Synthese und Charakterisierung eines synthetischen Antikörpers:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 UEBERSICHT 1
1.2 EGFR ALS MOLEKULARES ZIEL VON TUMORTHERAPIEN 2
1.3 MONOKLONALE ANTIKOERPER GEGEN EGFR 4
1.4 ALTERNATIVE ANTIKOERPER-BASIERTE STRATEGIEN 6
1.5 DER SYNTHETISCHE ANTIKOERPER 8
1.6 ZIELE DER ARBEIT 12
2. MATERIAL UND METHODEN 13
2.1 CHEMIKALIEN 13
2.2 INSTRUMENTATION 13
2.3 LOESUNGEN UND PUFFER 15
2.4 CHEMISCHE METHODEN 16
2.4.1 FESTPHASENSYNTHESE VON PEPTIDEN 16
2.4.2 ACETYLIERUNG VON PEPTIDEN 18
2.4.3 FLUORESZENZMARKIERUNG VON PEPTIDEN 18
2.4.4 OXIMLIGATION VON PEPTIDEN 19
2.4.5 AUFREINIGUNG VON PEPTIDEN 20
2.4.6 QUALITAETSANALYSE VON PEPTIDEN 20
2.5 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 21
2.5.1 KULTIVIERUNG HUMANER TUMORZELLEN 21
2.5.2 IMMUNFLUORESZENZFARBUNG 22
2.5.3 ISOLATION NEUTROPHILER GRANULOZYTEN 23
2.5.4 CHEMOTAXIS VON IMMUNZELLEN (TRANSWELL) 23
2.5.5 ISOLATION VON MAKROPHAGEN 24
2.5.6 CHEMOTAXIS VON IMMUNZELLEN (SCRATCH) 25
2.5.7 FLUORESZENZAKTIVIERTE ZELLSORTIERUNG 27
2.5.8 STABILITAET DES SAB IN BLUTSERUM 27
2.6 BIOPHYSIKALISCHE METHODEN 28
2.6.1 DYNAMISCHE UND STATISCHE LICHTSTREUUNG 28
2.6.2 OBERFLAECHENPLASMONENRESONANZ 28
2.7 PROTEINCHEMISCHE METHODEN 29
2.7.1 LOESLICHKEIT VON PEPTIDEN 29
2.7.2 LANGZEITSTABILITAET DES SAB 30
2.7.3 ENDOTOXINGEHALT VON PEPTIDEN 30
I
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2.8 PHARMAKOLOGISCHE METHODEN 31
2.8.1 TOXIZITAET DES SAB UND MAXIMAL TOLERIERTE ANWENDUNGSDOSIS 31
2.8.2 SAB-INDUZIERTE IMMUNANTWORT 32
3. ERGEBNISSE 33
3.1 FESTPHASENSYNTHESE DES SAB 33
3.1.1 FLUORESZENZMARKIERUNG VON PEPTIDEN 40
3.2 KONVERGENTE SYNTHESE DES SAB 42
3.3 ENDOTOXINGEHALT DER SYNTHETISIERTEN PEPTIDE 46
3.4 LOESLICHKEIT DER SYNTHETISIERTEN PEPTIDE 47
3.5 DISPERSITAET DES SAB 51
3.6 STABILITAET DES SAB IN BLUTSERUM 53
3.7 TEMPERATUR- UND LANGZEITSTABILITAET DES SAB 56
3.8 VERFUEGBARKEIT VON SAB-PEPTIDEN ALS MARKER UND IHRE MITOGENITAET 60
3.9 AFFINITAETSBESTIMMUNG VON SAB-PEPTIDEN ZU EGFR 63
3.10 CHEMOTAKTISCHE POTENZ DES SAB BEI IMMUNZELLEN 66
3.11 CHEMOTAKTISCHE POTENZ DES SAB IN DER TUMOR- UND IMMUNZELLEN-
COKULTUR 68
3.12 BINDUNGSMUSTER DES SAB AN TUMORZELLLINIEN 70
3.13 TOXIZITAET DES SAB IN VIVO 74
3.14 SAB-INDUZIERTE IMMUNANTWORT 77
4. DISKUSSION 80
4.1 SYNTHESE DES SAB 80
4.2 STABILITAET DES SAB 82
4.3 BINDUNGSEIGENSCHAFTEN DES SAB 83
4.4 CHEMOTAKTISCHE POTENZ DES SAB 86
4.5 VERTRAEGLICHKEIT DES SAB IN VIVO 88
5. ZUSAMMENFASSUNG 90
5.1 SUMMARY 91
6. LITERATUR 92
7. ANHANG 101
II
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