Quantitative Expression und zelluläre Lokalisation von Cathepsinen in abdominalen Aortenaneurysmen:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 ABDOMINALES AORTENANEURYSMA. 1
1.1.1 EPIDEMIOLOGIC 1
1.1.2 DIAGNOSTIK UND THERAPIE 1
1.1.3 ATIOLOGIE UND PATHOGENESE 3
1.2 PROTEASEN 4
1.3 CALHEPSINE 5
1.3.1 BETEILIGUNG IN PHYSIOLOGISCHEN UND PATHOLGISCHEN PROZESSEN 5
1.3.2 ROLLE BEI DER ATHEROSKLEROSE 6
1.3.3 CATHEPSINE IM AORTENANEURYSMA - STAND DER FORSCHUNG 8
1.4 MOTIVATION UND FRAGESTELLUNG 9
2 MATERIAL UND METHODEN 12
2.1 MATERIALIEN UND REAGENZIEN 12
2.1.1 IMMUNHISTOCHEMIE 12
2.1.2 PCR. 15
2.1.3 WESTERN BLOT 20
2.1.4 IMMUNPRSZIPITATION 25
2.2 PATIENTEN 25
2.3 PRAPARATGEWINNUNG 26
2.3.1 FFLR IMMUNHISTOCHEMIE UND RT-PCR. 26
2.3.2 FFLR WESTERN BLOT 26
2.3.3 SERUMGEWINNUNG FFLR IMMUNPRSZIPITATION 26
2.4 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 26
2.4.1 ANFERTIGUNG DER SCHNITTPR3PARATE 26
2.4.2 ROUTINEFSRBUNGEN - HE UND ELASTIKA VAN GIESON 27
2.4.3 OPTIMIERUNG IMMUNHISTOCHEMISCHER FSRBUNGEN 27
2.4.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FSRBUNGEN 29
2.4.4.1 APAAP-METHODE 29
FARBEPROTOKOLL SMOOTH MUSCLE AKTIN UND VON WILLEBRAND FAKTOR 30
2.4.4.2 LSAB-METHODE 31
FARBEPROTOKOLL CD3, CD20 UND CD68 32
FARBEPROTOKOLL CALHEPSIN B, D, K, L, S UND CYSTATIN C 33
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IMAGE 2
2.4.5 SEMIQUANTITATIVE AUSWERTUNG 35
2.5 RT-PCR 35
2.5.1 RNA-EXTRAKTION 35
2.5.2 CDNA-SYNTHESE 37
2.5.3 PRIMEIDESIGN 38
2.5.4 RT-PCR OPTIMIENMG 38
2.5.5 QUANTITATIVE REAL-TIME RT-PCR 41
2.5.6 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 42
2.5.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG 42
2.6 WESTERN BLOT 43
2.6.1 PROBENGEWINNUNG : 43
2.6.2 PROTEINBESTIMMUNG 43
2.6.3 DURCHFIIHRONG 44
2.6.3.1 ELEKTROPHORESE 44
2.6.3.2 BLOTTING 45
2.6.3.3 COOMASSIE BRILLIANT BLUE 45
2.6.3.4 PONCEAU S 45
2.6.3.5 IMMUNBLOTTING 46
2.6.4 AUSWERTUNG 48
2.7 IMMUNPRAZIPITATION 48
2.7.1 PROTEINBESTIMMUNG 48
2.7.2 DURCHFIIHNING 48
3 ERGEBNISSE 50
3.1 PATIENTENCHARAKTERISIERUNG 50
3.2 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 51
3.2.1 CHARAKTERISIERUNGDERAAA-PRSPARATE 51
3.2.2 IMMUNHISTOCHEMIE VON CATHEPSINEN UND CYSTATIN C 54
3.3 QUANTITATIVE REAL-TIME RT-PCR 63
3.4 WESTERN BLOT ANALYSE 73
3.5 SERUMUNTERSUCHUNG 74
4 DISKUSSION 75
4.1 PATIENTENCHARAKTERISIERUNG 75
4.2 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 75
4.3 QUANTITATIVE REAL-TIME RT-PCR. 83
4.4 WESTERN BLOT ANALYSE 87
IMAGE 3
4.5 SERUMUNTERSUCHUNG 88
4.6 FAZIT 90
5 ZUSAMMENFASSUNG 92
6 LITERATURVERZEICHNIS 94
7 PUBLIKATIONEN 109
8DANKSAGUNG 110
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