Chlamydophila pneumoniae beeinflusst die Oberflächenexpression von MHC Klasse II durch Zelltyp-spezifische Mechanismen:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 2
ABSTRACT 4
INHALTSVERZEICHNIS 5
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 9
1 EINLEITUNG 12
1.1 IMMUNSYSTEM 12
1.1.1 ANGEBORENES IMMUNSYSTEM 12
1.1.2 TOLL-LIKE REZEPTOREN 13
1.1.3 HAUPTHISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEX KLASSE II 16
1.1.4 TH1 - UND TH2-ANTWORT 18
1.2 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE 19
1.2.1 EPIDEMIOLOGIE . 1 9
1.2.2 EIGENSCHAFTEN VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE 21
1.3 CHLAMYDOPHILA UND IMMUNSYSTEM 22
1.3.1 WECHSELWIRKUNGEN ZWISCHEN WIRT UND ERREGER 22
1.3.2 BEEINFLUSSUNG DER OBERFLAECHENEXPRESSION VON MHC KLASSE II DURCH
CHLAMYDIEN 23
1.3.3 CHLAMYDIEN UND TLRS 25
1.4 ZIELE DER ARBEIT 25
2 MATERIAL 27
2.1 GERAETE 27
2.2 CHEMIKALIEN 28
2.2.1 ALLGEMEIN 28
2.2.2 KLONIERUNG VON DNA 29
2.2.3 STIMULATION VON ZELLEN 30
2.3 KOMMERZIELLE KITS 30
2.4 ZELLMEDIEN 31
2.4.1 MOUSE EMBRYONIC FIBROBLASTS 31
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IMAGE 2
2.4.2 BONE MARROW DERIVED MACROPHAGES
2.5 LOESUNGEN UND PUFFER
2.6 ZELLEN
2.6.1 CHLAMYDIEN
2.6.2 E. COLI STAEMME
2.6.3 MAEUSE
2.7 NACHWEIS VON PROTEINEN
2.7.1 DURCHFLUSSZYTOMETRIE
2.7.2 KONFOKALE MIKROSKOPIE
2.7.3 WESTERN BLOT
2.7.3.1 PRIMAERE ANTIKOERPER
2.7.3.2 SEKUNDAERE ANTIKOERPER
2.8 NACHWEIS VON RNA/DNA
2.8.1 KLONIERUNG
2.8.2 REVERSE TRANSKRIPTASE-PCR
2.9 SONSTIGE MATERIALIEN
3 METHODEN
3.1 GEWINNUNG VON BMDMS (BONE MARROW DERIVED MACROPHAGES)
3.2 GEWINNUNG VON MEFS (MOUSE EMBRYONIC FIBROBLASTS)
3.3 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE
3.3.1 ANZUCHT VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE
3.3.2 INAKTIVIERUNG VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE
3.3.3 INFEKTION VON ZELLEN MIT CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE
3.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE/FACS (FLUORESCENCE ACTIVATED CELL STAINING)
3.5 WESTERN BLOT
3.6 ELISA (ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY)
3.7 REVERSE TRANSKRIPTASE-PCR UND ECHTZEIT-PCR
3.7.1 RNA-ISOLATION
3.7.2 REVERSE T RANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION (RT -PCR)
3.7.3 ECHTZEIT-POLYMERASE-KETTENREAKTION AUS CDNA
IMAGE 3
3.8 PROTEINGEWINNUNG UND TRANSFEKTION VON BMDMS 49
3.8.1 PROTEINGEWINNUNG 49
3.8.2 KLONIERUNG VON CPAF AUS CHLAMYDOPHILA-DNA 49
3.8.3 EXPRESSION UND PURIFIKATION VON CPAF 51
3.8.4 TRANSFEKTION VON CPAF IN BMDMS MITTELS DOTAP ALS TRAEGER 52
3.9 KONFOKALE MIKROSKOPIE 53
3.10 STATISTISCHE ANALYSEN 53
4 ERGEBNISSE 54
4.1 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE REDUZIERT DIE OBERFLAECHENEXPRESSION VON MHC
KLASSE II IN BMDMS 54
4.1.1 PAMPS VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE VERHINDERN DIE IFNY-INDUZIERTE
HOCH
REGULATION DER OBERFLAECHENEXPRESSION VON MHC KLASSE II IN BMDMS 54
4.1.2 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE VERHINDERT DIE IFNY-INDUZIERTE
HOCHREGULATION DES
MHC KLASSE II-PROTEINKOMPLEXES IM ZYTOSOL 59
4.1.3 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE VERHINDERT DIE IFNY-INDUZIERTE
HOCHREGULATION DER
MHC KLASSE II-MRNA 60
4.2 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE KANN TYPISCHE INKLUSIONEN NUR IN MEFS
AUSBILDEN,
NICHT ABER IN BMDMS 61
4.3 LEBENDE CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE VERHINDERT DIE IFNY-INDUZIERTE
STIMULATION
VON MHC KLASSE II IN MEFS 64
4.4 DURCH EINE INFEKTION MIT CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE WIRD USF-1 IN MEFS
DEGRADIERT, NICHT ABER IN BMDMS 66
4.4.1 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE DEGRADIERT USF-1 IN MEFS 66
4.4.2 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE INDUZIERT USF-1 IN BMDM S 68
4.5 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE BILDET C/?A/-MRNA IN MEFS, NICHT ABER IN
BMDMS 70
4.5.1 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE BILDET KEINE CPAF-MKNA IN WT BMDMS 70
4.5.2 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE BILDET CPAF-MRNA IN MEFS 71
4.6 REKOMBINANTES CPAF DEGRADIERT USF-1 IN BMDMS 72
4.7 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE FUHRT IN MEFS, ABER NICHT IN BMDMS, ZUR
SEKRETION DES CXC-CHEMOKINS MIG 74
7
IMAGE 4
4.7.1 CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE INDUZIERT DIE SEKRETION VON MIG IN
MEFS 74
4.7.2 IFNY INDUZIERT DIE SEKRETION VON MIG IN BMDMS UNABHAENGIG VON
CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE 75
5 DISKUSSION 77
5.1 STOFFWECHSEL VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE IN MAKROPHAGEN 77
5.1.1 BILDUNG VON CPA/-MRNA IN MAKROPHAGEN 78
5.1.2 EINFLUSS VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE AUF DIE
OBERFLAECHENEXPRESSION
VON MHC KLASSE II IN MAKROPHAGEN 79
5.1.3 DEGRADIERUNG VON USF-1 DURCH CPAF IN MAKROPHAGEN 81
5.2 EINFLUSS VON CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE AUF DIE OBERFLAECHENEXPRESSION
VON
MHC KLASSE II IN MEFS 82
5.3 SEKRETION DES CXC-CHEMOKINS MIG 84
LITERATURVERZEICHNIS 87
DANKSAGUNG 96
LEBENSLAUF 97
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 100
8
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