Funktionelle Charakterisierung der BetaV348M-Mutation des epithelialen Natriumkanals (ENaC):
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INHALT
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
1.1 HINTERGRUND UND ZIELE 1
1.2 METHODEN 1
1.3 ERGEBNISSE 1
1.4 PRAKTISCHE SCHLUSSFOLGERUNGEN 2
2. SUMMARY 3
2.1 BACKGROUND AND AIM OF THE STUDY 3
2.2 METHODS 3
2.3 RESULTS 3
2.4 CONCLUSION 3
3. EINLEITUNG 4
3.1 ZYSTISCHE FIBROSE (CF) 4
3.2 STRUKTUR VON ENAC 5
3.3 LOKALISATION UND FUNKTION VON ENAC 7
3.4 PATHOPHYSIOLOGIE DES LUNGENPHAENOTYPS BEI CF 10
3.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT: FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER
SSV348MMUTATION 12
4. MATERIAL UND METHODEN 13
4.1 XENOPUS LAEVIS OOZYTEN ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYSTEM 13
4.2 LOESUNGEN UND CHEMIKALIEN 15
4.3 CRNA-HERSTELLUNG 16
4.4 ISOLATION UND INJEKTION DER OOZYTEN 16
4.5 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE METHODEN 18
4.5.1 ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME 18
4.5.2 MESSABLAUF 19
4.6 PROTEINNACHWEIS 20
4.6.1 NACHWEIS MEMBRANSTAENDIGER PROTEINE DURCH BIOTINYLIERUNG 20
4.6.2 PROTEINNACHWEIS DURCH WESTEM BLOT 22
4.7 STATISTIK 23
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5. ERGEBNISSE 24
5.1 DIE SSV348M-MUTATION STIMULIERT DEN ENAC-VERMITTELTEN NA + -STROM 24
5.2 DER STIMULATORISCHE EFFEKT DER SSV348M-MUTATION IST VOM NA*-GEHALT
DER OOZYTEN WEITGEHEND UNABHAENGIG 26
5.3 DIE SSV348M-MUTATION ERHOEHT DIE MITTLERE P 0 VON ENAC 27
5.4 CHYMOTRYPSIN STIMULIERT ASSYENAC MEHR ALS ASSV348MYENAC 30
5.5 DIE SSV348M-MUTANTE WIRD DURCH S3969 WENIGER AKTIVIERT ALS DER
WILDTYP 32
5.7 VERSCHIEDENE MUTATIONEN AN SSV348 36
5.7.1 AMINOSAEURE-MUTATIONEN ZEIGEN UNTERSCHIEDLICHE EFFEKTE AUF DIE
ENAC-FUNKTION 36 5.7.2 EFFEKTE DER MUTATIONEN AUF DIE PROTEINEXPRESSION
38
5.7.3 PROTEOLYTISCHE AKTIVIERUNG DER MUTIERTEN KANAELE MIT CHYMOTRYPSIN
41
6. DISKUSSION 43
6.1 XENOPUS LAEVIS OOZYTEN ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYSTEM 43
6.2 EINFLUESSE DER CRNA-QUALITAET 44
6.3 EINFLUSS DER INTRAZELLULAEREN NA*-KONZENTRATION 45
6.4 MITTLERE P 0 45
6.5 PROTEOLYTISCHE KANALAKTIVIERUNG MIT CHYMOTRYPSIN 47
6.6 ENAC-AKTIVATOR S3969 48
6.7 WEITERE SSV348-MUTANTEN UND ENAC-MODELL 49
6.8 KLINISCHE RELEVANZ DER SSV348M-MUTATION 52
7. SCHLUSSFOLGERUNG 54
8. LITERATURVERZEICHNIS 55
9. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 62
10. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 63
10.1 ABKUERZUNGEN 63
10.2 NOMENKLATUR DER AMINOSAEUREN 65
10.3 EINHEITEN 65
11. VORVEROEFFENTLICHUNGEN 66
12. ANHANG 67
13. DANKSAGUNG 68
14. LEBENSLAUF 70
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