Der Einfluss von NPHP4 auf den kanonischen Wnt-Signaltransduktionsweg:
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| Veröffentlicht: |
2012
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I N HA ITSVERZEICH N IS
1. E I N L E I T U N G 1
1.1. MIT NPHP4 ASSOZIIERTE KRANKHEITEN 1
1.1.1. NEPHRONOPHTHISE 1
1.1.2. SENIOR-L0KEN SYNDROM UND RETINITIS PIGMENTOSA 3
1.1.3. KONGENITALE OKULOMOTORISCHE APRAXIE TYP COGAN 3
1.1.4. ANDERE ASSOZIIERTE ERKRANKUNGEN 4
1.2. NPHP4 UND ANDERE NEPHROZYSTOPROTEINE 5
1.2.1. ZUSAMNIENSPIEL DER NEPHROZYSTOPROTEINE AM ZILIUM . . . . 5 1.2.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN VON NPHP4 6 1.2.3. NPHP4 IN
TICRMODELLEN 7
1.3. SS-CATENIN, DISHEVELLED UND DER WNT-SIGNALTRANSDUKTIONSWEG . . . . 9
1.3.1. SS-CATENIN ABHAENGIGER WNT-SIGNALTRAUSDUKTIONSWEG 9 1.3.2. NICHT
KANONISCHE WNT-SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE 10
1.3.3. REGULATION VON DISHEVELLED 11
1.4. ANAPC2 UND DER ZELLZYKLUS 12
1.4.1. KONTROLLE DES ZELLZYKLUSSES DURCH UBIQUITINIERUNG 12 1.4.2.
SUBSTRATERKENNUNG UND REGIILATION VON A P C / C 13
1.4.3. ANAPHASE PRONIOTING COINPLEX SUBUNIT 2 15
1.5. ZIELSETZUNG DER ARBEIT 15
2. MATERIALIEN 17
2.1. MATERIALIEN UND LOESUNGEN 17
2.1.1. CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSNIATERIALIEN 17
2.1.2. KITS 18
2.1.3. ENZYME 18
2.1.4. PUFFER 19
2.1.5. BAKTERIENSTAEMME. MEDIEN UND ANTIBIOTIKA 19
2.1.6. ZELLEN 19
3. METHODEN 2 1
3.1. METHODEN MIT DNA 21
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IMAGE 2
INHAL TSVERZEICHNIS
3.1.1. POLYMERASE-KETTENREAKTION 21
3.1.2. RESTRIKTIONSVERDAU 21
3.1.3. GELELEKTROPHORESE 22
3.1.4. SEQUENZIERUNG 22
3.1.5. LIGATION 22
3.1.6. TRANSFORMATION UND AMPLIFIKATION VON PLASMIDEN 22
3.1.7. BESTIMMUNG DER DNA-KONZENTRATION 23
3.1.8. MIRIIKULTUR UND MINIPRAEPARATION 23
3.1.9. MAXIKULTUR UND MAXIPRAEPARATION 24
3.2. METHODEN MIT EUKARYOTEN ZELLEN 24
3.2.1. ZELLKULTUR 24
3.2.2. TRANSIENTE TRANSFEKTION 25
3.2.3. TRANSDUKTION 25
3.2.4. ZELLLYSAT VON HEK 293T-ZELLEN 26
3.2.5. ZYTOPLASMATISCHES ZELLLYSAT 26
3.2.6. IMMUNFLUORESZENZ 27
3.3. METHODEN MIT PROTEINEN 27
3.3.1. BESTIMMUNG VON PROT.EINKONZNNTRATIONEN NACH BRADFORD . . 27
3.3.2. CO-IMMUNPRAEZIPITATION 27
3.3.3. SDS-GELELEKTROPHORESE UND WESTERN-BLOT 28
3.3.4. TOPFLASH-LUCIFERASE-ASSAY 29
3.4. MATHEMATISCHE MEDTHODEN 30
3.4.1. MANN-WHITNEY-U-TEST 30
4. ERGEBNISSE 3 1
4.1. NPHP4 BLOCKIERT DVLL-INDUZIERTE AKTIVIERUNG DES TOPFLASH-ASSAYS 31
4.2. NPHP4 VERRINGERT ZVTOPLASMATISCHE LEVEL VON SS-CATENIN UND DVL . 34
4.3. NPHP4 BAUT DVL UND SS-CATENIN ANDERS ALS NPHP2 AB 39
4.4. NPHP4 KOPRAEZIPITIERT MIT ANAPC2 42
4.5. PROTEIN-MOTIVE UND DEREN BEDEUTUNG IM TOPFLASH 45
4.6. D-BOX IST NICHT ERFORDERLICH FUER DIE FUNKTION VON NPHP4 49
4.7. NPHP4 REICHERT SICH UM DIE KERNMEMBRAN AN 51
5. DISKUSSION 5 3
5.1. UEBERTRAGBARKEIT DER ERGEBNISSEN MIT MUTIERTER NPHP4 VERSION . 53
5.2. ZUSAMMENSPIEL VON NPHP4, DVL UND SS-CATENIN 54
5.3. NPHP4 UND DER ZELLZYKLUS 56
5.4. GESAMTKONZEPT UND AUSBLICK 58
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
6. ZUSAMMENFASSUNG 6 1
A. LITERATURVERZEICHNIS 6 2
B. ANHANG 86
B.L. CLUSTALW ANALYSE 86
B.2. ALTERNATIVE BEZEICHNUNG DER PROTEINE 98
B.3. LEBENSLAUF 99
III
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