Selektivität Isothiocyanat-vermittelter Wachstumsinhibition und Apoptose-Induktion in humanen Leberkarzinomzellen und humanen Leberzellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2012
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | [5], II, 149 Bl. Ill., graph. Darst. 30 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
]_ ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 1
1 _ ABSTRACT ; 1
2 ZUSAMMENFASSUNG 2
3 EINLEITUNG 4
3.1 DAS HEPATOZELLULAERE KARZINOM 4
3.2 STELLENWERT DER ISOTHIOCYANATE IN DER TUMORFORSCHUNG 5
3.3 THERAPEUTISCHE RELEVANZ DER ITC 6
3.4 SELEKTIVE WIRKSAMKEIT DER ITC IN SOLIDEN TUMOREN WIE DEM HCC 7
3.5 BEDEUTUNG DER ZYTOTOXIZITAET IN DER TUMORFORSCHUNG 9
3.6 BEDEUTUNG VON P53 UND P2L CIP1/WAF1 IN DER ZELLZYKLUS-KONTROLLE UND
INDUKTION
DER APOPTOSE 11
3.7 DIE BEDEUTUNG VON ERK, JNK, P38 SOWIE VON CHK2 UND AKT IN DER
ZELLZYKLUS-KONTROLLE UND DER INDUKTION VON APOPTOSE 12
3.8 BEDEUTUNG DER TELOMERASE IN DER KARZINOGENESE 14
3.9 ZIELE DIESER ARBEIT 16
4 MATERIAL 17
4.1 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 17
4.2 CHEMIKALIEN, REAGENZIEN UND MEDIEN 19
4.3 TESTSUBSTANZEN UND KONTROLLEN 21
4.4 SOFTWARE 22
4.5 PUFFER, MEDIEN UND LOESUNGEN 23
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IMAGE 2
5 METHODEN
32
5.1 PRIMAERE ZELLKULTUR 32
5.1.1 ISOLIERUNG PRIMAERER HEPATOZYTEN AUS HUMANEM LEBERGEWEBE 34
5.1.2 ISOLIERUNG PRIMAERER TUMORZELLEN AUS HUMANEN HEPATOZELLULAEREN
KARZINOMEN (HCC) 36
5.1.3 ISOLIERUNG MURINER HEPATOZYTEN 36
5.2 ZELLLINIEN 37
5.3 ALLGEMEINE ZELLKULTURTECHNIKEN 38
5.3.1 KRYOKONSERVIERUNG UND AUFTAUEN DER ZELLEN 38
5.3.2 ZELLPASSAGE 39
5.3.3 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL UND DER VITALITAET MITTELS TRYPAN BLAU
FAERBUNG 39
5.4 BEHANDLUNGSSCHEMA DER ZELLEN 40
5.5 CHARAKTERISIERUNG DER ZELLEN DURCH IMMUNZYTOCHEMISCHEN NACHWEIS DER
ALBUMIN-SYNTHESE 40
5.6 METHODEN ZUR UNTERSUCHUNG DER ZYTOTOXIZITAET 41
5.6.1 BESTIMMUNG DER MITOCHONDRIALEN DEHYDROGENASE-AKTIVITAET MITTELS
WST-1 TEST 41
5.6.2 BESTIMMUNG DER LYSOSOMALEN VIABILITAET MITTELS NEUTRALROT-RETENTION
42
5.7 METHODEN ZUR BESTIMMUNG VON ZELLTOD UND WACHSTUMSINHIBITION 43
5.7.1 DETEKTION DER CASPASE-3/7 AKTIVITAET 43
5.7.2 DNA-FAERBUNG MITTELS VITALFARBSTOFF PROPIDIUMIODID (PI) 43
5.7.3 BESTIMMUNG DES MITOCHONDRIALEN MEMBRANPOTENTIALS MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 44
5.7.4 BESTIMMUNG DER ZELLZYKLUSVERTEILUNG UND DES SUBG1 GEHALTES MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 45
5.8 IDENTIFIZIERUNG VON TUMORZELLEN MIT STAMMZELL-PHAENOTYP IM
DURCHFLUSSZYTOMETER 46
5.9 BESTIMMUNG DES MIGRATIONSVERHALTENS MITTELS SCRATCH-ASSAY 49
5.10 PROTEINANALYSE MITTELS IMMUNBLOT 49
5.10.1 ISOLIERUNG VON GESAMTPROTEIN 50
IMAGE 3
5.10.2 PROTEINQUANTIFIZIERUNG NACH BRADFORD (1976) 50
5.10.3 SDS-PAGE (SODIUM-DODECYL-SULFAT POLYACRYLAMID GELELEKTOPHORESE)
NACH LAEMMLI
(1979) 50
5.11 NACHWEIS REAKTIVER SAUERSTOFFSPEZIES (ROS) DURCH IMMUNDETEKTION VON
HNE
(4-HYDRTOXYNONENAL) 51
5.12 BESTIMMUNG DER TELOMERASE-AKTIVITAET MITTELS TRAP - (TELOMERE REPEAT
AMPLIFICATION PROTOCOL) EXPERIMENT 51
5.13 INHIBITION DER MAP-KINASEN 52
5.14 STUDIENDESIGN 53
5.15 STATISTIK 53
6 ERGEBNISSE 54
6.1 ETABLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER ZELLMODELLE 54
6.1.1 ETABLIERUNG DES PRIMAEREN HEPATOZYTENMODELLS 54
6.1.2 ETABLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES PRIMAEREN TUMORZELLMODELLS 56
6.1.3 CHARAKTERISIERUNG DER VERWENDETEN TUMORZELLMODELLE 62
6.2 EINFLUSS VERSCHIEDENER ISOTHIOCYANATE AUF DIE VIABILITAET VON
HEPG2-ZELLEN 69
6.3 BESTIMMUNG DER SELEKTIVEN ZYTOTOXIZITAET 70
6.3.1 BESTIMMUNG DER VIABILITAET 71
6.3.2 BESTIMMUNG VON APOPTOSE UND NEKROSE 73
6.3.3 BESTIMMUNG DER APOPTOSE IN TUMORZELLEN MITTELS DETEKTION DES
MITOCHONDRIALEN
MEMBRANPOTENTIALS 75
6.3.4 BESTIMMUNG DER WACHSTUMSINHIBITION UND DES ANTEILS APOPTOTISCHER
ZELLEN MITTELS
ZELLZYKLUSANALYSE 77
6.3.5 EINFLUSS EINER WIEDERHOLTEN MTB ITC-EXPOSITION AUF DIE VIABILITAET
UND DIE
ZELLTODINDUKTION IN HUMANEN UND MURINEN HEPATOZYTEN 81
6.3.6 EINFLUSS EINER WIEDERHOLTEN MTBITC-EXPOSITION AUF DIE INDUKTION
VON APOPTOSE UND
NEKROSE IN HUMANEN UND MURINEN HEPATOZYTEN 84
IMAGE 4
6.4 BESTIMMUNG DER WACHSTUMSINHIBITON UND DER APOPTOSE-INDUKTION IN
ABHAENGIGKEIT DES TUMORSTAMMZELLCHARAKTERS 86
6.4.1 BESTIMMUNG DES MIGRATIONSVERHALTENS VON HUH7-UND SP-ZELLEN 89
6.5 UNTERSUCHUNG DER REGULATORISCHEN PROTEINE IN DER MTBITC INDUZIERTEN
ZYTOTOXIZITAET 92
6.6 UEBERPRUEFUNG EINER ROS-INDUZIERTEN MAP-KINASEN-AKTIVIERUNG 97
6.7 BESTIMMUNG DER TELOMERASE-AKTIVITAET NACH EXPOSITION GEGENUEBER MTBITC
98
6.8 BEDEUTUNG DER STRESSKINASEN IN DER MTBITC INDUZIERTEN
PROLIFERATIONSINHIBIERUNG UND ZELLTODINDUKTION 100
7 DISKUSSION 104
7.1 ITC BEEINFLUSSEN DIE VIABILITAET DER HEPG2-ZELLEN IN ABHAENGIGKEIT DER
FUNKTIONELLEN SEITENGRUPPE 104
7.2 MTBITC INDUZIERT NACH EINMALIGER GABE EINE SELEKTIVE
VIABILITAETSREDUKTION 105
7.3 MTBITC INDUZIERT NACH EINER EINMALIGEN GABE IN HEPG2-ZELLEN EINE
CASPASEABHAENGIGEN APOPTOSE 108
7.4 DIE ZYTOTOXISCHEN EFFEKTE VON MTBITC ERFOLGEN UEBER EINEN G2/M -
ARREST 109
7.5 MTBITC INDUZIERT APOPTOSE IN ABHAENGIGKEIT DER
PROLIFERATIONSKAPAZITAET DER
HEPG2-ZELLEN 111
7.6 MTBITC INDUZIERT NACH MEHRFACHGABE EINE SELEKTIVE
VIABILITAETSREDUKTION,
EINEN ZELLZYKLUS-ARREST SOWIE APOPTOSE 112
7.7 MTBITC HEMMT DIE ZELLZYKLUS-PROGRESSION, DAS MIGRATIONSVERHALTEN UND
INDUZIERT APOPTOSE IN ZELLEN MIT TUMORSTAMMZELL-PHAENOTYP 113
7.8 MTBITC INDUZIERT DIE AKTIVIERUNG SOWIE DIE EXPRESSION
REGULATORISCHER
PROTEINE DER ZELLZYKLUS- UND APOPTOSEKONTROLLE 117
7.9 DIE INDUKTION VON ZELLZYKLUS-ARREST, APOPTOSE UND SUPPRESSION DER
TELOMERASE IST UNABHAENGIG VON DER MAP-KINASEN-AKTIVIERUNG 120
7.10 AUSBLICK 122
IMAGE 5
LITERATUR
124
CURRICULUM VITAE 145
DANKSAAUNA 147
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNA 149
|
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