Bestimmung der humoralen Immunantwort nach Varizellenimpfung gegenüber differenten Genotypen des Varicella-Zoster- Virus:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 HISTORIE DES VARICELLA-ZOSTER-VIRUS..; 3
2.2 KLASSIFIZIERUNG DER HUMANPATHOGENEN HERPESVIREN 4
2.3 MOLEKULARBIOLOGIE UND REPLIKATION DES VARICELLA-ZOSTER-VIRUS 5
2.3.1 MORPHOLOGIE UND GENOMORGANISATION 5
2.3.2 LYTISCHER INFEKTIONSZYKLUS DES VARICELLA-ZOSTER-VIRUS 8
2.3.3 GENOTYPISIERUNG DES VARICELLA-ZOSTER-VIRUS 9
2.4 EPIDEMIOLOGIE, PATHOGENESE, KLINIK UND DIAGNOSTIK DER
VARICELLA-ZOSTER-VIRUS-ERKRANKUNGEN 1 1
2.5 THERAPIE UND PROPHYLAXE DER VARICELLA-ZOSTER-VIRUS-ERKRANKUNGEN 19
3 ZIELE DER ARBEIT 24
4 MATERIAL UND METHODEN 25
4.1 MATERIAL 25
4.1.1 UNTERSUCHUNGSMATERIAL FUER DIE VIRALE GENOTYPISIERUNG 25
4.1.2 PATIENTEN 25
4.1.3 VARICELLA-ZOSTER-VIRUS-STAEMME F UE R IMMUNOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
27
4.1.4 VARICELLA-ZOSTER-VIRUS-REFERENZSTAEMME 29
4.1.5 SERUMPROBEN VON GEIMPFTEN PERSONEN 29
4.1.6 PRIMER 30
4.1.7 CHEMIKALIEN, PUFFER, MEDIEN UND ENZYME 3 1
4.1.8 AGAROSEGELE 34
4.1.9 KITSYSTEME 34
4.1.10 GERAETE UND TECHNISCHE HILFSMITTEL 35
4.2 METHODEN 36
4.2.1 ZELLKULTURPASSAGIERUNG 36
4.2.2 VIRUSANZUCHT 36
4.2.3 VIRUSPASSAGIERUNG 36
4.2.4 DNA-PRAEPARATION 37
IV
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.5 AMPLIFIKATION DER VIRALEN DNA 38
4.2.6 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 39
4.2.7 AUFREINIGUNG DER AMPLIFIKATE 4 0
4.2.8 DNA-SEQUENZIERUNG 4 1
4.2.9 ANALYSE DER SEQUENZDATEN 43
4.2.10 BESTIMMUNG DES VIRUSTITERS 43
4.2.11 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET VON MEERSCHWEINCHENKOMPLEMENT 44
4.2.12 NEUTRALISATIONSTEST 45
4.2.13 FLUORESZENZ-ANTIKOERPER-MEMBRAN-ANTIGEN-TEST 46
4.2.14 STATISTISCHE ANALYSE 47
5 ERGEBNISSE 48
5.1 VIRUSANZUCHT FUER DIE GENOTYPISIERUNG 48
5.2 AMPLIFIKATION DER DNA-FRAGMENTE 48
5.3 SEQUENZIERUNG UND GENOTYPISIERUNG 49
5.3.1 SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS 50
5.3.2 SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS DER REFERENZSTAEMME 50
5.3.3 SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS DER PATIENTENSTAEMME IM VERGLEICH
ZUM JEWEILIGEN REFERENZSTAMM
54
5.3.4 GENOTYPENVERTEILUNG IN ABHAENGIGKEIT VON DER KLINISCHEN DIAGNOSE 65
5.4 NEUTRALISIERENDE ANTIKOERPER GEGEN DIFFERENTE GENOTYPEN, SUBGENOTYPEN
UND VARIANTEN DES
VARICELLA-ZOSTER-VIRUS 65
5.5 GLYKOPROTEIN-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER GEGEN DIFFERENTE GENOTYPEN,
SUBGENOTYPEN UND VARIANTEN
DES VARICELLA-ZOSTER-VIRUS 67
5.6 VERGLEICH UND STATISTISCHE AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE DES
NEUTRALISATIONSTEST UND DES
FLUORESZENZ-ANTIKOERPER-MEMBRAN-ANTIGEN-TESTS 69
6 DISKUSSION 70
6.1 GENOTYPISIERUNG DES VARICELLA-ZOSTER-VIRUS 70
6.2 VERGLEICH DER GENOTYPISIERUNGSERGEBNISSE M I T INTERNATIONALEN
STUDIEN 73
6.3 SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMEN, SUBGENOTYPEN UND VARIANTEN 78
6.4 GENOTYPISIERUNGSMETHODEN IM VERGLEICH 82
V
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
6.5 IMMUNANTWORT NACH VARIZELLENIMPFUNG GEGENUEBER DIFFERENTEN
VARICELLA-ZOSTER-VIRUS-GENOTYPEN
84
6.6 NEUTRALISATIONSTEST UND FLUORESZENZ-ANTIKOERPER-MEMBRAN-ANTIGEN-TEST
ZUR BESTIMMUNG DES
VARICELLA-ZOSTER-VIRUS-IMMUNSTATUS 86
6.7 AUSWIRKUNG DER VARIZELLENSCHUTZIMPFUNG AUF DIE EPIDEMIOLOGIE DER
VARIZELLEN 88
7 SCHLUSSFOLGERUNGEN 9 1
8 ANHANG 93
8.1 LITERATURVERZEICHNIS 93
8.2 DANKSAGUNG 103
8.3 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 104
V I
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