Untersuchung eines FRET-Systems zur Darstellung von Entzündungsprozessen in vitro und in vivo mittels molekularer Bildgebung:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. EINLEITUNG 3
2.1. DIE ENTZUENDUNGSREAKTION 3
2.2. MOLEKULARE BILDGEBUNG ALS DIAGNOSE-VORSPRUNG 7
2.3. DARSTELLUNG VON PROTEIN-INTERAKTIONEN MITTELS FRET 9
2.4. ZIELSTELLUNG 11
3. SUBSTANZEN, GERAETE, MATERIAL UND METHODEN 13
3.1. SUBSTANZEN 13
3.1.1. BESCHREIBUNG DER VERWENDETEN FLUORESZENZFARBSTOFFE 13
3.1.2. ZUSAMMENSETZUNG DER VERWENDETEN LOESUNGEN 17
3.1.3. SONSTIGE SUBSTANZEN 18
3.2. GERAETE 19
3.2.1. MAESTRO* IN-VIVO FLUORESCENCE IMAGING SYSTEM 19
3.2.2. SONSTIGE GERAETE 22
3.3. MATERIALIEN 23
3.3.1. CHARAKTERISIERUNG DER ZELLLINIE J774 23
3.3.2. CHARAKTERISIERUNG DER VERWENDETEN MAEUSE 24
3.3.3. SONSTIGE MATERIALIEN 25
3.4. METHODEN 27
3.4.1. HERSTELLUNG DER IGG-GEKOPPELTEN FLUORESZENZFARBSTOFFE 27
3.4.1.1. KOPPLUNG DER FLUORESZENZFARBSTOFFE AN UNSPEZIFISCHE
IGG-MOLEKUELE 27
3.4.1.2. GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE 28
3.4.1.3. AUFKONZENTRATION DER ELUATE 31
3.4.1.4. ANALYTIK DER ELUATE 32
3.4.2. UNTERSUCHUNG VON FRET- UND QUENCHING-EFFEKTEN DER SONDEN 34
V
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IMAGE 2
3.4.2.1. NACHWEIS VON FRET NACH FIXIERUNG DER SONDEN A U F
NITROZELLULOSEMEMBRAN
34
3.4.2.2. PARALLELE DARSTELLUNG VON IGG-GEKOPPELTEM UND FREIEM
FLUORESZENZFARBSTOFF
35
3.4.2.3. VERHALTEN DER FLUORESZENZFARBSTOFFE IN BESTIMMTEN
KONZENTRATIONSBEREICHEN
36
3.4.2.4. BEDIENUNG DES MAESTRO*-KLEINTIERIMAGERS 37
3.4.3. ALLGEMEINER UMGANG MIT ZELLEN DER J774-REIHE 41
3.4.3.1. AUFTAUEN DER ZELLEN 41
3.4.3.2. MEDIUMWECHSEL 41
3.4.3.3. PASSAGIEREN 42
3.4.4. ZELLVERSUCHE 44
3.4.4.1. INTERNALISIERUNGSVERSUCHE MIT ZELLKULTURFLASCHEN 44
3.4.4.2. CLSM-VERMESSUNG DER MAKROPHAGEN 46
3.4.5. TIERVERSUCHE 48
3.4.5.1. UNTERSUCHUNG VON FLUROESZENZ UND FRET NACH S.C. APPLIKATION VON
INKUBIERTEN ZELLEN 48
3.4.5.2. UNTERSUCHUNG VON FRET AM OEDEMMODELL 49
4. ERGEBNISSE 52
4.1. FRET-EIGENSCHAFTEN DER SONDEN 52
4.1.1. GEGENUEBERSTELLUNG DES FRET-PAARES UND KONTROLL-PAARES AUF EINER
NITROZELLULOSEMEMBRAN 52
4.1.2. VERGLEICH DER SIGNALINTENSITAET ZWISCHEN IGG-GEKOPPELTEM UND
FREIEM
FLUORESZENZFARBSTOFF. 56
4.1.3. UNTERSUCHUNG DES QUENCHING-EFFEKTES UND DER DETEKTIONSGRENZE 59
4.2. IN VITRO NACHWEIS DER FRET-SONDEN 61
4.2.1. NACHWEIS DER FLUORESZENZ IN ZELLPELLETS 61
4.2.1.1. FUER DEN FREIEN FLUORESZENZFARBSTOFF 61
4.2.1.2. FUER DEN IGG-GEKOPPELTEN FLUORESZENZFARBSTOFF 64
4.2.2. NACHWEIS DER INTERNALISIERUNG DES FLUORESZENZFARBSTOFFES DY-682
DURCH
MAKROPHAGEN 67
V I
IMAGE 3
4.3. TIERVERSUCHE MIT LOKALER APPLIKATION FARBSTOFF INKUBIERTER
MAKROPHAGEN
68
4.4. IN VIVO NACHWEIS VON FRET NACH SYSTEMISCHER APPLIKATION DER
FLUORESZENZFARBSTOFFE 73
4 DISKUSSION 79
5. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 100
6. QUELLENVERZEICHNIS 103
7. DANKSAGUNG 106
8. EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 107
9. TABELLARISCHER LEBENSLAUF 108
VII
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