Funktionelle Charakterisierung ausgewählter Proteine aus dem Augenfleckapparat von Chlamydomonas reinhardtii (Chlorophyceae): = Functional characterization of selected proteins from the eyespot apparatus of Chlamydomonas reinhardtii (Chlorophyceae)
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INHALTSVERZEICHNIS
1 INHALTSVERZEICHNIS
1 INHALTSVERZEICHNIS .. 3
2 ZUSAMMENFASSUNG 7
3 ABSTRACT 9
4 EINLEITUNG 11
4.1 DER MODELLORGANISMUS CHLAMYDOMONAS REINHARDTII 11
4.2 STRUKTUR UND FUNKTION DES AUGENFLECKAPPARATS 13
4.3 PHOTOREZEPTOREN 17
4.3.1 CHANNELRHODOPSINE 18
4.3.2 PHOTOTROPIN 20
4.4 PHOTOTAXIS 24
4.5 ZIRKADIANE PHOTOTAXIS 26
4.6 PROTEOMANALYSE DES AUGENFLECKAPPARATS 27
4.6.1 CHRC AS UND C_20380 28
4.6.2 MCP 29
4.6.3 SOUL3 30
4.6.4 CHANNELRHODOPSINE UND PHOTOTROPIN 31
4.7 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 31
§ MATERIAL UND METHODEN 33
5.1 MATERIAL 33
5.1.1 CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 33
5.1.2 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 36
5.1.3 GERAETE 38
5.1.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE KITS 39
5.1.5 ANTIKOERPER 39
5.2 VERWENDETE ORGANISMEN UND KULTURBEDINGUNGEN 41
5.2.1 ALGENSTAEMME UND -KULTIVIERUNG 41
5.2.2 BAKTERIENSTAEMME UND -KULTIVIERUNG 42
5.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 43
5.3.1 VERWENDETE UND ERZEUGTE PLASMIDE 43
5.3.2 PCR 43
5.3.3 LINKER-HERSTELLUNG 44
5.3.4 RESTRIKTIONSVERDAU 44
5.3.5 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 45
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IMAGE 2
INHAL TSVERZEICHNIS
5.3.6 DNA-AUFREINIGUNG 45
5.3.7 LIGATION 45
5.3.8 TRANSFORMATION VON E. COLI 45
5.3.9 PLASMIDISOLATION (MINIPREP) 46
5.3.10 DNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 46
5.3.11 DNA-SEQUENZIERUNG 47
5.3.12 TRANSFORMATION VON C. REINHARDTII WTL37C UND SELEKTION DER
TRANSFORMIERTEN STAEMME 47
5.3.13 GLASPERLEN-REINIGUNG 49
5.4 ZELLBIOLOGISCHE UND PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 49
5.4.1 ZELLZAHLBESTIMMUNG 49
5.4.2 PHOTOTAXIS-ASSAY 49
5.4.3 MESSUNG DER PHOTOSYNTHESELEISTUNG 51
5.4.4 UEBEREXPRESSION VON 6XHIS-MCP IN E. COLI 53
5.4.5 AUFREINIGUNG VON 6XHIS-MCP FUER DIE IMMUNISIERUNG 53
5.4.6 PROTEINROHEXTRAKTHERSTELLUNG 55
5.4.7 METHANOL/CHLOROFORM-FAELLUNG 55
5.4.8 PROTEINBESTIMMUNG NACH NEUHOFF 56
5.4.9 SDS-PAGE .-. 56
5.4.10 COOMASSIE-FAERBUNG DER SDS-GELE 57
5.4.11 VORBEREITUNG DER SDS-GELE FUER MASSENSPEKTROMETRISCHE ANALYSEN 57
5.4.12 VORBEREITUNG DER SDS-GELE FUER DIE MCP-KANINCHEN-IMMUNISIERUNG 58
5.4.13 MCP-ANTIKOERPERHERSTELLUNG 58
5.4.14 WESTERN BLOT 59
5.4.15 ISOLATION DES STROMAS, DER CHLOROPLASTENMEMBRANEN UND DER AXONEMA
60 5.4.16 AUGENFLECKISOLATION 60
5.4.17 AUGENFLECK-FRAKTIONIERUNG UEBER EINEN LINEAREN GLYCEROLGRADIENTEN
61 5.4.18 HERSTELLUNG EINES LINEAREN GLYCEROLGRADIENTEN 62
5.5 SEQUENZ- UND DATENANALYSEN 62
5.5.1 DNA-SEQUENZANALYSEN 62
5.5.2 BIOINFORMATISCHE ANALYSEN 62
5.5.3 BESTIMMUNG DES APPARENTEN MOLEKULARGEWICHTS 63
5.5.4 QUANTIFIZIERUNG DER WESTERN BLOTS 63
5.5.5 AUSWERTUNG DER PHOTOTAXIS-ASSAYS 63
5.5.6 STATISTISCHE AUSWERTUNG 64
6 ERGEBNISSE 65
6.1 IN TTV/CO-CHARAKTERISIERUNG VON MCP, CAERCAS UND C_20380 65 6.2
SUBZELLULAERE LOKALISATION DIVERSER PROTEINE IN C. REINHARDTII 69
6.3 MCP-PRODUKTION IN E. COLI UND DESSEN AUFREINIGUNG 72
6.4 AUSWAHL DES GEEIGNETEN MCP-ANTIKOERPERS 73
6.5 KLONIERUNGSSTRATEGIEN 74
6.5.1 MCP-UEBEREXPRESSIONSVEKTOR FUER E. COLI (PQE-32MCP) 75
6.5.2 MCP-UEBEREXPRESSIONSVEKTOR FUER C. REINHARDTII (PDI8MCP) 76
6.5.3 CARCAS-UEBEREXPRESSIONSVEKTOR FUER C. REINHARDTII (PDI8CAS) 77
6.6 UEBEREXPRESSION VON MCP UND CVIRCAS IN C. REINHARDTII 78
6.6.1 SELEKTION DER MCP- UND C/W-CAS-UEBEREXPRIMIERENDEN STAEMME 78 6.6.2
MORPHOLOGIE DER UEBEREXPRESSIONSSTAEMME 80
IMAGE 3
INHAL TSVERZEICHNIS
6.6.3 STABILITAETSANALYSE DER MCP- UND CARCAS-UEBEREXPRIMIERER 82
6.6.4 PHOTOTAKTISCHES VERHALTEN DER UEBEREXPRESSIONSSTAEMME 83
6.6.4.1 PHOTOTAKTISCHES VERHALTEN DER MCP-UEBEREXPRIMIERER IN
ABHAENGIGKEIT DER LICHTINTENSITAET UND TAGESZEIT 84
6.6.4.2 EINFLUSS DER LICHTINTENSITAET, DER LICHTQUALITAET UND DER
EXTRAZELLULAEREN CA 2+ KONZENTRATION AUF DAS PHOTOTAKTISCHE VERHALTEN DER
CHRCAS UEBEREXPRIMIERER 86
6.6.5 PHOTOSYNTHESELEISTUNG DER CARCAS-UEBEREXPRIMIERER 90
6.6.6 EINFLUSS DER EXTRAZELLULAEREN CA 2+ -KONZENTRATION AUF DIE CHRC
ASUEBEREXPRIMIERER 91
6.7 KOMPLEXBILDUNG VERSCHIEDENER AUGENFLECKPROTEINE 92
6.8 PHOTOTROPIN-ABHAENGIGE EXPRESSION VERSCHIEDENER AUGENFLECKPROTEINE 94
6.8.1 TAGESZEITABHAENGIGE KINETIK DER CHRL- UND PHOTOTROPIN-EXPRESSION IN
DEN STAEMMEN 302CW15 UND G5 94
6.8.2 CHR-EXPRESSION IN DEN PHOTOTROPIN-MUTIERTEN STAEMMEN G5 UND G5-KIN
97 6.8.3 CHR2-EXPRESSION VERSCHIEDENER ACHRL-ZELLLINIEN 100
6.8.4 EINFLUSS DES PHOTOTROPIN AUF C 20380 101
6.9 EINFLUSS VERSCHIEDENER AUGENFLECKPROTEINE AUF DAS EXPRESSIONSNIVEAU
ANDERER AUGENFLECKPROTEINE 103
7 DISKUSSION 104
7.1 CHRC AS UND MCP BEEINFLUSSEN DIE PHOTOTAXIS 104
7.2 PHOTOTROPIN REGULIERT DIE AUGENFLECKGROESSE, DEN CHRL-GEHALT UND DIE
PHOTOTAXIS 110
7.3 SOUL3 ALS MULTIMER 115
7.4 ANDERE PROTEINKOMPLEXE 116
7.5 AUSBLICK 118
8 ANHANG 120
8.1 MCP-DATEN AUS DER MASSENSPEKTROMETRIE 120
8.2 ERGAENZENDE DATEN ZU DEN PHOTOTAXIS-MESSUNGEN 121
8.3 DNA-SEQUENZEN 123
8.3.1 PRIMER UND OLIGONUKLEOTIDE 123
8.3.2 CDNA-SEQUENZEN 123
8.3.3 PLASMID-SEQUENZEN 124
8.4 AMINOSAEURE-SEQUENZEN 135
9 LITERATURVERZEICHNIS 137
10 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 153
11 T ABELLEN VERZEICHNIS 155
12 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 156
13 DANKSAGUNG 159
IMAGE 4
INHAL TS VERZEICHNIS
14 EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 160
15 PUBLIKATIONEN 161
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| spelling | Trippens, Jessica Verfasser aut Funktionelle Charakterisierung ausgewählter Proteine aus dem Augenfleckapparat von Chlamydomonas reinhardtii (Chlorophyceae) = Functional characterization of selected proteins from the eyespot apparatus of Chlamydomonas reinhardtii (Chlorophyceae) vorgelegt von Jessica Trippens Functional characterization of selected proteins from the eyespot apparatus of Chlamydomonas reinhardtii (Chlorophyceae) 2013 161 S. Ill., graph. Darst. 30 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2013 Chlamydomonas reinhardii (DE-588)4147746-7 gnd rswk-swf Grünalgen (DE-588)4072124-3 gnd rswk-swf Rhodopsin (DE-588)4132286-1 gnd rswk-swf Phototaxis (DE-588)4174557-7 gnd rswk-swf Phototropin (DE-588)4767756-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Chlamydomonas reinhardii (DE-588)4147746-7 s Phototropin (DE-588)4767756-9 s Phototaxis (DE-588)4174557-7 s Rhodopsin (DE-588)4132286-1 s DE-604 Grünalgen (DE-588)4072124-3 s Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus-46657 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus-46657 Resolvingsystem kostenfrei Volltext http://opus4.kobv.de/opus4-fau/frontdoor/index/index/docId/3383 Verlag kostenfrei Volltext http://d-nb.info/1035541122/34 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=026240122&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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