Charakterisierung eines neuen regulatorischen Elements im V_1tnH-Cluster und dessen potentieller Einfluss auf die VDJ-Rekombination:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
3
INHALTSVERZEICHNIS
- INHALTSVERZEICHNIS ...... ...... ................. ..... ....... ....
...... ..... ...... ....... ..3
1. ZUSAMMENFASSUNG... ....... ..... ...... .... ..... ..... ..... ......
.... .........6
2. SUMMARY.......... ................. ...... ...... ................. 7
3. EINLEITUNG. ...... ... ....... ...... ...... ......
........................... ....... ...... ...... 8
3.1 IMMUNGLOBULINE 8
3.2 INMUIIGKIBULIII-LOEL._~- 3.2.1 SCHWERKENEN-LOCUS (IGH) 10
3.2.2 ZWEI LEICHTKENENLOCI (IGL) 11
3.3 MECHANISMUS DER VDJ-REKOMBINATION 12
3.4 ENTWICKLUNG DER B-LYMPHOZYTEN 14
3.4.1 B-ZELLSTADIEN 14
3.4.2 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 19
3.5 REGULATION DER VDJ-REKOMBINATION 21
3.S. 1 KONTROLLE DER ZUGAENGLICHKEIT 22
3.S.2 CIS-REGULATORISCHE ELEMENTE 26
3.6 IVAR-ELEMENTE 28
4. FRAGESTELLUNG/ZIELSETZUNG.... ...... - ..... ...... 32
5. ERGEBNISSE.. ....... ..... ..... ...... ..... .... .... ... .... ....
.... 33
5.1 TRANSKRIPTION AM IVAR#3-ELEMENT..........._.............._ 33
5.1.1 BESTIMMUNG VON TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTEN AM IVAR #3-ELEMENT 34
5.1.2 ZELLTYPSPEZIFISCHE TRANSKRIPTION AM IVAR #3 35
5.1.3 STADIUMSSPEZIFLSCHE TRANSKRIPTION AM IVAR #3 36
5.2 GENERIERUNG EINER IVAR #3-KO-MAUS......................._ 41
5.2.1 OBERBLICK ABER DIE 7Y//GETTFL-STRATEGIE 41
5.2.2 ERZEUGUNG DES TARGETING- VEKTORS 43
5.2.3 ERZEUGUNG REKOMBINANTER EMBRYONALER STAMMZELLKLONE 45
5.2.4 MIKROINJEKTIONEN HOMOLOG REKOMBINANTER ESZ-KLONE ZUR ERZEUGUNG
CHIMAERER TIERE 50 5.2.5 ETABLIERUNG DER IVAR #3-KO-MAUSZUCHT 51
5.3 UNTERSUCHUNG HETEROZYGOTER MSUSE 55
5.4 UNTERSUCHUNG HOMOZYGOTER MAEUSE............. 57
5.4.1 B-ZELL-POPULATIONEN 57
5.4.2 NUTZUNG DISTALER (J558) ZU PROXIMALER (7183) V H GENSEGMENTE IN WT
UND KO MAUSEN.. 62
6. DISKUSSION 71
6.1. TRANSKRIPTION AM IVAR #3-ELEMENT - 71
6.2 GENERIERUNG EINER IVAR #3-KO-MAUS - 75
6.3. UNTERSUCHUNG HETEROZYGOTER MSUSE 77
6.3.1 UNTERSUCHUNG DES LGM .LGM B RATIO 77
6.3.2 ALLELE EXKLUSION 78
6.4 UNTERSUCHUNG HOMOZYGOTER MSUSE ... 78
6.4.1 B-ZELL-POPULATIONEN 78
6.4.2 NUTZUNG DISTALER (J558) IM VERGLEICH ZU PROXIMALER (7183) V
H-GENSEGMENTE UND DETAILLIERTE VERWENDUNG EINZELNER VH-GENSEGMENTE DER
DISTALEN J558 VH-GENFAMILIE IN WT- UND KO-MAEUSEN 81
6.5 MOEGLICHE ROLLE DER IVAR-ELEMENTE IN DER V H NACH DJU-REKOMBINATION
83 6.6 AUSBLICK 86
7. MATERIAL 87
7.1 ANTIBIOTIKA - 87
7.2 ANTIKOERPER UND KONJUGATE.. - - 87
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS 4
7.3 CHEMIKALIEN, PLASTIK- UND VERBRAUCHSMATERIAL 88
7.4 ENZYME UND WACHSTUMSFAKTOREN 88
7.5 GERATE 88
7.6 KOMMERZIELLE KITS . - 90.
7.7 OLIGONUKLEOTIDE...... 90
7.8 PUFFER, MEDIEN, LOESUNGEN 95
7.9 RADIOAKTIVE ISOTOPE ........................... 98
7.10 SOFTWARE . 98
7.11 VEKTOREN 98
7.12 VERSUCHSTIERE UND ZELLLINIEN - 99
8 METBODEN.... ..... ....... ...... ....... ...... ...... ..... .... 100
8.1 RNA-LSOLIERUNG 100
8.2 MESSUNG DER DNA- UND RNA-KONZENTRATION .100
8.3 SYNTHESE VON CDNA 100
8.4 KLONIERUNGVON PCR-AMPLIFIKATEN UND TRANSFORMATION CHEMISCH
KOMPETENTER BAKTERIEN 100
8.5 PLASMID-DNA-PRIPARATION (MINIPREP, MAXIPREP) 101
8.6 RESTRIKTIONSVERDAU VON DNA . - _.101
8.7 AGAROSEGEL ELEKTROPHORESE -.101
8.8 SEQUENZIERUNG... .... 102
8.8.1 SEQUENZIERUNG VON PLASMID DNA AM VIROLOGISCHEN INSTITUT DER
UNIVERSITAET ERLANGEN: ...102 8.8.2 SEQUENZIERUNG BEI EUROFINS MWG
OPERON: 102
8.9 FACS (OBERFLSCHENFAERBUNG) UND SORTIEREN VON ZELLEN AM MOFLO/ARIALL
ZELLSORTER 102 8.10 ZELLKULTUR 103
8.10.1 KULTUR EMBRYONALER FIBROBLASTEN (EMFIS) UND ESZ 103
8.10.2 ESZ AUFTAUEN UND PASSAGIEREN 103
8.10.3 EXPANSION HOMOLOG REKOMBINANTER KLONE AUS DEM 96-WELL FORMAT 104
8.10.4 KRYOKONSERVIERUNG VON ESZ 104
8.11 ORGANENTNAHME UND AUFARBEITUNG (ISOLATION VON ZELLEN AUS
KNOCHENMARK/MILZ/BLUT UND FOETALER
LEBER)..........................................- ...104
8.12_ZELLZAHLBESTIMMUNG MITTELS HSMOZYTOMETER ..105
8.13 STATISTISCHE ANALYSEN 106
8.14 IVAR#3 RELEVANZTEST 106
8.15 RLM-RACE 106
8.16 REVERSE TRANSKRIPTASE (R1 PCR 107
8.17 REALTIME RT-PCR 108
8.17.1 REALTIME RT-PCR AN FUENF VERSCHIEDENEN POSITIONEN 108
8.17.2 REALTIME RT-PCR VON B-ZELLPOPULATIONEN 109
PROB-SORT AM ARIAL! ZELLSORTER (DERMATOLOGIE
ERLANGEN).......................... -.109
8.19 GENERIERUNG VON IVAR#3-KO-M8USEN ...III
8.19.1 GENERIEMNG DES TARGETVEKTORS PRAPIDFLIRT-LA-KA 111
8.19.3 VERIFIZIERUNG HOMOLOG REKOMBINIERTER KLONE 116
8.19.4 VORBEREITUNG DER ESZ FUER DIE BLASTOZYSTENINJEKTION 116
8.20 DNA ISOLATION AUS MAUSSCHWANZBIOPSIEN ..116
8.21 TYPISIERUNG VON MAEUSEN MITTELS PCR ... -117
8.22 TYPISIERUNG VON MAUSEN MITTELS FACS 118
8.23 PCR-ANALYSE (J558 VS 7183) MIT ANSCHLIEBENDEM SOUTHERN BLOT 118
8.23.1 BLOTTEN DER GELE AUF MEMBRAN 119
8.23.2 RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER SONDEN 120
8.23.3 AUFREINIGUNG DER RADIOAKTIV MARKIERTEN OLIGONUKLEOTIDE (SONDEN)
120 8.23.4 HYBRIDISIERUNG DER SONDE MIT DER DNA 120
8.23.5 MESSUNG DES SIGNALS UND AUSWEITUNG 120
8.24 DEEP-SEQUENCING - 120
9. LITERATURVERZEICHNIS 123
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS S
10 ANHAENGE......... ............ ............ ......... ..........
........140
10.1 ABKDRZUNGSVERZEICHNIS 140
10.2 TABELLENVERZEICHNIS ...... ..... .... 143
10.3 ABBILDUNGSVERZEICHNIS... ..... ... ..144
11. LEBENSLAUF.. ........... .............. .......... .........
............ 146
12. DANKSAGUNG.......... .............. ................... ...........
............... .....147
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| spelling | Giniewski, Agnes 1980- Verfasser (DE-588)1038245214 aut Charakterisierung eines neuen regulatorischen Elements im V_1tnH-Cluster und dessen potentieller Einfluss auf die VDJ-Rekombination vorgelegt von Agnes Giniewski 2013 147 S. Ill., graph. Darst. 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2013 Immunmodulation (DE-588)4315157-7 gnd rswk-swf B-Zelle (DE-588)4147096-5 gnd rswk-swf Schwere Kette (DE-588)4330566-0 gnd rswk-swf Somazelle (DE-588)4077511-2 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content B-Zelle (DE-588)4147096-5 s Schwere Kette (DE-588)4330566-0 s Somazelle (DE-588)4077511-2 s Immunmodulation (DE-588)4315157-7 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus-46705 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus-46705 Resolvingsystem kostenfrei Volltext http://opus4.kobv.de/opus4-fau/frontdoor/index/index/docId/3375 Verlag kostenfrei Volltext http://d-nb.info/1035540738/34 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=026239381&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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