Proliferative und apoptotische Eigenschaften des Transkriptionsfaktors MYC:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VI
PUBLIKATIONSLISTE VII
1 EINLEITUNG 1
1.1 SIGNALTRANSDUKTION IN TUMORZELLEN 1
1.1.1 PHOSPHATIDYLINOSITOL-3-KINASEN (PI3KS) 2
1.2 DER ZELLZYKLUS 3
1.3 APOPTOSE IN SAEUGERZELLEN 5
1.4 TRANSKRIPTIONSREGULATION IN EUKARYOTEN 7
1.4.1 T RANSKRIPTIONSFAKTOREN 7
1.4.2 CHROMATINMODIFIKATIONEN 8
1.5 DER TRANSKRIPTIONSFAKTOR MYC 11
1.5.1 MYC - DAS ONKOGEN 11
1.5.2 DIE MYC-FAMILIE 12
1.5.3 EXPRESSIONSREGULATION VON MYC 12
1.5.4 TRANSKRIPTIONELLE REGULATION DURCH MYC 13
1.5.5 THERAPEUTISCHE OPTIONEN DURCH AUSSCHALTEN DER AKTIVIERENDEN MYC
FUNKTION 15
1.5.6 DIE APOPTOTISCHE FUNKTION VON MYC 16
1.6 FUNKTIONELLE ANALYSE VON GENFUNKTIONEN MITTELS RNA-INTERFERENZ 17
1.6.1 TRANSFEKTION VON NUKLEINSAEUREN IN SAEUGERZELLEN 18
1.7 LITERATUR 19
*2 DIE MYC GESTEUERTE APOPTOSE ERFOLGT DURCH TRANSKRIPTIONELLE
AKTIVIERUNG DER PRO- APOPTOTISCHEN EFFEKTOREN NOXA UND BIM 29
2.1 KURZBESCHREIBUNG 29
2.2 EINLEITUNG 29
2.3 MATERIAL UND METHODEN 30
2.4 ERGEBNISSE 30
2.4.1 APOPTOSEINDUKTION DURCH MYC NACH PROTEASOMINHIBITION 30
2.4.2 DIE PROAPOPTOTISCHE MYC FUNKTION WIRD PARTITIELL DURCH NOXA
BEEINFLUSST 33
2.4.3 NEBEN DER NOXA EXPRESSION WIRD AUCH DIE BIM EXPRESSION DURCH DEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOR MYC BESTIMMT 34
2.4.4 REGULATION DER NOXA UND BIM TRANSKRIPTION DURCH MYC 35
2.4.5 MYC AKTIVIERT NOXA UND BIM DURCH DIREKTE PROMOTORBINDUNG 38
2.5 DISKUSSION 39
2.6 BETEILIGUNG AN DER VORLIEGENDEN ARBEIT 41
2.7 LITERATUR 41
III
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IMAGE 2
3 DURCH DIE PHOSPHATIDYLINOSITOL-3-KINASE (PI3K) SIGNALWEG-VERMITTELTE
STABILISIER
UNG VON MYC WIRD DIE E2F1 TRANSKRIPTION IN PANKREASKARZINOMZELIEN
REGULIERT...45
3.1 KURZBESCHREIBUNG 45
3.2 EINLEITUNG 45
3.3 MATERIAL UND METHODEN 46
3.4. ERGEBNISSE 46
3.4.1 DER E2F1 TRANSKTIPTIONSFAKTOR IST SIGNIFIKANT UEBEREXPRIMIERT IM
DUKTALEN
ADENOKARZINOM DES PANKREAS UND ESSENTIELL FUER DIE G R S-PHASENTRANSITION
46
3.4.2 DIE REDUKTION DER E2F1- MRNA UND PROTEINEXPRESSION KORRELIERT MIT
DER
INHIBITION VON PI3K 48
3.4.3 EINE IN SILICO PROMOTORANALYSE ZEIGTE EINE HOCH KONSERVIERTE
MYCBINDUNGSSEQUENZ IM E2F1 PROMOTOR 49
3.4.4 DER PI3K/AKT SIGNALTRANSDUKTIONSWEG STABILISIERT DAS MYC PROTEIN
DURCH EINE
BLOCKADE DER GSK3 AKTIVITAET 50
3.4.5 MYC STEUERT DIE E2F1 EXPRESSION DURCH DIREKTE PROMOTORBINDUNG 51
3.5 DISKUSSION 52
3.6 BETEILIGUNG AN DER VORLIEGENDEN ARBEIT 53
3.7 LITERATUR 54
4 DIE SENSITIVITAET VON HDAC-INHIBITOREN IN ZELLEN DES MAGENKARZINOMS
HAENGT VON
DER M Y C REGULIERTEN EXPRESSION VON M C L 1 UND B C L - X L AB 58
4.1 KURZBESCHREIBUNG 58
4.2. EINLEITUNG 59
4.3. MATERIAL UND METHODEN 60
4.4. ERGEBNISSE 60
4.4.1 DIE EXPRESSION DER ANTIAPOPTOTISCHEN PROTEINE B C L - X L UND M C
L 1 KORRELIERT MIT
EINER GERINGEREN EFFEKTIVITAET NACH BEHANDLUNG MIT DEM HDACI SAHA 60
4 . 4 . 2 DIE HDACI RESISTENZ WIRD DURCH B C L - X L UND M C L 1
VERMITTELT UND DURCH M Y C
GESTEUERT 61
4.4.3 PROMOTORANALYSE VON MCL1 UND ELF4E MITTELS QUANTITATIVER
CHROMATINIMMUNOPRAEZIPITATION (QCHIP) 64
4.5. DISKUSSION 66
4.6. BETEILIGUNG AN DER VORLIEGENDEN ARBEIT 68
4.7. LITERATUR 68
5 DIE TRANSFEKTION VON SIRNAS MITTELS POLYETHYLENIMIN IN ZELLLINIEN DES
PANKREAS
KARZIOMS ALS EINFACHE UND KOSTENGUENSTIGE METHODE 73
5.1 KURZBESCHREIBUNG 73
5.2 EINLEITUNG 73
IV
IMAGE 3
5.3. MATERIAL UND METHODEN 74
5.4 ERGEBNISSE 74
5.4.1 UNTERSUCHUNG TOXISCHER AUSWIRKUNGEN VON POLYETHYLENIMIN AUF HUMANE
PANKREASKARZINOMZELLEN 74
5.4.2 ERMITTLUNG DER TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ 74
5.4.3 ANALYSE DER P EI - EFFEKTIVITAET 77
5.4.4 DIE SIRNA EFFEKTIVITAET IST ABHAENGIG VON DER ZELLZAHL JEDOCH
ZELLTYP-UNSPEZIFISCH...
77
5 . 4 . 5 N F K B WIRD NACH BEHANDLUNG MIT POLETHYLENIMIN IN
PANKREASKARZINOMZELLEN NICHT
AKTIVIERT 78
5.5 DISKUSSION 79
5.6 BETEILIGUNG AN DER VORLIEGENDEN ARBEIT 80
5.7 LITERATUR 80
6 ABSCHLIESSENDE DISKUSSION 84
6.1 LITERATUR 89
DANKSAGUNG 107
ANHANG 1 108
ANHANG 2 153
ANHANG 3 164
ANHANG 4 175
/
V
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