Wirkungen des HDAC-Inhibitors Valproinsäure auf den Tumorsuppressor PTEN:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Göttingen
Cuvillier
2013
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IMAGE 1
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS HI
ZUSAMMENFASSUNG. XI
SUMMARY XIII
1. EINLEITUNG 1
1.1. HISTONDEACETYLASEN (HDACS) UND HDAC-INHIBITOREN 1
1.1.1. LYSIN-ACETYLIERUNG: BEDEUTUNG FUER HISTON- UND
NICHT-HISTON-PROTEINE 2 1.1.2. HISTONDEACETYLASEN 4
1.1.3. HDACS UND KREBS 8
1.1.4. HDAC-INHIBITOREN 9
1.1.5. HDAC-INHIBITOREN ALS POTENZIELLE TUMORTHERAPEUTIKA 10
1.2. PHOSPHATASE AND TENSIN HOMOLOG DELETED ON CHROMOSOME 10 (PTEN) 12
1.2.1. PTEN-STRUKTUR 13
1.2.2. P7"/V-EXPRESSION 14
1.2.3. POSTTRANSLATIONALE REGULATION VON PTEN 16
1.2.4. PTEN-SIGNALWEGE: KONTROLLE ZAHLREICHER ZELLULAERER PROZESSE 21
1.2.5. DIE ROLLE VON PTEN BEI NICHT-NEOPLASTISCHEN ERKRANKUNGEN 25
1.3. ZIELSETZUNG DER ARBEIT 27
2. MATERIAL UND METHODEN 28
2.1. MATERIAL 28
2.2. METHODEN 45
2.2.1. ZELLKULTUR 45
2.2.2. BIOCHEMISCHE METHODEN 48
2.2.3. STATISTISCHE AUSWERTUNG 57
2.2.4. KONFOKALE LASERMIKROSKOPIE 57
2.2.5. PE-ANNEXIN-V FAERBUNG ZUR ERMITTLUNG VON APOPTOSE 59
2.2.6. FACS-ANALYSE 59
2.2.7. KULTIVIERUNG VON ESCHERICHIA COLI (E.COLI) 60
2.2.8. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 60
3. ERGEBNISSE 69
3.1. VPA FUEHRT ZU EINER ERHOEHUNG DER MRNA-MENGE VON PTEN 72
3.2. VPA BEEINFLUSST DIE REGULATION DER PTEN-MENGE AUF PROTEINEBENE 74
3.2.1. DIE HEMMUNG DES ABBAUS VON PTEN DURCH DAS CALPAIN-2-PROTEASE
DEGRADATIONSSYSTEM DURCH VPA TRAEGT MOEGLICHERWEISE ZUR ERHOEHUNG DER
PTEN-PROTEINMENGE DURCH VPA BEI. 74
3.2.2. HDAC-INHIBITOR-BEDINGTE VERAENDERUNGEN POSTTRANSLATIONALER
MODIFIKATIONEN, DIE MIT DER PTEN-STABILITAET ASSOZIIERT SIND, LIEFERN
KEINE HINREICHENDE ERKLAERUNG FUER DIE PTEN-INDUKTION. 77
3.3. VPA BEEINFLUSST DIE MULTI-MONOUBIQUITINIERUNG VON PTEN 87
3.3.1. HDAC-INHIBITOREN STIMULIEREN DIE MONO- BIS TRIUBIQUITINIERUNG VON
TRANSFIZIERTEM PTEN IN PTEN-DEFIZIENTEN PC3-ZELLEN. 87
I
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.2. DIE LYSINRESTE 13 UND 289 SIND NICHT DIE EINZIGEN
UBIQUITINIERUNGSSTELLEN, DIE FUER DIE VPA-BEDINGTE ERHOEHUNG DER MONO- BIS
TRIUBIQUITINIERUNG VON PTEN EINE ROLLE SPIELEN. 92
3.4. HDAC-INHIBITOREN BEEINFLUSSEN DIE UBIQUITIRI-LIGASE UND DAS
DEUBIQUITINIERUNGSSYSTEM VON PTEN 95
3.4.1. HDAC-INHIBITOREN BEWIRKEN EINE VERSTAERKTE WECHSELWIRKUNG VON PTEN
MIT DER PTEN-UBIQUITIN-LIGASE NEDD4-1 UND EINE VERMINDERUNG DER
NEDD4-1-PROTEINMENGE 95
3.4.2. VPA FUEHRT ZU EINER VERMINDERUNG DER PROTEINMENGE DES
PTEN-DEUBIQUITINIERUNGSSYSTEMS UND VERSTAERKT DESSEN WECHSELWIRKUNG MIT
PTEN 99
3.5. HDAC-INHIBITOREN BEEINFLUSSEN DIE FUNKTION VON PTEN. 109
3.5.1. HDAC-INHIBITOREN BEEINFLUSSEN DIE LOKALISATION VON WT-PTEN UND
K13E-, K289E- BZW. K13E/K289E-MUTIERTEM PTEN. 109
3.5.2. VPA-BEHANDLUNG UND DIE TRANSFEKTION VON WT-PTEN, KI3E-, K289E-
UND KI3E/K289E-PTEN INDUZIEREN APOPTOSE IN PC3-ZELLEN 114
3.5.3. VPA STELLT DIE FAEHIGKEIT DER PTEN-K13E, -K289E- UND
K13E/K289E-MUTANTEN NUKLEARE PHOSPHO-AKT-MENGEN ZU REDUZIEREN WIEDER
HER. 116
3.5.4. VPA BEEINFLUSST DIE WECHSELWIRKUNG VON PTEN MIT VERSCHIEDENEN
BEKANNTEN UND NEU IDENTIFIZIERTEN INTERAKTIONSPARTNERN VON PTEN. 118
4. DISKUSSION 122
4.1. EINFLUSS VON VPA AUF DIE MRNA- UND PROTEINMENGE VON PTEN 123
4.2. BEDEUTUNG DER MODULATION POSTTRANSLATIONALER MODIFIKATIONEN VON
PTEN TUER DIE HDAC-INHIBITOR-BEDINGTE INDUKTION DER PTEN-PROTEINMENGE 126
4.3. BEDEUTUNG DER LYSINRESTE K13 UND K289 FUER DIE VPA-INDUZIERTE
MULTI-MONOUBIQUITINIERUNG VON PTEN 130
4.4. BEDEUTUNG DER PTEN-UBIQUITINLIGASE NEDD4-1 UND DES
PTEN-DEUBIQUITINIERUNGSSYSTEMS FUER DIE ERHOEHUNG DER
PTEN-MULTI-MONOUBIQUITINIEMNG DURCH HDAC-INHIBITOREN 133
4.5. EINFLUSS VON HDAC-INHIBITOREN AUF DIE LOKALISATION UND FUNKTION VON
PTEN 138 4.5.1. EINFLUSS VON HDAC-INHIBITOREN AUF DIE LOKALISATION VON
PTEN 138 4.5.2. EINFLUSS DER VPA-BEHANDLUNG AUF DIE FAEHIGKEIT VON
WT-PTEN UND PTEN-UBIQUITINIERUNGSMUTANTEN ZUR DEPHOSPHORYLIERUNG VON
P-AKT UND ZUR
APOPTOSEINDUKTION 141
4.5.3. WIRKUNG VON VPA AUF DIE WECHSELWIRKUNG VON PTEN MIT MAGI-2 UND
DEN NEU IDENTIFIZIERTEN INTERAKTIONSPARTNERN HDAC1, HDAC2 UND CENP-E 144
4.6. SCHLUSSFOLGERUNG 147
LITERATURVERZEICHNIS. 149
DANKSAGUNG 165
II |
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