TRAIL-Resistenz im duktalen Adenokarzinom des Pankreas: molekulare Mechanismen
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IV
TABELLENVERZEICHNIS VI
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VII
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS PANKREASKARZIOM 1
1.2 APOPTOSE 1
1.2.1 INTRINSISCHER UND EXTRINSISCHER APOPTOSESIGNALWEG 2
1.2.2 DIE TRAIL-REZEPTOREN 3
1.2.3 DAS S-PHASE KINASE-ASSOZIIERTE PROTEIN 2 (SKP2) 3
1.3 HISTONDEACETYLASEN (HDACS) 4
1.4 FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG 5
2 MATERIAL UND METHODEN 6
2.1 MATERIAL 6
2.1.1 CHEMIKALIEN 6
2.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 8
2.1.3 KOMMERZIELL ERHAELTLICHE KITS 8
2.1.4 GERAETE 9
2.1.5 LOESUNGEN UND PUFFER 10
2.1.6 ANTIKOERPER 11
2.1.7 SIRNA (SMALL INTERFERING RNA) 12
2.1.8 ECHTZEIT-PCR-PRFMER 13
2.1.9 PRIMER FUER DIE SCREENING- PCR BEI KLONIERUNGEN 13
2.1.10 LUCIFERASE-REPORTERGEN ANALYSE 13
2.1.11 ZELLLINIEN 13
2.2 EXPERIMENTALMETHODEN 14
2.2.1 ZELLKULTUR 14
2.2.2 WESTERN BLOT 16
2.2.3 HOECHST-FAERBUNG. 17
2.2.4 MTT-ZELLVIABILITAETSASSAY 18
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IMAGE 2
2.2.5 LUCIFERASE-REPORTERGEN-ASSAY 18
2.2.6 CASPASE-ASSAY 19
2.2.7 FACS-ANAIYSE 19
2.2.8 ISOLIERUNG VON RNA 20
2.2.9 SEMIQUANTITATIVE POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 21
2.2.10 KLONIERUNG DER STANDARDREIHEN FUER DIE QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR
22
2.2.11 REINIGUNG DER BAKTERIELLEN PLASMID-DNA MITTELS MINIPREP 23
2.2.12 ECHTZEIT-PCR 24
2.3 STATISTISCHE ANALYSEN 24
3 ERGEBNISSE 25
3.1 SKP2 KONTROLLIERT DIE G1-PHASENPROGRESSION UND DIE RESISTENZ VON
MIAPACA2 ZELLEN GEGENUEBER TRAIL 25
3.2 DIE KONTROLLE DER TRAIL-SENSITIVITAET DURCH SKP2 IST
ZELLTYPSPEZIFISCH ....28
3.3 SKP2 IST NICHT AN DER REGULATION DER SENSITIVITAET GEGENUEBER DEM
TOPOISOMERASE II INHIBITOR ETOPOSID BETEILIGT 30
3.4 REAKTIVE SAUERSTOFFSPEZIES SIND NICHT AN DER DURCH SKP2-DEPLETION
VERMITTELTEN TRAIL-SENSITIVIERUNG BETEILIGT 31
3.5 TRAIL-BEHANDLUNG FUEHRT ZUR BESCHLEUNIGTEN SPALTUNG VON BID UND
EINER DEPLETION VON C-FLIPU XIAP UND MCL1 IN MIT SKP2- SIRNA
TRANSFIZIERTEN MIAPACA2 ZELLEN 32
3.6 DURCH SKP2-DEPLETION INITIIERTE SENSIBILISIERUNG FUER TRAIL IST
ABHAENGIG VON CASPASE 2 33
3.7 HDAC2-HERUNTERREGULATION SENSITIVIERT DUKTALE
PANKREASKARZINOMZELLEN FUER TRAIL-INDUZIERTE APOPTOSE 34
3.8 VALPROINSAEURE SENSITIVIERT DUKTALE PANKREASKARZINOMZELLEN FUER
TRAIL-INDUZIERTE APOPTOSE 36
3.9 TRAIL-VERMITTELTE APOPTOSE WIRD IN DUKTALEN
PANKREASKARZINOMZELLEN NICHT DURCH HDAC1 BEEINFLUSST 38
3.10 HDAC2-ABHAENGIGE REGULATION DES BH3-ON/Y PROTEINS NOXA IST
NICHT AN DER DURCH HDAC2-DEPLETION VERMITTELTEN SENSITIVIERUNG
GEGENUEBER TRAIL BETEILIGT OR
IMAGE 3
3.11 HDAC2 REGULIERT DEN TRAIL-REZEPTOR DR5 IN MIAPACA2 ZELLEN 40
3.12 HDAC2 KONTROLLIERT NF-KB IN DUKTALEN PANKREASKARZINOMZELLEN 43
3.13 CASPASE 2 IST AN DER SENSITIVIERUNG VON HDAC2-DEPLETIERTEN
MIAPACA2 ZELLEN GEGENUEBER TRAIL BETEILIGT 44
4 DISKUSSION 47
4.1 S-PHASE KINASE-ASSOZIIERTES PROTEIN 2 (SKP2) KONTROLLIERT DIE
RESISTENZ GEGENUEBER TRAIL IM DUKTALEN PANKREASKARZIOM 47
4.2 HISTONDEACETYLASE 2 (HDAC2) KONTROLLIERT DIE TRAIL-RESISTENZ IM
DUKTALEN PANKREASKARZIOM 48
4.3 FUNKTION DER CASPASE 2 IN DER TRAIL-INDUZIERTEN APOPTOSE VON
PANKREASKARZINOMZELLEN 51
4.4 AUSBLICKE 52
5 ZUSAMMENFASSUNG 53
6 LITERATURVERZEICHNIS 54
LEBENSLAUF 61
DANKSAGUNG 63
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