VEGF165-Gentherapie mittels Magnetofektion zur Induktion von Angiogenese in kritisch durchbluteten Random-pattern-Lappenplastiken: eine neue, nicht-virale Alternative zum adenoviralen Gentransfer
Gespeichert in:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 9
1.1 UEBERBLICK 9
1.2 WUNDHEILUNG 9
1.2.1 PHYSIOLOGIE DER WUNDHEILUNG, ROLLE DER ANGIOGENESE 9
1.2.2 ANGIOGENESE 11
1.2.3 DER VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEGF) UND SEINE
SCHLUESSELROLLE IN DER ANGIOGENESEKASKADE 13
1.2.4 NEOVASKULARISATION UND VEGF IN KLINISCHEN STUDIEN UND IN DER
PLASTISCHEN CHIRURGIE 14
1.3 GENTHERAPIE 17
1.3.1 VIRALER GENTRANSFER 18
1.3.2 NON-VIRALER GENTRANSFER 19
1.3.3 NUCLEID ACID TARGETING 21
1.4 MAGNETOFEKTION- DAS PRINZIP 22
1.4.1 HISTORISCHE UEBERSICHT, MAGNETIC DNA TARGETING, MAGNETIC DNA
DELIVERY 22
1.4.2 DESIGN UND SYNTHESE MAGNETISCH AKTIVER NANOPARTIKEL 23
1.4.3 MAGNETOFEKTION UND ACOUSTICALLY ACTIVE MAGNETIC LIPOSPHERES
(MAGNETOBUBBLES) 25
1.4.4 MICROBUBBLES/LIPOSPHERES IN KLINISCHEN UND EXPERIMENTELLEN
STUDIEN 28
1.5 DAS MODELL DES RANDOM-PATTEM- FLAP 28
1.6 ZIELSETZUNG 31
4
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IMAGE 2
2. MATERIAL UND METHODE .32
2.1 MAGNETOFEKTION 32
2.1.1 ACOUSTICALLY ACTIVE MAGNETIC LIPOSPHERES- PHYSIKALISCHE UND
BIOCHEMISCHE CHARAKTERISTIKA 32
2.1.2 HERSTELLUNG VON VEGF 16S-PDNA/GFP-PDNA BELADENEN MAGNETOBUBBLES 33
2.1.3 INDUKTION MAGNETFELD 35
2.1.4 APPLIKATION VON ULTRASCHALL 37
2.2 TIERE UND TIERHALTUNG 37
2.3 QUANTITATIVE BESTIMMUNG DER VEGF-EXPRESSION IM ZIELGEWEBE
UND IM DIREKT DARUNTER LIEGENDEN MUSKELGEWEBE 38
2.3.1 INJEKTIONSMODELL, MAGNETOFEKTION VON MAGNETOBUBBLES 38
2.3.2 VERSUCHSPLAN 41
2.3.3 GEWEBEGEWINNUNG 42
2.3.4 VEGF,65-ELISA 43
2.3.5 MESSUNG DER OPTISCHEN DICHTE 44
2.3.6 AUFBEREITUNG DER PROBEN UND QUANTITATIVE VEGFI65-BESTIMMUNG... 44
2.4 PRUEFUNG DES THERAPIEEFFEKTS DER MAGNETOFEKTION VON VEGF T65-CDNA
ACOUSTICALLY ACTIVE MAGNETIC LIPOSPHERES AM UEBERDIMENSIONIERTEN
RANDOM-PATTERN-FLAP AN DER RATTE 45
2.4.1 LAPPENMODELL, CHIRURGISCHE TECHNIK, INJEKTION 45
2.4.2 VERSUCHSPLAN 46
2.4.3 LAPPENPERFUSIONSMESSUNG MITTELS ICG-LASER-FLUOROSKOPIEFARBSTOFF
INDOCYANINGRUEN (ICG), ANGIOGRAPHIE 48
2.4.4 MESSAUFBAU 49
2.4.5 AUSWERTUNG DER FLUORESZENZMESSUNG 50
5
IMAGE 3
2.4.6 BESTIMMUNG DER UEBERLEBENDEN UND DER NEKROTISIERENDEN
LAPPENFLAECHEN 51
2.5 QUANTIFIZIERUNG DER MIKROGEFAESSDICHTE DES LAPPENS 51
2.5.1 INJEKTIONSMODELL 51
2.5.2 VERSUCHSPLAN 52
2.5.3 GEWEBEGEWINNUNG 52
2.5.4 IMMUNHISTOCHEMIE 53
2.5.5 GEFAESSDICHTEBESTIMMUNG MIT DER CHALKLEY-METHODE 54
2.6 BESTIMMUNG DES GEFAESSDIAMETERS 54
2.6.1 INJEKTIONSMODELL 54
2.6.2 VERSUCHSPLAN 55
2.6.3 CORROSION CAST - TECHNIK ZUR 3-DIMENSIONALEN DARSTELLUNG
DER MIKROVASKULAEREN ARCHITEKTUR 55
2.6.4 GEFAESSFIXIERUNG, GEWEBEGEWINNUNG, ELEKTRONENMIKROSKOPIE
UND AUSWERTUNG 56
2.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG 57
3. ERGEBNISSE 58
3.1 QUANTIFIZIERUNG DER VEGF-EXPRESSION IM ZIEL- UND IM UMLIEGENDEN
GEWEBE 58
3.1.1 VEGF-KONZENTRATION IN DER DISTALEN HAUT 58
3.1.2 VEGF-KONZENTRATION IN DER PROXIMALEN HAUTHAELFTE 59
3.1.3 VEGF-KONZENTRATION IN DER DISTALEN MUSKULATUR 61
3.1.4 VEGF-KONZENTRATION IN DER PROXIMALEN MUSKULATUR 62
6
IMAGE 4
3.2 FLAECHENAUSWERTUNG DES RANDOM-PATTERN-FLAPS 63
3.2.1 LAPPENFLAECHE POSTOPERATIV 63
3.2.2 UEBERLEBENDE LAPPENFLAECHE NACH 7 TAGEN 64
3.2.3 NEKROSEFLAECHE NACH 7 TAGEN 68
3.2.4 PROZENTUALE AUSWERTUNG 70
3.3 PERFUSIONSBESTIMMUNG 71
3.3.1 PERFUSIONSINDEX IN DER DISTALEN LAPPENHAELFTE 72
3.4 QUANTIFIZIERUNG DER MIKROGEFAESSDICHTE DES LAPPENS 74
3.4.1 MIKROGEFAESSDICHTE IN DER HAUT 74
3.4.2 MIKROGEFAESSDICHTE IN DER MUSKULATUR 74
3.5 BESTIMMUNG DES GEFAESSDIAMETERS 75
3.6 VERGLEICH DER ERGEBNISSE DER THERAPIE DER MAGNETOFEKTION
VON VEGF-MAGNETOBUBBLES MIT DEM ADENOVIRALEN VEGFIESGENTRANSFER 76
3.6.1 UEBERLEBENDE LAPPENFLAECHE 7 TAGE POSTOPERATIV 76
3.6.2 NEKROTISIERENDE LAPPENFLAECHE 7 TAGE POSTOPERATIV 77
3.6.3 PERFUSIONSBESTIMMUNG IN DER DISTALEN LAPPENFLAECHE 79
4. DISKUSSION 81
4.1 MAGNETOFEKTION VON VEGFI65-ACOUSTICALLY ACTIVE LIPOSPHERESEFFEKTIVE
GENTHERAPIEFORM IN HINBLICK AUF VEGFKONZENTRATION, LAPPENNEKROSE UND
MIKROGEFAESSDICHTE? 82
4.2 DAS POTENTIAL DER NICHT-VIRALEN GENTHERAPIE MITTELS MAGNETO
FEKTION IM VERGLEICH ZUM ETABLIERTEN ADENOVIRALEN VERFAHREN 83
7
IMAGE 5
4.3 NACHTEILE DER MONOTHERAPIE MIT VEGF, PHAENOMEN DER JEAKY
VESSELS - POTENTERE INDUKTION VON ANGIOGENESE
DURCH KOMBINATIONSTHERAPIE MIT ANDEREN WACHSTUMSFAKTOREN? 84
4.4 MAGNETOSONOPORATION - DIE KOMBINATION AUS MAGNETFELD UND
ULTRASCHALL IM KONTEXT DES GENE TARGETING UND GENE DELIVERY 85
4.5 SCHLUSSGEDANKEN UND AUSBLICK 88
5. ZUSAMMENFASSUNG 89
6. LITERATURVERZEICHNIS 91
7. ANHANG 109
7.1 GERAETE, VERBRAUCHSMATERIALIEN, HILFSMITTELS 109
7.2 CHEMIKALIEN, LOESUNGEN, PUFFER 110
7.3 PHARMAKA UND TIEMAHRUNG 112
7.4 SOFTWARE 112
8. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 113
9. ABBILDUNASVERZEICHNLS 117
10. DANKSAGUNG 122
11. VEROEFFENTLICHUNGEN 123
8
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