Der Einfluss von Milchsäure auf humane T-Zellen:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1 1
1.1 DAS IMMUNSYSTEM 11
1.1.1 DIE ZELLEN DES IMMUNSYSTEMS 12
1.1.2 T-ZELLEN 13
1.2 STRATEGIEN DES IMMUNE ESCAPE BEI TUMOREN 19
1.3 TUMORMETABOLISMUS 20
1.3.1 AMINOSAEUREMETABOLISMUS: ARGININ UND TRYPTOPHAN 20
1.3.2 WARBURG- EFFEKT 22
1.3.3 LAKTATENTSTEHUNG 24
1.3.4 TUMOR-METABOLISMUS UND IMMUNSYSTEM 25
1.4 KLINISCHE RELEVANZ DES TUMORMETABOLISMUS 26
1.4.1 DIAGNOSTIK: P E T 26
1.4.2 NEUE THERAPIEANSAETZE 27
2 ZIELSETZUNG 29
3 MATERIAL U N D M E T H O D E N 3 0
3.1 MATERIALIEN 30
3.1.1 GERAETE 30
3.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 31
3.1.3 CHEMIKALIEN 31
3.1.4 MEDIEN UND ZUSAETZE 31
3.1.5 ANTIKOERPER 32
3.1.6 PRIMER 32
3.1.7 TESTSYSTEME 33
3.2 METHODEN 33
3.2.1 GEWINNUNG UND KULTUR VON ZELLEN 33
3.2.2 REINHEITSKONTROLLE IN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 37
3.2.3 PROLIFERATIONSBESTIMMUNG MIT 3 H-THYMIDIN 38
5
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.4 PROLIFERATIONSBESTIMMUNG MIT CFSE 39
3.2.5 BESTIMMUNG DER APOPTOSERATE 41
3.2.6 BESTIMMUNG DER MRNA-EXPRESSION MITTELS QUANTITATIVER REAL
TIME P C R (QRT-PCR) 42
3.2.7 BESTIMMUNG DES IL-2 MITTELS ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT
ASSAY (ELISA) 45
3.2.8 WESTERN BLOT 47
3.2.9 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG 51
3.2.10 ANALYSE DER LAKTAT-AUFNAHME MITTELS MASSENSPEKTROMETRIE . 52
4 ERGEBNISSE 55
4.1 PROLIFERATION VON T-ZELLEN NACH INKUBATION MIT MILCHSAEURE 55
4.1.1 PROLIFERATIONSBESTIMMUNG MIT 3 H-THYMIDIN 55
4.1.2 PROLIFERATIONSBESTIMMUNG MIT
CARBOXYFLUORESCEIN-DIACETAT-SUCCINIMIDYL-ESTER (CFSE) 58
4.2 APOPTOSEINDUKTION DURCH MILCHSAEURE 61
4.3 QUANTITATIVE REAL TIME P C R (QRT-PCR) ZUR BESTIMMUNG VON IFN7- UND
IL-2-MRNA 63
4.4 IL-2 VON T-ZELLEN IN ZELLUEBERSTAENDEN NACH INKUBATION MIT MILCHSAEURE
65
4.5 PROLIFERATION IN ABHAENGIGKEIT VON IL-2 67
4.5.1 MNC 68
4.5.2 CD4+ UND CD8+ ZELLEN 69
4.6 MCT-L-EXPRESSION 69
4.7 LAKTATAUFNAHME IN VERSCHIEDENEN T ZELLPOPULATIONEN 71
5 DISKUSSION 7 4
5.1 TUMORMETABOLISMUS 74
5.2 EINFLUSS VON MILCHSAEURE AUF T-ZELLEN 75
5.2.1 INHIBITION DER PROLIFERATION VERSCHIEDENER T-ZELLPOPULATIONEN
DURCH MILCHSAEURE 75
5.2.2 INDUKTION VON APOPTOSE DURCH MILCHSAEURE 76
5.2.3 SUPPRESSION DER ZYTOKIN-EXPRESSION DURCH MILCHSAEURE 76
5.2.4 UNTERSUCHUNG DES LAKTAT-TRANSPORTERS 77
5.2.5 QUANTIFIZIERUNG DER LAKTATAUFNAHME 78
5.3 KLINISCHE RELEVANZ DURCH NEUE ANSAETZE IN DER THERAPIE 78
6 ZUSAMMENFASSUNG 8 0
LITERATURVERZEICHNIS 8 1
6
IMAGE 3
DANKSAGUNG
INHALTSVERZEICHNIS
9 0
7
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