Charakterisierung eines Autoantikörpers gegen Adipozyten:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS I
INHALTSVERZEICHNIS IV
ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS VII
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 DIE BEDEUTUNG VON FETTGEWEBE 3
2.2 LIPODYSTROPHIEN 4
2.2.1 KONGENITALE GENERALISIERTE LIPODYSTROPHIE (CGL) 5
2.2.2 FAMILIAERE PARTIELLE LIPODYSTROPHIE (FPLD) 5
2.2.3 ERWORBENE PARTIELLE LIPODYSTROPHIE (BARRAQUER-SIMONS-SYNDROM) 6
2.2.4 LIPODYSTROPHIE BEI HLV-INFIZIERTEN PATIENTEN 7
2.2.5 LOKALISIERTE LIPODYSTROPHIEN 7
2.2.6 ERWORBENE GENERALISIERTE LIPODYSTROPHIE 8
2.2.6.1 LAWRENCE-SYNDROM 8
2.2.6.2 FALLREPORT JENA 11
2.3 DIE PERILIPINFAMILIE STRUKTURELLER LIPIDSPEICHERPROTEINE 13
2.3.1 DIE PAT-PROTEINE 13
2.3.2 PERILIPIN UND SEINE ROLLE ALS INTRAZELLULAERES PROTEIN 14
3 ZIELE DER ARBEIT 17
4 METHODIK 19
4.1 REAGENZIEN 19
4.1.1 MEDIEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGIE 19
4.1.2 PUFFERUND LOESUNGEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGISCHEN ARBEITEN 19
4.1.3 PUFFER UND LOESUNGEN FUER DIE ANALYSE DER PROTEINEXPRESSION 20
4.1.4 PUFFER AUS DER ANTI-FETT-ANTIKOERPER-PRAEPARATION 21
4.2 DER PERILIPIN-REFERENZ-CDNA-KLON ALS AUSGANGSPUNKT FUER DIE
HERSTELLUNG
ALLER KONSTRUKTE 22
4.3 STANDARDMETHODEN 23
4.3.1 DNA-MINI-PRAEPARATION 23
4.3.2 AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE 23
IV
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4.3.3 AUFREINIGUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSE-GELEN 24
4.3.4 RESTRIKTIONSVERDAU 24
4.3.5 DNA-FAELLUNG 25
4.3.6 DEPHOSPHORYLIERUNG VON LINEARISIERTEN PLASMIDEN 25
4.3.7 LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN 25
4.3.8 TRANSFORMATION VON E. COLI 26
4.3.9 DNA-SEQUENZIERUNG 27
4.3.10 HERSTELLUNG VON GLYCERINKULTUREN 27
4.4 HERSTELLUNG DER PERILIPIN-EXPRESSIONSKONSTRUKTE 28
4.4.1 DER PET-19B-VEKTOR 28
4.4.2 VOLLLAENGEN-PERILIPIN 28
4.4.3 PCR-BASIERTE HERSTELLUNG VON PERILIPIN-FRAGMENTEN 30
4.4.4 HERSTELLUNG VON STUECK 3 32
4.5 ANALYSE DER PERILIPIN-EXPRESSIONSKONSTRUKTE 35
4.5.1 PROTEINEXPRESSION IN E. COLI BL21DE3 35
4.5.2 GEWINNUNG DER PROBEN FUER DIE SDS-PAGE 35
4.5.3 SDS-ELEKTROPHORESE 35
4.5.4 WESTERN BLOT 36
4.5.5 DER ANTI-FETT-ANTIKOERPER 37
4.5.6 HERSTELLUNG EINER ANTI-FETT-ANTIKOERPER-PRAEPARATION MIT GERINGERER
KREUZREAKTIVITAET GEGEN E. COLI-PROTEINE 38
4.5.6.1 HERSTELLUNG EINER E. COLI BL21DE3-LYSATSAEULE 38
4.5.6.2 DEPLETION DER E. COLI-PROTEINE ERKENNENDEN ANTIKOERPERSPEZIES
AUS DER ANTI-FETT-ANTIKOERPER-PRAEPARATION 39
4.5.6.3 KONZENTRIERUNG DER PRAEADSORBIERTEN ANTI-FETT-ANTIKOERPER 39
5 ERGEBNISSE 41
5.1 STRATEGIE ZUR IDENTIFIZIERUNG VON DURCH ANTI-FETT-IGG ERKANNTEN
PERILIPIN-SEQUENZABSCHNITTEN 41
5.1.1 ANTIKOERPER-ERKENNUNG VON VOLLLAENGEN-PERILIPIN UND
PET-19B-VEKTOR 42
5.1.2. ANTIKOERPER-ERKENNUNG DER STUECKE 1, 2 UND 3 44
5.1.2.1 STUECK 1 44
5.1.2.2 STUECK 2 45
5.1.2.3 STUECK 3 46
V
5.1.2.4 SCHLUSSFOLGERUNG DER BINDUNG DES ANTI-FETT-IGG AN DIE STUECKE 1,
2 UND 3 47
5.1.3 ANTIKOERPER-ERKENNUNG DER STUECKE 4, 5, 6 UND 7 47
5.1.3.1 STUECK 4 47
5.1.3.2 STUECK 5 48
5.1.3.3 STUECK 6 50
5.1.3.4 STUECK 7 50
5.1.3.5 SCHLUSSFOLGERUNG DER ANTI-FETT-LGG-BINDUNG AN DIE STUECKE
4 BIS 7 52
5.1.4 ANTIKOERPERBINDUNG AN STUECK 8 52
5.1.5 ZUSAMMENFASSUNG DER ERKENNUNG DER PERILIPIN-TEILSTUECKE DURCH
DEN ANTI-FETT-IGG 53
5.2 IDENTIFIZIERUNG VON DURCH ANTI-FETT-IGG LL-ERKANNTEN PERILIPIN-
SEQUENZABSCHNITTEN 55
5.2.1 AUFREINIGUNG DES ANTI-FETT-ANTIKOERPERS 55
5.2.2 DETEKTION MIT DEM ANTI-FETT-IGG II 55
6 DISKUSSION 57
6.1 DISKUSSION DER ERGEBNISSE DER ANTI-FETT-ANTIKOERPERBINDUNG AN
PERILIPIN ... 57
6.1.1 DETEKTION MIT DEM ANTI-FETT-IGG 57
6.1.2 DETEKTION MIT DEM ANTI-FETT-IGG II 58
6.1.3 METHODISCHE PROBLEME 59
6.2 AUSSAGEN UEBER DAS KRANKHEITSBILD 61
6.2.1 PERILIPINFRAGMENTE ALS PEPTIDE DES PROTEASOMABBAUS UND DER
MHC-KLASSE-I-PRAESENTATION 62
6.2.2 DER ANTI-FETT-IGG ALS AUSLOESER FUER
EINE KOMPLEMENTAKTIVIERUNG 62
6.2.3 ANALYSE DER ANTI-FETT-LGG-BINDUNGSSTELLEN ALS MHC-BINDENDE PEPTIDE
DES PERILIPINS UNTER BERUECKSICHTIGUNG VON PROTEASOMSCHNITTSTELLEN ....
63
6.2.4 PERILIPIN-MUTATIONEN ALS URSACHE FUER LIPODYSTROPHIEN 64
7 SCHLUSSFOLGERUNGEN 65
8 LITERATUR- UND QUELLENVERZEICHNIS 66
9 ANHANG 70
9.1 LEBENSLAUF 70
9.2 DANKSAGUNG 71
9.3 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 72
VI
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