Erkennung von Candida albicans in Keratinozyten: Vergleich muriner und humaner Keratinozyten hinsichtlich der Bedeutung des Transkriptionsfaktors NF-ĸB und der Toll-like-Rezeptoren 2 und 4
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS 1
1 EINLEITUNG 3
1.1 DAS IMMUNSYSTEM 3
1.1.1. ERWORBENE IMMUNANTWORT 3
1.1.2 ANGEBORENE IMMUNANTWORT 5
1.2 TOLL-LIKE-REZEPTOREN 7
1.3 NF-KB 9
1.4 CANDIDA ALBICANS 12
1.4.1 ALLGEMEINES 12
1.4.2 PATHOGENITAET, VIRULENZFAKTOREN, ZELLWAND 13
1.4.3 KLINISCHE BEDEUTUNG 15
1.4.4 ERKENNUNG VON C. ALBICANS DURCH DAS IMMUNSYSTEM 16
1.5 KERATINOZYTEN: VORKOMMEN, DIFFENZIERUNG, IMMUNITAET UND TLR 17
1.6 ZIELSETZUNG 19
2 MATERIAL UND METHODEN 21
2.1 CHEMIKALIEN, REAGENZIEN UND MEDIEN 21
2.2 ANTIKOERPER 26
2.3 SIRNS 26
2.4 HACAT-ZELLEN 27
2.5 MAEUSE 27
2.6 CANDIDA ALBICANS 27
2.7 GERAETE/MATERIALIEN 27
2.8 METHODEN 29
2.8.1 C. A/B/CANS-SYNCHRONISIERUNG 29
2.8.2 EXTRAKTION VON KERATINOZYTEN AUS MAEUSEN 29
2.8.3 KULTIVIERUNG DER HACAT-ZELLEN 30
2.8.4 SIRNS-TRANSFEKTION 31
2.8.5 STIMULATION 31
2.8.5.1 HACAT-ZELLEN 31
2.8.5.2 MURINE KERATINOZYTEN 31
2.8.6 PROTEINISOLIERUNG UND MESSUNG 32
2.8.6.1 PROTEINISOLIERUNG AUS MURINEN KERATINOZYTEN 32
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2.8.6.2 PROTEINMESSUNG: 32
2.8.7 RNS-ISOLIERUNG UND MESSUNG AUS HACAT-ZELLEN 33
2.8.7.1 RNS-MESSUNG 34
2.8.8 EMSA 34
2.8.9 WESTERNBLOT 35
2.8.10 REAL-TIME PCR (RT-PCR) 37
3 ERGEBNISSE 41
3.1 MURINE KERATINOZYTEN 41
3.1.1 AKTIVIERUNG VON P65 IN MURINEN WILDTYPKERATINOZYTEN NACH
STIMULATION MIT
C. ALBICANS 42
3.1.2 TLR2 UND TLR4 ABHAENGIGE AKTIVIERUNG VON P65 NACH STIMULATION MIT
C. ALBICANS
(EMSA ANALYSEN) 43
3.1.3 PHOSPHORYLIERUNG VON P65 NACH STIMULATION MIT C. ALBICANS 45
3.2 HACAT (HUMANE KERATINOZYTEN) 47
3.2.1 HEMMUNG VON TLR2 UND TLR4 48
3.2.2 TLR2 UND TLR4 ABHAENGIGE EXPRESSION VON IL-1 SS UND IL-8 NACH
STIMULATION MIT
C. ALBICANS 50
3.2.3 EXPRESSION VON IL-1SS UND IL-8 IN HUMANEN KERATINOZYTEN NACH
HEMMUNG VON
P65 52
3.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG UND BENUTZTE SOFTWARE 55
4 DISKUSSION 56
4.1 ROLLE VON TLR2 UND TLR4 IN DER ERKENNUNG VON C. ALBICANS IN MURINEN
KERATINOZYTEN
AUF PROTEINEBENE 57
4.2 ROLLE VON TLR2 UND TLR4 VERMITTELTER N F - K B AKTIVIERUNG IN DER
ERKENNUNG VON
C. ALBICANS IN HUMANEN KERATINOZYTEN AUF MRNS EBENE: 59
4 . 3 ROLLE DER N F - K B UNTEREINHEIT P65 IN DER ZYTOKINPRODUKTION AUF
MRNS EBENE VON
HUMANEN KERATINOZYTEN NACH STIMULATION MIT C. ALBICANS 60
5 ZUSAMMENFASSUNG 62
6 ABKUERZUNGEN 63
7 DANKSAGUNG 66
8 LEBENSLAUF 67
LITERATURVERZEICHNIS 69
2
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