In-vitro-Nachweis von infektiösem Parvovirus B19 und Analyse der Neutralisationseigenschaften von antiviralen Immunglobulinen:
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2012
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 PARVOVIRUS B19 1
1.1.1 ENTDECKUNG UND HISTORISCHE ENTWICKLUNG 1
1.1.2 TAXONOMIE 1
1.1.3 MORPHOLOGIE 2
1.1.4 GENOMSTRUKTUR UND SEQUENZVARIABILITAET 3
1.1.5 VIRUSPROTEINE 5
1.1.5.1 STRUKTURPROTEINE VP1 UND VP2 5
1.1.5.2 NICHTSTRUKTURPROTEIN NS1 5
1.1.5.3 WEITERE NICHTSTRUKTURPROTEINE 6
1.1.6 EPIDEMIOLOGIE UND UEBERTRAGUNGSWEGE 6
1.1.7 INFEKTIONSVERLAUF UND VIRUSREPLIKATION 7
1.1.8 KRANKHEITSBILDER 9
1.1.8.1 RINGELROETELN 9
1.1.8.2 TRANSIENTE APLASTISCHE ANAEMIE 10
1.1.8.3 HYDROPS FETALIS UND INTRAUTERINER KINDSTOD 10
1.1.8.4 WEITERE ASSOZIIERTE KRANKHEITSBILDER 11
1.1.8.5 GEWEBEPERSISTENZ VON PARVOVIRUS B19 12
1.1.9 IMMUNANTWORT 13
1.1.9.1 HUMORALE PHASE 13
1.1.9.2 ZELLULAERE PHASE 14
1.1.10 DIAGNOSTISCHE VERFAHREN 15
1.1.11 THERAPIE 15
1.2 ZELLKULTUR 16
1.2.1 VERMEHRUNG VON B19V IN DER ZELLKULTUR 16
1.2.2 KURZGEFASSTE DARSTELLUNG DER ERYTHROPOESE 17
1.3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 18
I
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2 MATERIAL 19
2.1 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 19
2.2 GERAETE UND TECHNISCHE HILFSMITTEL 19
2.3 ZELLKULTUREN UND NAEHRMEDIEN 2 0
2.3.1 PBMCS 2 0
2.3.2 ANTIKOERPERPRODUZIERENDE HYBRIDOMZELLLINIEN 21
2.4 VIRAEMISCHES BLUTPLASMA FUER DIE B19V-INFEKTION 22
2.5 HUMANE BLUTSEREN FUER DIE B19V-NEUTRALISATIONSEXPERIMENTE 2 3
2.6 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 2 3
2.6.1 REAGENZIEN UND LOESUNGEN 2 3
2.6.2 FLUORESZENZFARBSTOFFGEKOPPELTE ANTIKOERPER 2 4
2.6.3 DURCHFLUSSZYTOMETER UND AUSWERTESOFTWARE 24
3 METHODEN 25
3.1 ZELLKULTUR 25
3.1.1 GEWINNUNG DER PBMCS AUS VOLLBLUT 25
3.1.2 KULTIVIERUNG DER PBMCS 2 6
3.2 WEITERE KOMPONENTEN FUER DIE INFEKTIONSANSAETZE 2 6
3.2.1 GEWINNUNG DER MONOKLONALEN ANTIKOERPER 2 6
3.2.2 HERSTELLUNG DER FAB-FRAGMENTE 2 7
3.2.3 SERUMPROBEN VON PROBANDEN UND PATIENTEN 2 7
3.3 INFEKTION DER CD36 + ERYTHROIDEN VORLAEUFERZELLEN 2 9
3.3.1 ALLGEMEINES SCHEMA 2 9
3.3.2 INFEKTION MIT TEMPERATURBEHANDELTEM VIRUS 2 9
3.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 30
3.4.1 ALLGEMEINES PRINZIP 3 0
3.4.2 ANALYSE DER ZELLDIFFERENZIERUNG 31
3.4.3 ANALYSE DER INFEKTIONSRATE 32
3.5 DATENVERARBEITUNG 3 3
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
4 ERGEBNISSE 34
4.1 UEBERSICHT UEBER DIE VORGEHENSWEISE 3 4
4.2 VORBEMERKUNG ZUR DARSTELLUNGSWEISE DER MESSWERTE 35
4.3 CHARAKTERISIERUNG DER ZELLDIFFERENZIERUNG 3 5
4.3.1 ZELLZAHL IM KULTURVERLAUF 3 5
4.3.2 ZELLDIFFERENZIERUNG IM KULTURVERLAUF 36
4.4 INFEKTION DER CD36 + ZELLEN MIT PARVOVIRUS B19 3 8
4.4.1 EINFLUSS DER ZELLDIFFERENZIERUNG A U F DIE INFIZIERBARKEIT 3 8
4.4.2 INFEKTION MIT UNTERSCHIEDLICHEN VIRUSKONZENTRATIONEN 4 0
4.4.3 INFEKTION MIT UNTERSCHIEDLICHEN INKUBATIONSZEITEN 42
4.4.4 EINFLUSS DER TEMPERATURBEHANDLUNG A U F DIE B19V-INFEKTIOSITAET 4 3
4.5 B19V-NEUTRALISATION MIT MONOKLONALEN VP1-, VP2- UND NS1-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN 4 6
4.6 B19V-NEUTRALISATION MIT FAB-FRAGMENTEN DER MONOKLONALEN ANTIKOERPER 4
8
4.6.1 BERECHNUNG DER MITTLEREN INHIBITORISCHEN KONZENTRATION (IC50) DER
MABS UND IHRER FAB-FRAGMENTE 4 9
4.7 B19V-NEUTRALISATION MIT HUMANEN SEREN 51
4.7.1 SEROPOSITIVE UND -NEGATIVE PROBANDEN 52
4.7.2 PATIENTEN MIT CHRONISCHER PARVOVIRUS-B 19-VIRAEMIE 54
4.7.2.1 FALLBEISPIEL PATIENTIN SVS 55
4.7.2.2 FALLBEISPIEL PATIENTIN SIST 5 7
4.7.2.3 EXEMPLARISCHE DARSTELLUNG EINZELNER PATIENTENPROBEN OHNE
VERLAUFSKONTROLLEN 59
4.7.3 NEUTRALISATIONSKAPAZITAET VON B19V-SPEZIFISCHEM IGG UND IGM IN
VERSCHIEDENEN PHASEN DER INFEKTION 62
4.8 BERECHNUNG DER VERFAELSCHUNG DURCH VIRAEMISCHES PROBENMATERIAL 65
III
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
5 DISKUSSION 66
5.1 KULTURVERLAUF UND DIFFERENZIERUNG DER ZELLEN 6 6
5.2 ANALYSE DER INFIZIERTEN ZELLEN 6 7
5.3 EINFLUSS VON ZELLDIFFERENZIERUNG, VIRUSKONZENTRATION UND
INKUBATIONSZEIT AUF
DIE INFEKTIONSRATE 6 7
5.4 EINFLUSS DER B19V-TEMPERATURBEHANDLUNG A U F DIE INFEKTIOSITAET 6 8
5.5 B19V-NEUTRALISATION MIT MONOKLONALEN VP1-, VP2- UND NSL-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN UND IHREN FAB-FRAGMENTEN 6 9
5.6 B19V-NEUTRALISATION MIT HUMANEN SEREN 72
5.6.1 FALLBEISPIELE DER CHRONISCH-VIRAEMISCHEN PATIENTINNEN SVS UND SIST
..72
5.6.2 NEUTRALISATIONSKAPAZITAET VON B19V-SPEZIFISCHEM IGG UND IGM IM
INFEKTIONSVERLAUF 74
5.7 AUSBLICK 76
ZUSAMMENFASSUNG 77
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 78
LITERATURVERZEICHNIS 80
KONGRESSBEITRAEGE 98
DANKSAGUNG 99
LEBENSLAUF 101
IV
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