In-vivo-Analyse des inflammatorischen Potenzials von C-reaktivem Protein in pentamerer und monomerer Konformation:
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2013
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INHALT
III
INHALT
INHALT III
ABKUERZUNGEN VI
TABELLEN IX
ABBILDUNGEN X
*
1 EINLEITUNG 11
1.1 C-REAKTIVES PROTEIN 11
1.1.1 BEDEUTUNG 11
1.1.2 PENTAMERES C-REAKTIVES PROTEIN 11
1.1.3 MONOMERES C-REAKTIVES PROTEIN 14
1.1.4 IN VIVO STUDIEN UEBER C-REAKTIVES PROTEIN 19
1.2 AKUTE ENTZUENDUNG 21
1.2.1 LEUKOZYTEN-ENDOTHEL-INTERAKTION 21
1.2.1 REAKTIVE SAUERSTOFFSPEZIES 22
1.2.1.1 DEFINITION ....22
1.2.1.2 ENTSTEHUNG 23
1.2.1.3 FUNKTION 24
1.2.1.4 NAD(P)H-OXIDASEN 26
1.3 QUANTIFIZIERUNG VON ENTZUENDUNG 27
1.3.1 INTRAVITALMIKROSKOPIE 27
1.3.2 ELEKTRONENSPINRESONANZ-SPEKTROSKOPIE 27
1.3.2.1 VERSUCHSAPPARATUR 27
1.3.2.2 FUNKTIONSWEISE 28
1.3.2.3 SPIN LABEL CMH 30
1.3.3 AKTIVITAETSMESSUNG DER NAD(P)H-OXIDASE 31
2 ZIEL DER STUDIE 33
3 MATERIAL UND METHODEN 34
3.1 VORBEMERKUNG 34
3.2 EXPERIMENTELLES MODELL 34
3.2.1 VERSUCHSTIERE 34
3.2.2 ANAESTHESIE UND BEATMUNG 34
3.2.3 PRAEPARATION DES M. CREMASTER 37
3.2.4 INTRAVENOESE VERABREICHUNG VON CRP 38
3.2.5 SUPERFUSION 39
3.3 UNTERSUCHUNGSMETHODEN 40
3.3.1 MAKROHAEMODYNAMIK 40
3.3.2 ARTERIELLE BLUTGASANALYSE 40
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IMAGE 2
INHALT IV
3.3.3 DIGITALE INTRAVITALE EPIFLUORESZENZMIKROSKOPIE 40
3.3.3.1 LEUKOZYTEN-ENDOTHEL INTERAKTION 42
3.3.4 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON PCRP 43
3.3.5 IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSE 44
3.3.5.1 GEWEBEPRAEPARATION 44
3.3.5.2 AVIDIN-BIOTIN-KOMPLEX METHODE 44
3.3.5.3 PRIMAERANTIKOERPER 45
3.3.5.4 DURCHFUEHRUNG 45
3.3.6 MESSUNG DES OXIDATIVEN STRESSES 46
3.3.6.1 BLUTENTNAEHME 47
3.3.6.2 LEUKOZYTENISOLATION 47
3.3.6.3 LEUKOZYTENZAEHLUNG 48
3.3.6.6 VORBEHANDLUNG 48
3.3.6.5 MESSUNGEN DER ESR-SPEKTROSKOPIE 49
3.3.6.6 CHEMILUMINESZENZ 50
3.5 MEDIKAMENTE UND FARBSTOFFE 50
3.6 EXPERIMENTELLES PROTOKOLL 51
3.6.1 IN VIVO STUDIEN 52
3.6.2 EX VIVO STUDIEN 53
3.7 STATISTIK 54
4 ERGEBNISSE 55
4.1 ERGEBNISSE DER MAKROHAEMODYNAMISCHEN MESSUNGEN 55 4.2 ERGEBNISSE DER
ARTERIELLEN BLUTGASANALYSE 56
4.3 ERGEBNISSE DER INTRAVITALMIKROSKOPISCHEN MESSUNGEN 57
4.3.1 LEUKOZYTENROLLING 57
4.3.2 LEUKOZYTENADHAESION 59
4.4 ERGEBNISSE DER MESSUNG VON CRP-SERUMSPIEGEL 60
4.5 ERGEBNISSE DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN UNTERSUCHUNGEN 61 4.5.1 FAERBUNG
MIT ANTIKOERPER KLON 8D8 61
4.5.2 FAERBUNG MIT ANTIKOERPER KLON 9C9 62
4.6 ERGEBNISSE DER MESSUNG DES OXIDATIVEN STRESSES 63
4.6.1 NAD(P)H-OXIDASE AKTIVITAET NACH STIMULATION IN VIVO 63
4.6.2 ROS NACH STIMULATION EX VIVO 64
4.6.3 NAD(P)H-OXIDASE AKTIVITAET NACH STIMULATION EX VIVO 65 4.6.4 ROS
HUMANER UND RATTENLEUKOZYTEN 67
4.6.5 ROS UNTER EINFLUSS VON NYSTATIN 68
5 DISKUSSION 70
5.1 MAKROHAEMODYNAMISCHE MESSUNGEN 70
5.2 ARTERIELLE BLUTGASANALYSEN 71
5.3 INTRAVITALMIKROSKOPISCHE MESSUNGEN 72
5.4 SERUMSPIEGEL VON CRP 76
5.5 IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSEN 78
IMAGE 3
INHALT V
5.6 OXIDATIVER STRESS IN LEUKOZYTEN 80
5.6.1 NAD(P)H-OXIDASE AKTIVITAET NACH STIMULATION IN VIVO 80 5.6.2 ROS
NACH STIMULATION EX VIVO 81
5.6.3 NAD(P)H-OXIDASE AKTIVITAET NACH STIMULATION EX VIVO 82
5.6.4 ROS HUMANER UND RATTENLEUKOZYTEN 83
5.6.5 ROS UNTER EINFLUSS VON NYSTATIN 83
6 ZUSAMMENFASSUNG 85
7 LITERATUR 86
8 ANHANG *...... 94
8.1 SCHEMATISCHE ZUSAMMENFASSUNG . 94
8.2 DANKSAGUNG 95
8.3 LEBENSLAUF 96
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