GSK3-beta - ein Modulator proinflammatorischer Prozesse in primären humanen Colon Lamina Propria Fibroblasten und in Kolonepithelzellen:
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INHALTSVERZEICHNIS VI
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS VI
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IX
TABELLENVERZEICHNIS XI
ABKUERZUNGEN XII
1 EINLEITUNG 1
1.1 AUFBAU UND FUNKTION DES MENSCHLICHEN DARMS 1
1.2 VERSCHIEDENE ZELLPOPULATIONEN DER DARMWAND 2
1.2.1 KOLONEPITHELZELLEN 2
1.2.2 KOLON LAMINA PROPRIA FIBROBLASTEN 3
1.2.3 LAMINA PROPRIA MONONUKLEAERE ZELLEN 4
1.3 CHRONISCH ENTZUENDLICHE DARMERKRANKUNGEN 4
1.4 IMMUNOLOGISCHE REAKTIONEN IM MENSCHLICHEN DARM 6
1.4.1 DAS IMMUNSYSTEM DES MENSCHLICHEN DARMS 6
1.4.1.1 DAS ANGEBORENE UND ERWORBENEN IMMUNSYSTEM 6
1.4.1.2 TOLL-LIKE REZEPTOREN 7
1.4.2 STOERUNGEN INTESTINALER IMMUNREAKTIONEN BEI CED 10
1.4.2.1 ROLLE DER INTESTINALEN MIKROBIELLEN FLORA 10
1.4.2.2 ROLLE DER T-ZELL-ANTWORT BEI CED 11
1.4.2.3 ROLLE VON TOLL-LIKE REZEPTOREN UND NOD-LIKE REZEPTOREN BEI CED
11
1.5 DIE GLYKOGEN-SYNTHASE-KINASE-3-SS 13
1.5.1 STRUKTUR UND REGULATION DER GSK3-SS 13
1.5.2 EINFLUSS DER GSK3-SS AUF VERSCHIEDENE ERKRANKUNGEN 14
1.5.3 GSK3-SS-ABHAENGIGE SIGNALWEGE 15
1.5.4 EXPERIMENTELLE INHIBITION DER GSK3-SS 17
2 ARBEITSZIELE 19
3 MATERIAL UND METHODEN 21
3.1 MATERIAL 21
3.1.1 KULTUR UND STIMULATION PRIMAERER FIBROBLASTEN 21
3.1.2 KULTUR UND STIMULATION DER EPITHELZELLLINIE HT-29 22
3.1.3 CHEMIKALIEN 22
3.1.4VERBRAUCHSMATERIAL 23
3.1.5 ELISA 24
3.1.6 PROTEINBESTIMMUNG VON ZELLLYSATEN 24
3.1.7 WESTERN BLOT 24
3.1.8 ANTIKOERPER 25
3.1.8.1 PRIMAERE ANTIKOERPER 25
3.1.8.2SEKUNDAERE ANTIKOERPER 25
3.1.9 PROTEINBESTIMMUNG VON ZELLKERNLYSATEN 25
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS YN
3.1.10 DNA-BINDUNGSASSAYS 26
3.1.11 GERAETE 26
3.1.12 NACHWEIS UND EIGENSCHAFTEN DER VERWENDETEN PRIMAEREN ZELLEN 28
3.1.12.1 GESAMTBIOPSIELYSATE 28
3.1.12.2 KOLONEPITHELZELLEN 28
3.1.12.3 COLON LAMINA PROPRIA FIBROBLASTEN 29
3.1.12.4 LAMINA PROPRIA MONONUKLEAERE ZELLEN 29
3.1.13 NAEHRMEDIEN UND PUFFER 30
3.1.13.1 NAEHR- UND STIMULATIONSMEDIEN 30
3.1.13.2 ALLGEMEINE PUFFER 30
3.2 METHODEN 33
3.2.1 ARBEITEN MIT PRIMAEREN HUMANEN COLON LAMINA PROPRIA FIBROBLASTEN 33
3.2.1.1 ISOLIEREN PRIMAERER HUMANER CLPF 33
3.2.1.2 KULTUR PRIMAERER HUMANER CLPF 33
3.2.1.3 EINFRIEREN VON PRIMAEREN HUMANEN CLPF 34
3.2.1.4 AUFTAUEN VON PRIMAEREN HUMANEN CLPF 34
3.2.1.5 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 35
3.2.1.6 STIMULATIONSEXPERIMENTE MIT PRIMAEREN HUMANEN CLPF 35
3.2.2 ARBEITEN MIT DER EPITHELZELLLINIE HT-29 36
3.2.3 WESTERN BLOT 37
3.2.3.1 HERSTELLUNG DER ZELLLYSATE 37
3.2.3.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 38
3.2.3.3 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 38
3.2.3.4 PROTEINTRANSFER AUF DIE NITROZELLULOSEMEMBRAN 39
3.2.3.5 DETEKTION DER PROTEINE MITTELS ANTIKOERPER 39
3.2.3.6 STRIPPEN DER MEMBRANEN 40
3.2.4 ELISA 40
3.2.5 DNA-BINDUNGS-ASSAY ZUM NACHWEIS VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 41
3.2.5.1 HERSTELLUNG DER ZELLKERNLYSATE 41
3.2.5.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION VON ZELLKERNEXTRAKTEN 42
3.2.5.3 AKTIVITAETS-ASSAY 42
3.2.4 STATISTIK 42
4 ERGEBNISSE 43
4.1 PROTEINSTATUS UND GRUNDAKTIVITAET DER GSK3-SS IN HUMANEM KOLONGEWEBE
SOWIE IN UNSTIMULIERTEN HUMANEN INTESTINALEN ZELLPOPULATIONEN ZEIGEN
KEINE EINHEITLICHE TENDENZ 43
4.1.1 GSK3-SS IN GESAMTBIOPSIELYSATEN 44
4.1.2 DIE BASALE GSK3-SS-PHOSPHORYLIERUNG IN PRIMAEREN HUMANEN
KOLONEPITHELZELLEN IST TENDENZIELL ERNIEDRIGT IN CED-GEWEBE 45
4.1.3 DIE GSK3-SS-PHOSPHORYLIERUNG IN PRIMAEREN HUMANEN COLON LAMINA
PROPRIA FIBROBLASTEN (CLPF) IST UNABHAENGIG VON EINER CED-ERKRANKUNG 46
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
VIII
4.2 MODULATION DER IMMUNANTWORT DER EPITHELZELLLINIE HT-29 DURCH GSK3-SS
INHIBITION 48 4.2.1 DIE HEMMUNG VON GSK3-SS IN HT-29-ZELLEN INDUZIERT
VERSCHIEDENE ZYTOSOLISCHE SIGNALPROTEINE MIT PROINFIAMMATORISCHEM
CHARAKTER 49
4.2.2 DIE HEMMUNG VON GSK3-SS IN HT-29-ZELLEN INDUZIERT DIE SEKRETION VON
IL-8 51
4.3 MODULATION DER IMMUNANTWORT PRIMAERER HUMANER CLPF NACH STIMULATION
MIT VERSCHIEDENEN TLR-LIGANDEN 53
4.3.1 DIE PHOSPHORYLIERUNG DER GSK3-SS WIRD DURCH STIMULATION MIT
VERSCHIEDENEN TLR- LIGANDEN NICHT BEEINFLUSST 54
4.3.2 DIE AKTIVIERUNG VERSCHIEDENER TLRS FUEHRT ZU UNTERSCHIEDLICHEN
ZYTOKINANTWORTEN 55
4.4 MODULATION DER IMMUNANTWORT PRIMAERER HUMANER CLPF DURCH GSK3-SS
INHIBITION 57
4.4.1 LICI-LNKUBATION INDUZIERT DIE PHOSPHORYLIERUNG VON GSK3-SS IN
PRIMAEREN HUMANEN CLPF VON KONTROLL- UND CED-PATIENTEN 57
4.4.2 DIE HEMMUNG VON GSK3-SS FUEHRT ZU EINER VERMINDERTEN SEKRETION VON
LNTERLEUKIN-8 VORWIEGEND IN MC-CLPF 59
4.4.3 DIE HEMMUNG VON GSK3-SS FUEHRT ZU EINER VERMINDERTEN SEKRETION VON
LNTERLEUKIN-6 IN STIMULIERTEN PRIMAEREN HUMANEN CLPF 62
4.4.4 EINFLUSS DER GSK3-SS-HEMMUNG AUF DIE AKTIVITAET VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 65
5 DISKUSSION 67
6 ZUSAMMENFASSUNG 76
ANHANG 78
LITERATURVERZEICHNIS 78
PUBLIKATIONSLISTE 84
DANKSAGUNG 86
LEBENSLAUF 88
ERKLAERUNG 89
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| spelling | Mayr, Rebecca Anna 1986- Verfasser (DE-588)103669531X aut GSK3-beta - ein Modulator proinflammatorischer Prozesse in primären humanen Colon Lamina Propria Fibroblasten und in Kolonepithelzellen vorgelegt von Rebecca Anna Mayr 2013 XIV, 89 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Regensburg, Univ., Diss., 2013 Crohn-Krankheit (DE-588)4026539-0 gnd rswk-swf Entzündung (DE-588)4014975-4 gnd rswk-swf Fibroblast (DE-588)4113553-2 gnd rswk-swf Glycogen-Synthase-Kinase-3 (DE-588)7526396-8 gnd rswk-swf Epithelzelle (DE-588)4259648-8 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Crohn-Krankheit (DE-588)4026539-0 s Glycogen-Synthase-Kinase-3 (DE-588)7526396-8 s Fibroblast (DE-588)4113553-2 s Entzündung (DE-588)4014975-4 s DE-604 Epithelzelle (DE-588)4259648-8 s b DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:355-epub-28416 http://epub.uni-regensburg.de/28416/ Verlag kostenfrei Volltext https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:355-epub-28416 Resolving-System DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=026094808&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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