Struktur- und Funktionsanalyse des Nanomotors des humanen Cytomegalievirus:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2013
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 HERPESVIREN UND DAS HUMANE CYTOMEGALIEVIRUS 1
1.2 MORPHOLOGIE DES HUMANEN CYTOMEGAL IEVIRUS 3
1.3 REPLIKATIONSZYKLUS DES HUMANEN CYTOMEGAL IEVIRUS 5
1.4 DNA-VERPACKUNGSMECHANISMUS DES HUMANEN CYTOMEGAL IEVIRUS 8
1.5 TERMINASEPROTEINE PUL56 UND PUL89 10
2 ZIELSTELLUNG 12
3 MATERIAL UND METHODEN 13
3.1 MATERIAL 13
3.1.1 ZELLLINIE 13
3.1.2 BAKTERIENSTAMM 13
3.1.3 KLONIERUNGSVEKTOREN 14
3.1.4 PLASMIDKONSTRUKTE 16
3.1.5 OLIGONUKLEOTIDE 17
3.1.6 ANTIKOERPER 19
3.1.7 ENZYME, STANDARDMARKER UND KITS 20
3.1.8 CHEMIKALIEN 21
3.1.9 VERBRAUCHMATERIALIEN 22
3.1.10 GERAETE UND HILFSMITTEL 23
3.1.11 KULTURMEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 24
3.2 ZELLBIOLOGISCHE M E T H O D E N 2 6
3.2.1 ZELLKULTUR 26
3.2.2 KULTIVIERUNG VON ZELLEN 2 6
3.2.3 TRANSIENTE TRANSFEKTION EUKARYONTISCHER ZELLEN 2 6
3.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE M E T H O D E N 2 6
3.3.1 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 26
3.3.2 POLYMERASE-KETTENREAKTION ( POLYMERASE CHAIN REACLION, PCR) 27
3.3.3 AUFREINIGUNG VON DNA-PROBEN UND PCR-PRODUKTEN 28
3.3.4 DNA-AGAROSEGELELEKTROPHORESE 28
3.3.5 RESTRIKTIONSVERDAU VON DNA-FRAGMENTEN, PLASMIDEN
UND MUTAGENESE-PCR-REAKTIONEN 28
3.3.6 LIGATION 29
3.3.7 HERSTELLUNG KOMPETENTER BAKTERIEN 29
3.3.8 TRANSFORMATION VON BAKTERIEN 30
3.3.9 MINI-PRAEPARATION VON PLASMID-DNA 30
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IMAGE 2
3.3.10 MAXI-PRAEPARATION VON PLASMID-DNA 30
3.4 PROTEINBIOCHEMISCHE M E T H O D E N 31
3.4.1 PROTEINEXTRAKTION 31
3.4.2 ZN-V/VRO-TRANSLATION VON PROTEINEN 31
3.4.3 DSDNA-BINDUNGSEXPERIMENT 31
3.4.4 CROSSLINKING VON PROTEINEN MIT GLUTARALDEHYD 32
3.4.5 CO-IMMUNOPRAEZIPITATION (CO-IP) 32
3.4.6 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 33
3.4.7 WESTERN BLOT (WB) 33
3.4.8 AUTORADIOGRAPHIE 34
3.4.9 IMMUNFLUORESZENZ (IF) 34
4 ERGEBNISSE 35
4.1 /II-.W/ICO-ANALYSEN DER TERMINASEPROTEINE PUL56 UND PUL89 35
4.1.1 KONSTRUKTION VON PU1.56- UND PUL89-DELETIONSMUTANTEN 38
4.2 ANALYSE DER DSDNA-BINDUNGSEIGENSCHAFLEN DER TERMINASEPROTEINE PUL56
UND PUL89 40
4.3 IDENTIFIZIERUNG DER DNA-BINDUNGSDOMAENEN VON PUL56 UND PUL89 40
4.4 ANALYSE DER SEQUENZSPEZIFISCHEN DSDNA-BINDUNG VON PUL56 UND PUL89 48
4.5 ANALYSE DER DIMERBILDUNG DES TERMINASEPROTEINS PUL56 53
4.6 ANALYSE DES INTERAKTION VON PUL56 MIT DER KLEINEN
TERMINASEUNTEREINHEIT PUL89 59
4.7 ANALYSE ZUR INTRAZELLULAEREN LOKALISATION DER KLEINEN
TERMINASEUNTEREINHEIT PUL89 63
4.7.1 ANALYSE DER KERNLOKALISATIONSSEQUENZ VON PUL89 64
5 DISKUSSION 67
5.1 INTRAZELLULAERE LOKALISATION DES TERMINASEUNTERPROTEINS PUL89 67
5.2 PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONEN DES TERMINASEPROTEINS PUL56 69
5.3 DNA-BINDUNG DER TERMINASEPROTEINE PUL56 UND PUL89 71
6 ZUSAMMENFASSUNG 75
7 LITERATURVERZEICHNIS 76
8 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 81
ANHANG I
PUBLIKATIONEN I
DANKSAGUNG II
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG III
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