Generierung zytotoxischer T-Zellen gegen das tumorassoziierte Antigen HER3:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 9
1.1 ZELLULAERE TUMORIMMUNITAET 9
1.2 DAS TUMORASSOZIIERTE ANTIGEN HUMANER EPIDERMALER
WACHSTUMSFAKTORREZEPTOR 3
(HER3, ERBB3) 11
1.3 HER3-GERICHTETE THERAPIE 13
1.4 ADOPTIVER T-ZELL-TRANSFER IM RAHMEN UNSERER FORSCHUNG 15
2 ZIELE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 18
3 MATERIAL UND METHODEN 19
3.1 MATERIAL 19
3.1.1 CHEMIKALIEN UND BIOGENE SUBSTANZEN 19
3.1.2 RADIOAKTIVE SUBSTANZEN 19
3.1.3 MEDIEN UND SUPPLEMENTE FUER DIE ZELLKULTUR 20
3.1.4 PEPTIDE 20
3.1.5 ANTIKOERPER 21
3.1.6 TETRAMERE 21
3.1.7 ZELLLINIEN 22
3.1.7.1 ADHAERENTE ZELLEN 22
3.1.7.2 SUSPENSIONSZELLEN 22
3.1.8 KITSYSTEME 22
3.1.9 STANDARDGERAETE 22
3.1.10 STANDARDLOESUNGEN UND -PUFFER 23
3.2 METHODEN 24
3.2.1 ZELLKULTUR 24
3.2.1.1 ALLGEMEINE ZELLKULTUR 24
3.2.1.1.1 KULTIVIERUNG VERSCHIEDENER ZELLLINIEN 24
3.2.1.1.2 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 25
3.2.1.1.3 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 25
3.2.1.2 SPEZIELLE ZELLKULTUR 25
6
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IMAGE 2
3.2.1.2.1 ISOLIERUNG VON PBMC (MONONUKLEAERE ZELLEN DES PERIPHEREN
BLUTES) 25
3.2.1.2.2 GENERIERUNG VON MONOZYTEN-DERIVIERTEN DC 26
3.2.1.2.3 PEPTIDBELADUNG VON ZELLEN 27
3.2.1.2.4 CD8-ISOLIERUNG 27
3.2.1.2.5 PRIMING UND RESTIMULATION VON CD8 + T-ZELLEN 28
3.2.1.2.6 T-ZELLKLONIERUNG 28
3.2.1.2.7 EXPANSION VON T-ZELLEN 29
3.2.2 FUNKTIONELLE TESTS 29
3.2.2.1 ELISPOT-TEST ALS SCREENING TEST 29
3.2.2.2 51 CR-FREISETZUNGSTEST (CHROMIUM RELEASE ASSAY, CRA) 30
3.2.2.3 ZYTOKINSEKRETIONSTEST MITTELS SANDWICH-ELISA 32
3.2.2.4 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE MESSUNGEN (FACS-ANALYSE) 33
3.2.2.4.1 FAERBUNG AUF OBERFLAECHENMARKER 34
3.2.2.4.2 MHC:PEPTID-MULTIMERFARBUNG 34
3.2.2.4.2.1 SORTIERUNG IM DURCHFLUSSZYTOMETER 35
3.2.2.4.3 TCR-VSS-ANALYSE 35
3.2.2.5 HLA-A2 TRANSFEKTION VON ZELLLINIEN 36
4 ERGEBNISSE 37
4.1 EXPRESSIONSANALYSEN VON HLA-A2 UND HER3 VON TUMORZELLLINIEN 37
4.2 STIMULIERUNG HER3- SPEZIFISCHER HLA-A2 ZYTOTOXISCHER T- LYMPHOZYTEN
MIT
PEPTIDBELADENEN ALLOGENEN HLA-A2 + DC 39
4.3 DIE ALLOREAKTIVEN HER3 + CD8 + KLONE SIND A2/HER3356-364- MULTIMER
POSITIV MIT
EINER GERINGEN KREUZREAKTIVITAET ZU DEM A2/HER2369-377- MULTIMER 41
4.4 HER3- REAKTIVE CTL SIND FUNKTIONELL HOCHAVIDE UND WEISEN EINE
KREUZREAKTIVITAET
MIT NIEDRIGER AVIDITAET ZUM HER2369.377- PEPTID AUF 43
4.5 DIE HER3- SPEZIFISCHEN T- ZELL- KLONE ERKENNEN HLA-A2 + HER3 +
TUMORZELLLINIEN
UND PRODUZIEREN IFN-Y 44
4.6 HER3- REAKTIVE CD8 + KLONE LYSIEREN HLA-A2 + HER3 + TUMORZELLLINIEN
45
4.7 DIE LYSE DER HLA-A2 + HER3 + TUMORZELLLINIEN IST HLA-A2/HER3-
ABHAENGIG 48
4.8 ERKENNUNG DER HER3-POSITIVEN/HER2-NEGATIVEN BRUSTKREBSZELLLINIE
MDA-MB-468 TA2
IM I F N - Y - E L I S A UND IM 51 CR- FREISETZUNGSTEST 50
7
IMAGE 3
5 DISKUSSION 52
6 ZUSAMMENFASSUNG 58
7 LITERATURVERZEICHNIS 59
8
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