Der Einfluss einer CYP2B-Induktion durch Phenobarbital auf die CYP3A1-Induzierbarkeit in vitro durch Dexamethason in Rattenleberschnitten:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 4
1. ZUSAMMENFASSUNG 8
2. EINLEITUNG 10
2.1. DIE BIOTRANSFORMATION 10
2.2. DAS CYP-SYSTEM 11
2.3. DIE INDUKTION VON CYP 13
2.4. CYP3A UND DESSEN INDUKTIONSMECHANISMUS 14
2.5. MODELLE ZUR UNTERSUCHUNG DER CYP-I.NDUKTION 17
2.5.1. IN-VIVO-MODELLE 17
2.5.2. IN-VITRO-MODELLE 17
2.6. CYP3A-LNDUKTION IN PRAEZISIONSLEBERSCHNITTEN 20
3. ZIELSTELLUNG 23
4. MATERIAL UND METHODEN 25
4.1. VERSUCHSTIERE 25
4.1.1. HALTUNG DER VERSUCHSTIERE 25
4.1.2. VORBEHANDLUNG DER VERSUCHSTIERE 25
4.2. SCHNITTPRAEPARATION 25
4.3. INKUBATION DER LEBERSCHNITTE 26
4.4. VERSUCHSDESIGN 27
4.5. BESTIMMUNG DER BIOTRANSFORMATIONSAKTIVITAET 29
4.5.1. BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTS ALS BEZUGSGROESSE 29
4.5.2. TESTOSTERONHYDROXYLIERUNG (TH) 30
4.5.3. 7-PENTOXYRESORUFIN-O-DEPENTYLIERUNG (PROD) 31
4.6. BESTIMMUNG DER CYP3A1 -MRNA-EXPRESSION 32
4.6.1. RNA-ISOLATION AUS LEBERGEWEBE 32
4.6.2. BESTIMMUNG DER RNA-KONZENTRATION (OD) UND -REINHEIT 33
4.6.3. DIE RT-PCR 33
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IMAGE 2
4.6.3.1. DIERT 34
4.6.3.2. DIE POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 34
4.6.3.3. DIE KOMPETITIVE RT-PCR 35
4.6.4. ELEKTROPHORESE DER RT-PCR-PRODUKTE 35
4.7. STATISTIK 36
5. ERGEBNISSE 37
5.1. CYP3A1-INDUKTION IN VITRO DURCH DEX IN LEBERSCHNITTEN UNBEHANDELTER
RATTEN 37
5.2. CYP3A1-INDUKTION IN VITRO DURCH DEX IN LEBERSCHNITTEN
PB-VORBEHANDELTER
RATTEN 38
5.2.1 KONTROLLE DES PB-EFFEKTS: PRO D-AKTIVITAET 38
5.2.2. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-AKTIVITAETEN 39
5.2.3. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-MRNA 40
5.3. EINFLUSS VON PB IN VITRO AUF DIE CYP3A1-INDUKTION DURCH DEX IN
LEBERSCHNITTEN UNBEHANDELTER RATTEN 41
5.3.1. DEX-EXPOSITION IN VITRO GLEICHZEITIG MIT PB 41
5.3.1.1. KONTROLLE DES PB-EFFEKTS (5 UND 100 (JM): PRO D-AKTIVITAET 4 1
5.3.1.2. CYP3A-LNDUKTION BEI KOMBINATION VON DEX MIT 5 PM PB 43
5.3.1.2.1. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-AKTIVITAETEN 43
5.3.1.2.2. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-MRNA 44
5.3.1.3. CYP3A-LNDUKTION BEI KOMBINATION VON DEX MIT 100 |JM PB 4 5
5.3.1.3.1. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-AKTIVITAETEN 45
5.3.1.3.2. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-MRNA 46
5.3.2. DEX-EXPOSITION IN VITRO NACH VORANGEGANGENER PB-EXPOSITION 47
5.3.2.1. KONTROLLE DES PB-EFFEKTS (5 UND 100 PM): PROD-AKTIVITAET 47
5.3.2.2. CYP3A-LNDUKTION BEI KOMBINATION VON DEX MIT 5 |JM PB 4 9
5.3.2.2.1. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-AKTIVITAETEN 49
5.3.2.2.2. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-MRNA 50
IMAGE 3
5.3.2.3. CYP3A-LNDUKTION BEI KOMBINATION VON DEX MIT 100 PM PB 51
5.3.2.3.1. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-AKTIVITAETEN 51
5.3.2.3.2. BEEINFLUSSUNG DER CYP3A1-MRNA 52
6. DISKUSSION 53
6.1. CYP3A1-INDUKTION IN VITRO DURCH DEX IN LEBERSCHNITTEN UNBEHANDELTER
RATTEN 53
6.2. CYP3A1-INDUKTION IN VITRO DURCH DEX IN LEBERSCHNITTEN
PB-VORBEHANDELTER
RATTEN 56
6.3. EINFLUSS VON PB IN VITRO AUF DIE CYP3A1-INDUKTION DURCH DEX IN
LEBERSCHNITTEN UNBEHANDELTER RATTEN 61
6.3.1. EINFLUSS DER DEX-EXPOSITION IN VITRO GLEICHZEITIG MIT PB 62
6.3.2. EINFLUSS DER DEX-EXPOSITION IN VITRO NACH VORANGEGANGENER
PBEXPOSITION 65
7. SCHLUSSFOLGERUNGEN 69
8. LITERATURVERZEICHNIS 70
9. ANHANG 82
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF
EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG
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