 8
2. ZUECHTUNG 2 8
2.1 MEDIEN UND KULTIVIERUNG 2 9
2.2 ERNTE UND LAGERUNG VON ZELLEN 32
2.3 HERSTELLUNG VON ZELLEXTRAKTEN 3 2
3. SYNTHESE VON COA-ESTERN 3 3
3.1 BENZOYL-COA 3 3
3.2 1,5-DIENOYL-COA : 3 3
4. ENZYMATISCHE TESTS 35
4.1 1,5-DIENOYL-COA:METHYL VIOLOGEN-OXIDOREDUKTASE-AKTIVITAET 3 5
4.2 BENZOYL-COA-REDUKTION MIT EINEM ARTIFIZIELLEN ELEKTRONENDONORSYSTEM
37
4.3 BENZOYL-COA REDUKTION UEBER ELEKTRONENBIFURKATION 37
4.4 NAD(P)H:VIOLOGEN-OXIDOREDUKTASE-AKTIVITAET 3 9
4.5 2-OXOGLUTARAT:AKZEPTOR-OXIDOREDUKTASE-AKTIVITAET 3 9
5. ENZYMREINIGUNG 3 9
5.1 REINIGUNG D E R KLASSE-II-BCR ( B A M B C D E F G H I ) AUS D E M G.
METALLIREDUCENS- WILDTYP 4 0
5.2 ANREICHERUNG VON REKOMBINANTEN KLASSE-II-BCR-SUBKOMPLEXEN AUS E I N
E M TRANSGENEN G. METALLIREDUCENS 41
5.3 REINIGUNG D E R 2-OXOGLUTARAT:FERREDOXIN-OXIDOREDUKTASE (KGOR /( )
UND DES FERREDOXINS (FD/(,,0) AUS T. AROMATICA 4 2
5.4 REINIGUNG EINES FERREDOXINS AUS G. METALLIREDUCENS (FD (;MF,,) 4 4
5.5 ANREICHERUNG EINER K G O R AUS G. METALLIREDUCENS (KGOR (;M) 4 5
6. ANALYTISCHE METHODEN 4 7
6.1 PROTEINKONZENTRATIONEN 4 7
6.2 NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 4 7
5
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
6.3 WESTERN-BLOT-ANALYSE 4 8
6.4 BESTIMMUNG DER NATIVEN MOLEKULARMASSE 5 0
6.5 MASSENSPEKTROMETRISCHE PROTEINANALYSE 5 0
6.6 BESTIMMUNG DER ZUSAMMENSETZUNG AUS UNTEREINHEITEN 5 0
6.7 COFAKTORBESTIMMUNG 51
6.8 UV/VIS-SPEKTROSKOPIE 5 2
7. IN-SILICO- ANALYSE VON BAMB, B A M E UND B A M F 5 3
ERGEBNISSE 5 4
1. DIE VERBREITUNG DER KLASSE-II-BCR 5 4
1.1 IN-SILICO- ANALYSE VON BAMB- GENEN IN SEQUENZIERTEN GENOMEN UND
METAGENOMEN 5 4
1.2 SELENOCYSTEIN-ENTHALTENDE UNTEREINHEITEN DER KLASSE-II-BCR 5 8
1.3 /N-VZYRO-AKTIVITAET DER KLASSE-II-BCR IN OBLIGAT ANAEROBEN BAKTERIEN
61
1.4 NACHWEIS VON B A M B UEBER WESTERN-BLOT-ANALYSE 6 5
2. REINIGUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES VERMUTETEN HOCHMOLEKULAREN
BAMBCDEFGHI-KOMPLEXES (KLASSE-II-BCR) 6 5
2.1 STRATEGIEN ZUR ANREICHERUNG DES B A M B C D E F G H I - K O M P L E
X E S AUS D E M G. M E T A L L I R E D U C E N S - W M T Y P 6 5
2.2 REINIGUNG DER KLASSE-II-BCR AUS D E M G. METALLIREDUCENS- WILDTYP 6
7
2.3 ANREICHERUNG VON KLASSE-II-BCR-SUBKOMPLEXEN AUS E I N E M TRANSGENEN
G. METALLIREDUCENS 6 9
2.4 MOLEKULARE CHARAKTERISIERUNG D E R KLASSE-II-BCR-KOMPLEXE 7 2
2.5 ANREICHERUNG DER 2-OXOGLUTARAT:FERREDOXIN-OXIDOREDUKTASE UND DES
FERREDOXINS ALS MOEGLICHES ELEKTRONENLIEFERNDES SYSTEM IN G.
METALLIREDUCENS 7 7
2.6 UV/VIS-SPEKTROSKOPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER KLASSE-II-BCR-KOMPLEXE
7 9
2.7 KINETISCHE EIGENSCHAFTEN D E R KLASSE-II-BCR-KOMPLEXE 8 2
DISKUSSION 87
1. STRUKTUR UND FUNKTION VON KLASSE-I- UND KLASSE-II-BENZOYL-COA-
REDUKTASEN 87
1.1 MOLEKULARE ZUSAMMENSETZUNG 87
1.2 ROLLE VON COFAKTOREN IN KLASSE-II-BCRS 91
2. ELEKTRONENBIFURKATION ALS MOEGLICHER MECHANISMUS DER ATP-UNABHAENGIGEN
BENZOYL-COAREDUKTION 9 7
2.1 ELEKTRONENBIFURKATIONS-SYSTEME IN ANAEROBEN MIKROORGANISMEN 9 8
2.2 SZENARIEN FUER DIE ELEKTRONENBIFURKATION-GETRIEBENE B E N Z O Y L - C
O A - R E D U K T I O N 101
3. VERBREITUNG VON KLASSE-II-BENZOYL-COA-REDUKTASEN 104
ANHANG : 108
LITERATURVERZEICHNIS 110
ABKUERZUNGS VERZEICHNIS 117
DANKSAGUNG 118
LEBENSLAUF 119
6
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