Auswirkungen von peroximalen Defekten auf die mitochondriale Beta-Oxidation:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2012
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| Beschreibung: | 64 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 5
1.1. BETA-OXIDATION VON FETTSAEUREN 5
1.2. FUNKTIONELLE ZUSAMMENHAENGE ZWISCHEN MITOCHONDRIALER U N D
PEROXISOMALER BETAOXIDATION 6
1.2.1. DEFEKTE D E R PEROXISOMALEN BETA-OXIDATION U N D IHRE
AUSWIRKUNGEN A U F MITOCHONDRIALE
FUNKTIONEN 7
1.2.2. MITOCHONDRIALE ENTSTEHUNG VON ACYLCARNITINEN U N D ATYPISCHE
ACYLCARNITINE BEI
PEROXISOMALEN DEFEKTEN 7
1.3. ANALYTISCHE VERFAHREN Z U R QUANTIFIZIERUNG VON ACYLCARNITINEN 1 0
1.4. INDIREKTE HINWEISE A U F EINE INTERAKTION D E R PEROXISOMEN U N D
MITOCHONDRIEN BEI D E R
OXIDATION VON FETTSAEUREN 10
1.5. BISHERIGE METHODISCHE ANSAETZE 1 1
1.6. ZIELE 1 3
2. MATERIAL UND METHODEN 1 4
2.1. GERAETE 1 4
2.2. SONSTIGE HILFSMITTEL 14
2.3. CHEMIKALIEN U N D REAGENZIEN 15
2.4. PUFFER U N D LOESUNGEN 1 6
2.5. ZELLLINIEN U N D ZELLKULTUR : 1 7
2.5.1. PRIMAERKULTUREN 1 7
2.5.2. EXPERIMENTELLE ZELLKULTUR 1 7
2.5.3. BESTIMMUNG D E R ZELLZAHL 1 8
2.6. BESTIMMUNG D E R AKKUMULATION VON ACYLCARNITINEN IN INTAKTEN ZELLEN
1 8
2.7. BESTIMMUNG VON ACYLCARNITINEN A U S PERMEABILISIERTEN ZELLEN U N D
UEBERSTAND 1 9
2.7.1. AUFREINIGUNG VON DIGITONIN 2 0
2.7.2. PERMEABILISIERUNG D E R ZELLMEMBRAN M I T DIGITONIN 2 1
2.7.3. HERSTELLUNG EINER SUBSTRAT-LOESUNG M I T LIGNOCERINSAEURE (C24:0] 2
1
2.7.4. HERSTELLUNG EINER LOESUNG M I T PALMITINSAEURE (C16:0) 2 1
2.7.5. INKUBATION D E R ZELLEN M I T GELOESTEN FETTSAEURE-SUBSTRATEN 2 2
2.7.6. EXTRAKTION VON ACYLCARNITINEN A U S ZELLEN U N D MEDIUM 2 2
2.7.7. IONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE UE B E R SOLID PHASE EXTRACTION 2 2
2.7.8. QUANTIFIZIERUNG D E R EINZELNEN ACYLCARNITINE 2 3
2.8. BESTIMMUNG D E R GESAMTPROTEINMENGE 2 4
3
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IMAGE 2
2.9. NORMALISIERUNG D E R METABOLITEN-KONZENTRATIONEN A U F D E N
PROTEINGEHALT 2 5
2.10. BESTIMMUNG DES QUANTIFIZIERUNGSLIMITS 2 6
2.11. STATISTISCHE AUSWERTUNG 2 6
2.12. ETABLIERUNG D E R METHODIK 2 6
2.12.1. SYNTHESE VON ACYLCARNITINEN A U S D E M KATABOLISMUS D E R
SUBSTRATE LIGNOCERINSAEURE U N D
PALMITINSAEURE IN ABHAENGIGKEIT VON D E R INKUBATIONSDAUER 2 6
2.12.2. SYNTHESE VON ACYLCARNITINEN A U S DEM KATABOLISMUS D E R
SUBSTRATE LIGNOCERINSAEURE U N D
PALMITINSAEURE IN ABHAENGIGKEIT VON D E R KONZENTRATION 2 8
3. ERGEBNISSE 3 0
3.1. AKKUMULATION VON ACYLCARNITINEN IN INTAKTEN FIBROBLASTEN 3 0
3.1.1. EVALUIERUNG D E R METHODIK 3 0
3.1.2. ACYLCARNITINPROFILE BEI PEROXISOMALEN DEFEKTEN 3 3
3.2. KATABOLISMUS VON FETTSAEURE-SUBSTRATEN ZU ACYLCARNITINEN A N IN SITU
PERMEABILISIERTEN
FIBROBLASTEN 3 7
3.2.1. EFFEKT D E R BELADUNG M I T LIGNOCERINSAEURE BEI IN SITU
PERMEABILISIERTEN FIBROBLASTEN 3 9
3.2.2. EVALUIERUNG DES EFFEKTES D E R PERMEABILISIERUNG A U F DIE
IN-SITU-SYNTHESE VON
ACYLCARNITINEN IN HUMANEN FIBROBLASTEN 4 1
3.2.3. KATABOLISMUS VON LIGNOCERINSAEURE BEI PEROXISOMALEN DEFEKTEN 4 2
3.2.4. KATABOLISMUS VON PALMITINSAEURE BEI PEROXISOMALEN DEFEKTEN 4 4
4. DISKUSSION 4 6
4.1. INDIREKTE GLOBALE HINWEISE A U F EINE INTERAKTION ZWISCHEN
PEROXISOMALER U N D
MITOCHONDRIALER BETA-OXIDATION VON FETTSAEUREN 4 6
4.2. QUANTIFIZIERUNG D E R AKKUMULATION VON ACYLCARNITINEN IN INTAKTEN
FIBROBLASTEN 4 8
4.3. METHODIK Z U R UNTERSUCHUNG D E S KATABOLISMUS VON
FETTSAEURE-SUBSTRATEN ZU ACYLCARNITINEN
IN IN SITU PERMEABILISIERTEN FIBROBLASTEN 4 9
4.4. METHODISCHER FORTSCHRITT 5 1
5. ZUSAMMENFASSUNG U N D AUSBLICK 5 3
6. LITERATURVERZEICHNIS 5 4
7. ANHANG 5 9
7.1. VERZEICHNIS D E R ABKUERZUNGEN 5 9
7.2. DANKSAGUNG 6 1
7.3. LEBENSLAUF. 6 2
7.4 VEROEFFENTLICHUNGEN 6 3
4
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