Bedeutung des Integrins Alpha 8 Beta 1 für die Zellaktivierung in der Pathogenese der Fibrose:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG / ABSTRACT 1
1.1 ZUSAMMENFASSUNG 1
1.1.1 HINTERGRUND UND ZIELE 1
1.1.2 METHODEN 1
1.1.3 ERGEBNISSE UND BEOBACHTUNGEN 2
1.1.4 PRAKTISCHE SCHLUSSFOLGERUNGEN 2
1.2 ABSTRACT 3
1.2.1 INTRODUCTION 3
1.2.2 METHODS 3
1.2.3 RESULTS 3
1.2.4 CONCLUSIONS 4
2 EINLEITUNG 5
2.1 INTEGRINE: STRUKTUR, AKTIVIERUNG UND SIGNALWEGE 5
2.2 FIBROSE UND INTEGRINE 12
2.3 DIE A 8 -KETTE 15
3 MATERIAL 18
3.1 GERAETE 18
3.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 19
3.3 CHEMIKALIEN, ENZYME UND MEDIEN 19
3.4 ANTIKOERPER UND FLUORESZIERENDE FARBSTOFFE 22
3.5 PLASMIDE 22
3.6 BAKTERIEN, ZELLEN, TIERE 24
4 METHODEN 25
4.1 ZELLKULTUR 25
4.1.1 ISOLATION VON MURINEN LUNGEN- UND LEBERFIBROBLASTEN 25 4.1.2
KULTUR DER FIBROBLASTEN UND DER A8 -DEFIZIENTEN MESANGIUMZELLEN 25
4.1.3 STIMULATION DER FIBROBLASTENLINIE NIH 3T3 UND DER PRIMAEREN LEBER-
UND LUNGENFIBROBLASTEN MIT TGF-SS1 UND B-FGF AUF VERSCHIEDENEN SUBSTRATEN
26
4.1.4 TRANSFEKTION VON A8 -DEFIZIENTEN MESANGIUMZELLEN 27 4.2
RNA-METHODEN 30
4.2.1 RNA ISOLATION 30
4.2.2 REVERSE TRANSKRIPTION 30
4.2.3 REAL-TIME PCR 31
4.3 VERVIELFAELTIGUNG VON PLASMIDEN ZUR TRANSFEKTION VON (AS-/-)MMCS 34
4.3.1 TRANSFORMATION UND KULTIVIERUNG VON ONE SHOT MACHL -T1 E. COLI 34
4.3.2 ISOLATION VON PLASMIDEN AUS BAKTERIEN 35
4.4 IMMUNZYTOCHEMIE 36
4.5 STATISTIK 37
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IMAGE 2
5 ERGEBNISSE 38
5.1 EXPRESSION DER AS-KETTE IN NIH 3T3-, LEBER-, UND LUNGENFIBROBLASTEN
NACH STIMULATION MIT TGF-SS1 UND B-FGF AUF VERSCHIEDENEN SUBSTRATEN 38
5.1.1 EXPRESSION DER AS -KETTE IN NIH 3T3-FIBROBLASTEN NACH STIMULATION
MIT 1 NG/ML TGF-SS1/B-FGF OHNE SERUMENTZUG 38 5.1.2 VERGLEICH DER
RELATIVEN INDUKTION DER AS -KETTE IN NIH 3T3-
FIBROBLASTEN NACH ERHOEHUNG DER WACHSTUMSFAKTORKONZENTRATION AUF 5 NG/ML
UND EINFUEHRUNG EINES SERUMENTZUGS 41
5.1.3 VERGLEICH DER RELATIVEN INDUKTION DER A 8 -KETTE IN NIH 3T3-,
LEBER- UND LUNGENFIBROBLASTEN 43
5.2 TRANSFEKTION VON (A 8 -/-)MMCS MIT A8CMV UND PCDNA3 61
5.2.1 EXPRESSION VON PROTEINEN DES ZYTOSKELETTS UND DER EZM NACH
TRANSFEKTION VON (A 8 -/-)MMCS MIT A8CMV UND PCDNA3 61 5.2.2
MORPHOLOGISCHE ASPEKTE NACH TRANSFEKTION VON (A 8 -/-)MMCS MIT A8CMV UND
PCDNA3 67
6 DISKUSSION 73
7 LITERATUR 87
8 ABKUERZUNGEN 97
9 ANHANG 99
10 DANKSAGUNG 103
11 LEBENSLAUF. 104
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