Modulation der Immunantwort von Colon Lamina Propria Fibroblasten bei Morbus Crohn durch Interleukin-33:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 AUFBAU DES GASTROINTESTINALTRAKTS 1
1.2 MORBUS CROHN 3
1.2.1 EPIDEMIOLOGIE 3
1.2.2 MORPHOLOGIE 3
1.2.3 AETIOLOGIE UND PATHOGENESE 5
1.2.4 KLINIK 7
1.2.5 KOMPLIKATIONEN 8
1.2.6 DIAGNOSTIK 8
1.2.7 THERAPIE 9
1.3 ZYTOKINE 11
1.3.1 LNTERLEUKIN-6 12
1.3.2 LNTERLEUKIN-8 16
1.3.3 LNTERLEUKIN-33 18
1.4 CPG-ODN 23
1.5 P-ERK 4 2 / 4 4 SOWIE NF-KB P65 2 4
1.6 INTESTINALE FIBROBLASTEN 25
2 MATERIALIEN 29
2.1 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 29
2.2 PUFFER UND LOESUNGEN 30
2.3 ANTIKOERPER 31
2.4 STIMULANZIEN 32
2.5 VERBRAUCHSMATERIALIEN 32
2.6 GERAETE 33
2.7 SOFTWARE 35
3 METHODEN 36
3.1 ZELLEXPERIMENTELLE METHODEN 36
3.2 VERSUCHSPLANUNG 39
3.2.1 UNTERSUCHUNG DER ZYTOKINANTWORT NACH STIMULATION 39
3.2.2 STIMULATIONSVERSUCH 39
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.3 WESTERN BLOT 42
3.3.1 NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 42
3.3.2 NASS-TRANSFER 43
3.3.3 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON PROTEINEN 44
3.3.4 STRIPPING 45
3.3.5 SS-ACTIN-LADUNGSKONTROLLE 45
3.4 ENZYME-IINKED IMMUNOSORBENT ASSAY 46
3.4.1 ALLGEMEINES PRINZIP 46
3.4.2 BESTIMMUNG VON LNTERLEUKIN-6 UND LNTERLEUKIN-8 46
3.5 STATISTIK 47
4 ERGEBNISSE 49
4.1 ZIELE 49
4.2 MORPHOLOGISCHE UNTERSCHIEDE DER CLPF 50
4.3 CHARAKTERISIERUNG DER STIMULIERBARKEIT VON CLPF BEZUEGLICH
VERSCHIEDENER TLR-LIGANDEN UND TNF 51
4.3.1 STIMULATION VON KO-, MC- UND MCS-CLPF MIT TNF 51
4.3.2 STIMULATION VON KO-, MC- UND MCS-CLPF MIT LPS 53
4.3.3 STIMULATION VON KO-, MC- UND MCS-CLPF MIT CPG-ODN 55
4.3.4 ZUSAMMENFASSUNG 57
4.4 LNTERLEUKIN-33 57
4.4.1 NACHWEIS DES IL-33-REZEPTORS (ST2/IL-1 R 4 ) 57
4.4.2 STIMULATION VON CLPF MIT IL-33, DOSIS-/ZEITABHAENGIGKEIT 61
4.4.3 ZUSAMMENFASSUNG 69
4.4.4 EINFLUSS DER STIMULATIONEN AUF DIE SIGNALTRANSDUKTION VON
IL-33 69
4.4.5 ZUSAMMENFASSUNG 75
4.5 KOSTIMULATIONSEXPERIMENTE 76
4.5.1 STIMULATION VON KO-, MC- UND MCS-CLPF MIT TNF UND
TNF+IL-33 76
4.5.2 STIMULATION VON KO-, MC- UND MCS-CLPF MIT LPS UND
LPS+IL-33 78
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
4.5.3 STIMULATION VON KO-, MC- UND MCS-CLPF MIT CPG-ODN
UND CPG-ODN+IL-33 80
4.5.4 ZUSAMMENFASSUNG 82
4.6 LPS+IL-33 DOSISABHAENGIGKEIT 83
4.6.1 STIMULATION VON KO-CLPF MIT LPS UND STEIGENDER DOSIS
VON IL-33 83
4.6.2 STIMULATION VON MC-CLPF UND MCS-CLPF MIT LPS UND
STEIGENDER DOSIS VON IL-33 85
4.6.3 ZUSAMMENFASSUNG 87
4.7 ZUSAMMENFASSUNG DER EFFEKTE VON IL-33 BEI CLPF 87
4.8 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 89
5 DISKUSSION 90
5.1 EFFEKTE DER TLR-LIGANDEN AUF CLPF 90
5.1.1 MC-CLPF REAGIEREN AUF STIMULATION MIT LPS NACH 24 H
MIT STAERKERER IL-6/IL-8-SEKRETION ALS MCS- UND KO-CLPF 90
5.1.2 MC- UND MCS-CLPF REAGIEREN NICHT MIT GESTEIGERTER
IL6/IL-8-SEKRETION AUF CPG-ODN 92
5.2 EXPRESSION DES IL-33-REZEPTORS 94
5.2.1 CU-CLPF EXPRIMIEREN DEN IL-33-REZEPTOR STAERKER ALS
KO-, MC- UND MCS-CLPF 94
5.2.2 MC-LPMZ EXPRIMIEREN DEN IL-33-REZEPTOR STAERKER ALS
KO- UND CU-LPMZ 95
5.3 IL-33 STIMULIERT IN KO-, MC- UND MCS-CLPF DIE IL-6/IL-8SEKRETION
SIGNIFIKANT 96
5.4 EINFLUSS VON IL-33 UND TLR-LIGANDEN AUF DIE
SIGNALTRANSDUKTION 98
5.4.1 P-ERK 42/44 WIRD IN MCS-CLPF DURCH DIE STIMULATION MIT
TNF+IL-33 SOWIE CPG-ODN+IL-33 VERSTAERKT AKTIVIERT 98
5.5 KOSTIMULATION MIT TLR-LIGANDEN UND IL-33 101
5.5.1 CPG+IL-33 FUEHRT ZU IL-6/IL-8-SEKRETION IN MC-CLPF, ABER
NICHT IN MCS-CLPF 101
III
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
6 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 104
7 LITERATURVERZEICHNIS 106
8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 123
DANKSAGUNG 126
LEBENSLAUF 127
IV
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