Entwicklung von primären Referenzverfahren zur Quantifizierung und Bestimmung des Beladungsgrades von Transferrin:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG UND MOTIVATION 1
2 THEORETISCHE GRUNDLAGEN 7
2.1 AKUTE-PHASE-PROTEINE UND DAS TRANSPORTPROTEIN TRANSFERRIN 7
2.2 HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (HPLC) 11
2.3 INDUKTIV GEKOPPELTE PLASMA MASSENSPEKTROMETRIE (ICP-MS) 14
2.4 ISOTOPENVERDUENNUNGSMASSENSPEKTROMETRIE (IDMS) 20
2.5 RAMAN-SPEKTROSKOPIE 28
2.6 LUFTAUFTRIEBSKORREKTUR UND DIFFERENZWAEGUNG 32
2.7 HERSTELLUNG UND LAGERUNG VON (REFERENZ)LOESUNGEN 36
3 EXPERIMENTELLER TEIL MIT ERGEBNISSEN UND DISKUSSION 39
3.1 VERWENDETE CHEMIKALIEN, MATERIALIEN UND GERAETE 39
3.2 CHROMATOGRAPHISCHE ABTRENNUNG VON TRANSFERRIN MIT ANSCHLIESSENDER
ELEMENTSPEZIFISCHER DETEKTION (HPLC - ICP-MS) 43
3.2.1 GERAETEKONFIGURATION 43
3.2.2 ENTWICKLUNG DER CHROMATOGRAPHISCHEN TRENNUNG 46
3.2.2.1 AUSWAHL DER SAEULE 46
3.2.2.2 ELUENT UND GRADIENT 47
3.2.2.3 OPTIMIERUNG DER ICP-MS PARAMETER 49
3.2.3 GEGENLAEUFIGER POST-COLUMN GRADIENT 50
3.3 ALLGEMEINE PROBENVORBEREITUNGEN 54
3.3.1 REKONSTITUIEREN DES SERUMS ERM-DA470K/IFCC 54
3.3.2 VOLLSTAENDIGE SAETTIGUNG VON TRANSFERRIN MIT EISEN 54
3.3.3 VERSUCHE ZUR MATRIXANPASSUNG MIT ALBUMIN 55
3.3.4 LIPOPROTEINFAELLUNG 56
3.3.5 STABILITAET VON HOLO-TRANSFERRIN 57
3.3.6 REINHEIT UND WASSERGEHALT VON APO-TRANSFERRIN 59
3.3.7 GEHALT UND ISOTOPENVERTEILUNG IN DER FE-SPIKE-LOESUNG 60
3.4 QUANTIFIZIERUNG VON TRANSFERRIN 62
3.4.1 ISOTOPENVERDUENNUNGSMASSENSPEKTROMETRIE (IDMS) 62
3.4.1.1 DOUBLE POST-COLUMN IDMS 62
3.4.1.2 DOUBLE SPEZIES-SPEZIFISCHE IDMS 64
3.4.1.3 DOUBLE PC-IDMS VERSUS DOUBLE SS-IDMS 66
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.4.1.4 TRIPLE SPEZIES-SPEZIFISCHE IDMS 67
3.4.1.5 DOUBLE SS-IDMS VERSUS TRIPLE SS-IDMS 69
3.5 FE-BELADUNGSGRAD VON TRANSFERRIN 74
3.5.1 BESTIMMUNG DER BELADUNG MIT SINGLE IDMS 74
3.5.2 BESTIMMUNG DER BELADUNG MIT RAMAN-SPEKTROSKOPIE 79
3.5.2.1 PROBENVORBEREITUNG 79
3.5.2.2 AUSSCHLIESSEN VON MATRIXSTOERUNGEN 80
3.5.2.3 PHOTOBLEACHING 81
3.5.2.4 KALIBRIERUNG 82
3.6 UNSICHERHEITBUDGETS 85
4 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 93
5 LITERATURVERZEICHNIS 97
6 ANHANG 107
6.1 HERLEITUNG DER FORMEL FUER DIE TRIPLE SS-IDMS 107
6.2 HERLEITUNG DER FORMEL FUER DIE SAETTIGUNG VON TRANSFERRIN MIT SINGLE
IDMS 110
6.3 SEQUENZ-ALIGNMENT VON SEROTRANSFERRIN 112
6.4 SIALOFORMEN DES TRANSFERRINS 113
6.5 ABKUERZUNGEN 114
6.6 GROESSENSYMBOLE 116
6.7 INDIZES 117
6.8 KONSTANTEN UND STOFFGROESSEN 118
6.9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 119
6.10 TABELLENVERZEICHNIS 124
II
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