Der Einfluss von 17beta-Estradiol auf die chondrogene Differenzierung humaner mesenchymaler Stammzellen:
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INHALTSVERZEICHNIS
I N HA I TSVERZEICH N IS
1 EINLEITUNG 4
1.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG 4
1.2 KNORPELGEWEBE 5
1.2.1 MOLEKULARE KNORPELZUSAMMENSETZUNG 5
1.2.2 STRUKTUR DES GELENKKNORPELS 7
1.3 GELENKKNORPELVERLETZUNGEN 9
1.4 THERAPEUTISCHE VERFAHREN BEI KNORPELSCHAEDEN 10
1.4.1 KONSERVATIVE THERAPIE 11
1.4.2 OPERATIVE THERAPIE 11
1.4.3 WEITERE SYMPTOMATISCHE THERAPIEVERFAHREN 14
1.5 MESENCHYMALE STAMMZELLEN 15
1.5.1 URSPRUNG UND HERKUNFT 15
1.5.2 EIGENSCHAFTEN 16
1.5.3 CHARAKTERISIERUNG 17
1.6 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG VON MESENCHYMALEN STAMMZELLEN IN VITRO .
. 17
1.7 THERAPEUTISCHE VERWENDUNG VON MESENCHYMALEN STAMMZELLEN 19 1.8
KNORPEL ALS SEXUALHORMON-SENSITIVES GEWEBE 21
1.9 UEBERBLICK UEBER ESTROGEN-WIRKUNGSWEGE 22
1.10 PROJEKTBESCHREIBUNG UND VORERGEBNISSE 26
1.10.1 ETABLIERUNG EINES IN VITRO CHONDROGENESEMODELLS 27
1.10.2 SEXUALHORMONREZEPTOREN WAEHREND DER CHONDROGENESE 27 1.10.3
STEROIDHORMONZUGABE IN DER PROLIFERATIONSPHASE 28
1.10.4 STEROIDHORMONZUGABE IN DER DIFFERENZIERUNGSPHASE 28
1.10.5 DOSIS-WIRKUNGS-BEZIEHUNG DER ESTROGENZUGABE 29
1.10.6 BEEINFLUSSUNG DER OESTROGENWIRKUNG DURCH ICI 182.780 29 1.10.7
ZUSAMMENFASSUNG DER VORERGEBNISSE 29
1.11 FRAGESTELLUNGEN DIESER ARBEIT 30
2 MATERIAL 3 2
2.1 GERAETE 32
2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 33
2.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 33
2.4 MEDIEN, MEDIENZUSAETZE UND SEREN 35
2.5 SPEZIFISCHE MEDIENZUSAETZE 36
1
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INHALTSVERZEICHNIS
2.6 ANTIKOERPER UND ENZYME 37
2.7 PUFFER UND LOESUNGEN 37
2.7.1 HISTOLOGIE 37
2.7.2 IMMUNHISTOCHEMIE 38
2.7.3 ELISAVERDAU 39
2.7.4 SONSTIGE LOESUNGEN 40
2.8 TEST-KITS 40
2.9 ZELLMATERIAL 41
2.10 COMPUTERPROGRAMME 41
3 METHODEN 4 2
3.1 ISOLIERUNG UND KULTIVIERUNG MESENCHYMALER STAMMZELLEN 42
3.1.1 ZELLGEWINNUNG AUS DEM KNOCHENMARK 42
3.1.2 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL UND DER VITALITAET 43
3.1.3 KRYOKONSERVIERUNG VON ZELLEN 43
3.1.4 AMPLIFIZIERUNG 44
3.2 IN VITRO CHONDROGENESEMODELL 44
3.2.1 SEQUENZIELLE ZUGABE VON 17/3-ESTRADIOL 46
3.2.2 SEQUENZIELLE ZUGABE VON E2-BSA 47
3.2.3 UNTERSUCHUNG NICHT-KLASSISCHER ESTROGENEFFEKTE UEBER GPR30 . . . .
48
3.2.4 BLOCKIERUNG NICHT-KLASSISCHER ESTROGENEFFEKTE UEBER GPR30 49 3.2.5
DOSIS-WIRKUNGS-BEZIEHUNG DER ESTROGENZUGABE BEI WEIBLICHEN MSCS 49
3.3 MAKROSKOPIE 50
3.4 HISTOLOGISCHE UND IMMUNOLOGISCHE FAERBUNGEN 50
3.4.1 GEWEBEVORBEREITUNG FUER HISTOLOGISCHE UND IMMUNOLOGISCHE METHODEN
51 3.4.2 HISTOLOGISCHE DMMB-FAERBUNG 51
3.4.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE KOLLAGEN TYP II-DETEKTION 51
3.5 BIOCHEMISCHE ANALYSEVERFAHREN 53
3.5.1 GEWEBEAUFBEREITUNG FUER BIOCHEMISCHE ANALYSEVERFAHREN 53
3.5.2 DNA-BESTIMMUNG 54
3.5.3 GAG-BESTIMMUNG 54
3.5.4 KOLLAGEN TYP II-BESTIMMUNG 55
3.6 STATISTIK 56
4 ERGEBNISSE 5 8
4.1 WIRKUNG VON 17/3-ESTRADIOL 58
2
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
4.2 WIRKUNG VON E2-BSA 61
4.3 NICHT-KLASSISCHE ESTROGENWIRKUNG UEBER GPR30 63
4.4 BLOCKIERUNG DER NICHT-KLASSISCHEN ESTROGENWIRKUNG UEBER GPR30 66
4.5 WIRKUNG VON ESTROGEN BEI WEIBLICHEN HMSCS 69
5 DISKUSSION 7 1
5.1 ESTROGENSENSIBLE PHASEN IM VERLAUF DER CHONDROGENEN DIFFERENZIERUNG
. . 73
5.2 MEMBRANVERMITTELTE ESTROGENEFFEKTE UEBER GPR30 75
5.3 ESTROGENWIRKUNG AUF DIE CHONDROGENESE VON MSCS WEIBLICHER
SPENDERINNEN 77
5.4 AUSBLICK 78
6 ZUSAMMENFASSUNG 8 0
7 LITERATUR 8 1
8 ANHANG 9 6
8.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 96
8.2 TABELLENVERZEICHNIS 96
8.3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 97
8.4 AUSWERTUNG DER BIOCHEMISCHEN ANALYSE 100
9 ERKLAERUNGEN 1 0 2
9.1 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 102
9.2 ERKLAERUNG ZUR ANREGUNG UND UEBERWACHUNG DER DISSERTATION 102
10 DANKSAGUNG 1 0 3
11 LEBENSLAUF 1 0 4
3
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