Rolle des Hepatoadipokins Chemerin in der Entstehung von Insulinresistenz, Dyslipidämie und Atherosklerose im Mausmodell:
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INHALT 5
INHALT
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 8
TABELIENVERZEICHNIS 1 1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 12
1 ZUSAMMENFASSUNG 16
2 EINLEITUNG 17
2.1 DAS METABOLISCHE SYNDROM 17
2.1.1 EINLEITUNG U N D DEFINITION 17
2.1.2 EPIDEMIOLOGIE D E S METS 19
2.1.3 KOMPONENTEN D E S METABOLISCHEN SYNDROMS 19
2.1.3.1 ADIPOSITAS 19
2.1.3.2 HYPERTONIE 2 1
2.1.3.3 DYSIIPOPROTEINAEMIE 22
2.1.3.4 GLUKOSEINTOLERANZ, INSULINRESISTENZ UND DIABETES MELLITUS 2 3
2.2 DER INSULINSIGNALWEG 2 6
2.2.1 INSULIN 2 6
2.2.2 DER INSULINREZEPTOR UND INSULINSIGNALWEG 2 6
2.2.2.1 DER PI3K-SIGNALWEG 26
2.2.2.2 AMPKA U N D INSULINSIGNALWEG 2 8
2.3 ZYTOKINE 3 0
2.3.1.1 ADIPOKINE 3 0
2.3.2 CHEMERIN 3 1
2.3.3 ENTDECKUNG VON CHEMERIN 3 1
2.3.4 STRUKTUR U N D PROZESSIERUNG V O N CHEMERIN 3 1
2.3.5 PHYSIOLOGISCHE ROLLE VON CHEMERIN 3 3
2.3.5.1 CHEMERIN UND IMMUNSYSTEM 3 3
2.3.5.2 CHEMERIN UND ADIPOSITAS 3 5
2.3.5.3 CHEMERIN U N D GLUKOSEHOMOEOSTASE 36
2.4 ADENO-ASSOZIIERTE VIREN 3 8
2.4.1 ALLGEMEIN 38
2.4.2 AAV2.8 3 8
2.4.3 STRUKTUR 3 9
2.4.3.1 INVERTED TERMINAL REPEATS (ITRS) 39
2.4.3.2 REP-GENE UND REP-PROTELNE 39
2.4.3.3 CAP-GENE UND VP-PROTEINE 4 0
2.4.4 INFEKTIONSZYKLUS 4 1
2.4.5 AAVS IN D E R GENTHERAPIE 4 1
2.5 FRAGESTELLUNG U N D ZIEL D E R ARBEIT 4 3
3 MATERIAL UND METHODEN 45
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IMAGE 2
INHALT 6
3.1 VERBRAUCHSMATERIALIEN U N D V E R W E N D E T E KITS 4 5
3.2 GERAETE 4 8
3.3 MOLEKUIARBIOLOGISCHE M E T H O D E N 4 9
3.3.1 ERSTELLEN VON CDNA-BIBLIOTHEKEN 4 9
3.3.1.1 RNA-ISOLATION AUS ZELLEN 4 9
3.3.1.2 RNA-ISOLATION AUS GEWEBE 4 9
3.3.1.3 DNASE-VERDAU 4 9
3.3.1.3.1 REVERSE TRANSKRIPTION-PCR (RT-PCR) SO
3.3.2 RNA U N D DNA QUANTIFIZIERUNG 5 1
3.3.3 PCR-METHODEN 5 1
3.3.3.1 PCR AMPLIFIKATION VON DNA 5 1
3.3.3.2 LIBRARY PCR 52
3.3.3.3 KOLONIESCREENING PCR 5 3
3.3.3.4 QUANTITATIVE REAL TIME-PCR (QRT-PCR) 5 4
3.3.3.4.1 VIRUSQUANTIFIZIERUNG 5 6
3.3.3.4.2 GENEXPRESSION 5 7
3.4 DNA SEQUENZIERUNG 5 8
3.5 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 5 8
3.5.1 REINIGUNG VON DNA AUS AGAROSEGELEN 5 9
3.5.2 REINIGUNG VON DNA NACH ENZYMATISCHEN REAKTIONEN 5 9
3.6 KLONIERUNG VON CHEMERIN 59
3.6.1 RESTRIKTIONSVERDAU 5 9
3.6.2 KLONIERUNG VON CHEMERIN 6 0
3.6.3 LLGATION 6 1
3.7 MIKROBIOLOGISCHE M E T H O D E N 6 1
3.7.1 TRANSFORMATION K O M P E T E N T E R E.COLL 6 1
3.7.1.1 TRANSFORMATION DH5A 6 1
3.7.1.2 TRANSFORMATION S T B L 2 6 1
3.7.2 PLASMIDPRAEPARATION AUS E.COII 6 2
3.8 PROTEINCHEMISCHE M E T H O D E N 6 2
3.8.1 IMMUNOBLOTTING 6 2
3.8.2 PROTEINPRAEPARATION AUS G E W E B E N 6 2
3.8.3 PROTEINMENGENBESTIMMUNG NACH BRADFORD 6 3
3.8.4 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE 6 3
3.8.4.1 DETEKTION 6 5
3.8.4.2 STRIPPING 6 6
3.8.5 ELISA 6 6
3.8.5.1 SANDWICH ELISA 66
3.9 ZELLBIOLOGISCHE M E T H O D E N 67
3.9.1 ZELLKULTUR 6 7
IMAGE 3
INHALT 7
3 . 9 . 1 . 1 Z E L L L I N I E 6 7
3 . 9 . 1 . 2 K U L T I V I E R U N G 6 8
3.9.1.3 PASSAGIEREN D E R HEK-Z93T ZELLEN 6 8
3,9.2 PRODUKTION D E R AAVS 6 8
3.9.2.1 TRANSFEKTION VON HEK-293T ZELLEN MIT POLYETHYLENIMID (PEI) 6 8
3.9.2.1.1 VIRUSAUFREINIGUNG MIT CAESIUMCHLORIDGRADIENT 69
3.10 IN VIVO STUDIEN 7 1
3.10.1 TIERSTUDIEN 7 1
3.10.1.1 VERSUCHSABLAUF C57BL/6 WILDTYPMAEUSE 7 1
3.10.1.2 VERSUCHSABLAUF LDLR-KO MAEUSEN 72
3.10.2 INTRA PERITONEALER GLUKOSETOLERANZTEST (IPGTT) 72
3.10.3 INTRA PERITONEALER INSULINTOLERANZTEST (IPITT) 7 2
3.11 HISTOLOGISCHE M E T H O D E N 7 3
3.11.1 LACZ-FAERBUNG VON GEFRIERSCHNITTEN 7 3
3.11.2 AORTENFAERBUNG UND QUANTIFIZIERUNG 7 4
4 ERGEBNISSE 75
4.1 EFFEKTE VON H U M A N E M CHEMERIN A U F DIE REGULATION VON GLUKOSE-
UND LIPIDSTOFFWECHSEL IN
C57BL/6 MAEUSEN 7 5
4.1.1 NACHWEIS D E R AAV-VERMITTELTEN H U M A N E N CHEMERIN EXPRESSION
IN C57BL/6 MAEUSEN 77
4.1.1.1 NACHWEIS D E R CHEMERIN MRNA-EXPRESSION IN C57BL/6 MAEUSEN 7 7
4.1.1.2 NACHWEIS VON CHEMERIN IM SERUM VON C57BL/6 MAEUSEN 7 8
4.1.2 EFFEKT VON CHEMERIN A U F D A S KOERPERGEWICHT VON C57BL/6 MAEUSEN 8
0
4.1.3 EFFEKT VON CHEMERIN A U F D E N GLUKOSESTOFFWECHSEL VON C57BL/6
MAEUSEN 8 1
4.1.4 EFFEKT VON CHEMERIN A U F DIE SERUMLIPIDE IN C57BL76 MAEUSEN 8 3
4.2 EFFEKTE VON H U M A N E M CHEMERIN A U F DIE REGULATION VON GLUKOSE-
UND LIPIDSTOFFWECHSEL IN LDLR- KO MAEUSEN 8 5
4.2.1 NACHWEIS D E R AAV-VERMITTELTEN H U M A N E N CHEMERIN EXPRESSION
IN LDLR-KO MAEUSEN 8 7
4.2.1.1 NACHWEIS D E R CHEMERIN MRNA-EXPRESSION IN LDLR-KO MAEUSEN 8 7
4.2.1.2 NACHWEIS VON CHEMERIN IM SERUM VON LDLR-KO MAEUSEN 8 7
4.2.2 EFFEKT VON CHEMERIN A U F DAS KOERPERGEWICHT VON LDLR-KO MAEUSEN 9 0
4.2.3 EFFEKT VON CHEMERIN A U F D E N GLUKOSESTOFFWECHSEL VON LDLR-KO
MAEUSEN 9 1
4.2.4 EFFEKT VON CHEMERIN A U F DIE SERUMLIPIDE IN LDLR-KO MAEUSEN 9 5
4.2.5 EFFEKT VON CHEMERIN A U F ATHEROSKLEROSE IN LDLR-KO MAEUSEN 9 6
5 DISKUSSION 9 8
6 LITERATURVERZEICHNIS 107
7 DANKSAGUNG 118
8 LEBENSLAUF 119
9 ERKLAERUNG 121
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