Einfluss von Antioxidantien auf das DNA-Doppelstrangbruch-induzierende Potential von dentalen Kompositbestandteilen und quantitativer Formaldehyd-Nachweis in dentalen Kompositen:
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 3
2.1 DENTALE KOMPOSITMATERIALIEN 3
2.1.1 AUFBAU 3
2.1.1.1 MATRIX (ORGANISCHE PHASE) 3
2.1.1.2 ANORGANISCHE PHASE 6
2.1.1.3 VERBUNDPHASE 7
2.1.2 POLYMERISATION 8
2.1.3 FREISETZUNG VON INHALTSSTOFFEN AUS KOMPOSITEN 9
2.1.4 TOXIKOLOGIE DENTALER KOMPOSITE 9
2.1.4.1 TOXIKOKINETIK 9
2.1.4.2 BIOKOMPATIBILITAET D E N T A L E R KOMPOSITE 1 1
2.2 ANTIOXIDANTIEN 1 3
2.3 FORMALDEHYD (FA) 1 6
2.3.1 TOXIKOKINETIK VON FA 17
2.3.2 TOXIZITAET VON FA 1 7
2.4 DESOXYRIBONUKLEINSAEURE (DNA) 1 9
2.4.1 DNA-AUFBAU 19
2.4.2 DNA-SCHAEDIGUNG 19
2.4.2.1 DNA-SCHAEDEN D U R C H INHALTSSTOFFE D E N T A L E R
KOMPOSITMATERIALIEN 2 0
2.4.2.2 DNA-SCHAEDEN DURCH FA 2 1
2.4.3 REPARATUR VON DNA-SCHAEDEN 2 1
2.4.4 REPARATUR VON DNA-DOPPELSTRANGBRUECHEN 22
2.4.4.1 HOMOLOGE REKOMBINATION (HR) 2 2
2.4.4.2 NICHT-HOMOLOGE ENDVERKNUEPFUNG (NON-HOMOLOGOUS-END-JOINING =
NHEJ) 2 3
2.5 Y-H2AX-TEST 2 3
2.5.1 H2AX U N D SEINE PHOSPHORYLIERTE FORM 2 3
2.5.2 DARSTELLUNG U N D QUANTIFIZIERUNG VON DNA-DSB 2 4
2.6 GC-MS-ANALYSE 2 4
2.6.1 GASCHROMATOGRAPHIE 2 5
2.6.2 MASSENSPEKTROMETER 2 6
2.6.3 AUSWERTUNG D E R MASSENSPEKTREN 2 7
3 ZIELSETZUNG 2 8
3.1 Y-H2AX-TEST 2 8
HTTP://D-NB.INFO/1030399387
IMAGE 2
3.2 FA-NACHWEIS MITTELS GC-MS 2 9
4 MATERIALIEN 30
4.1 VERWENDETE SUBSTANZEN 3 0
4.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 3 1
4.3 ZELLKULTURLINIE 3 2
4.4 MEDIUM UND WASCHLOESUNG 3 2
4.5 ANTIKOERPER UND FLUORESZENZFARBSTOFFE 3 2
4.6 DENTALE KOMPOSITE 3 3
4.7 GERAETE 3 3
4.8 VERWENDETE SOFTWARE 3 4
5 METHODEN 35
5.1 Y H 2 A X - T E S T 3 5
5.1.1 ZELLKULTUR : 3 5
5.1.1.1 AUFTAUEN D E R ZELLEN 3 5
5.1.1.2 BESTIMMUNG D E R ZELLZAHL 3 5
5.1.1.3 KULTIVIEREN D E R HGF 3 6
5.1.1.4 PASSAGIEREN D E R ZELLEN 3 7
5.1.2 Y-H2AX-TEST 3 8
5.1.2.1 VORBEREITUNG D E R 24-WELL-PLATTEN 3 8
5.1.2.2 AUSSAEEN D E R ZELLEN A U F DIE 24-WELL-PLATTEN 3 8
5.1.2.3 HERSTELLUNG D E R LOESUNGEN D E R TESTSUBSTANZEN 3 8
5.1.2.4 AUFTRAGEN D E R TESTSUBSTANZEN A U F DIE 24-WELL-PLATTEN 3 9
5.1.2.5 FIXIEREN D E R ZELLEN U N D IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 3 9
5.1.2.6 MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 4 1
5.1.2.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG 4 1
5.2 ANALYTIK VON FA IN ZAHNKOMPOSITEN MITTELS GC-MS 4 2
5.2.1 GC-MS-BEDINGUNGEN 4 2
5.2.2 FA-KONZENTRATION IN D E N VERDUENNUNGSREIHEN 4 2
5.2.3 DERIVATISIERUNGSREAKTION VON FA M I T DNPH 4 3
5.2.4 EINFLUSS D E R REAKTIONSZEIT U N D D E R DNPH-APPLIKATIONSFORM 4 4
5.2.4.1 EINFLUSS D E R REAKTIONSZEIT A U F DIE BILDUNG D E S
FA-DNPH-KOMPLEXES 4 5
5.2.4.2 EINFLUSS D E R APPLIKATIONSFORM V O N DNPH 4 5
5.2.4.3 EINFLUSS DES LOESUNGSMITTELS V O N DNPH 4 6
5.2.5 EINFLUSS D E R FA-APPLIKATIONSFORM A U F DIE
DERIVATISIERUNGSREAKTION 4 6
5.2.5.1 VERWENDUNG VON FESTEM PARAFORMALDEHYD 4 7
5.2.5.2 VERWENDUNG VON FLUESSIGEM FORMALDEHYD (FORMALIN) 4 9
5.2.5.3 VERWENDUNG EINES FESTEN FA-DNPH-KOMPLEXES 4 9
IMAGE 3
5.2.6 AUSWAHL EINES INTERNEN STANDARDS 4 9
5.2.6.1 13C-FA ALS I N T E R N E R STANDARD 5 0
5.2.6.2 D-FA ALS I N T E R N E R STANDARD 5 2
5.2.7 ANALYTIK VON ZAHNKOMPOSITEN MITTELS GC-MS 5 3
ERGEBNISSE 55
6.1 Y H 2 A X - T E S T 5 5
6.1.1 Y-H2AX-TEST M I T ANTIOXIDANTIEN OHNE (KO)MONOMERE 55
6.1.1.1 H2O2 (= POSITIVKONTROLLE] 5 5
6.1.1.2 NEGATIVKONTROLLE 5 6
6.1.1.3 ASC 5 7
6.1.1.4 ACC 5 9
6.1.1.5 TROLOX 6 1
6.1.1.6 RETINYLACETAT 6 2
6.1.1.7 KATALASE 6 4
6.1.1.8 VERGLEICH D E R ANTIOXIDANTIEN IN BEZUG A U F I H R
FOCI-INDUZIERENDES-POTENTIAL 6 5
6.1.1.9 FESTLEGUNG D E R ANTIOXIDANTIEN-KONZENTRATIONEN FUER DIE
KOMBINATION M I T
(KO)MONOMEREN 6 5
6.1.2 Y - H 2 A X - T E S T M I T D E N (KO)MONOMEREN ALLEIN U N D IN
KOMBINATION M I T ASC U N D ACC66
6.1.2.1 H2O2 [= POSITIVKONTROLLE) 6 6
6.1.2.2 MEDIUM (= NEGATIVKONTROLLE) 6 6
6.1.2.3 ASC 6 6
6.1.2.4 ACC 6 7
6.1.2.5 BISGMA 6 7
6.1.2.6 BISGMA IN KOMBINATION M I T ASC 6 7
6.1.2.7 BISGMA IN KOMBINATION M I T ACC 6 8 .
6.1.2.8 ZUSAMMENFASSUNG D E R ERGEBNISSE VON BISGMA 7 0
6.1.2.9 UDMA 7 1
6.1.2.10 UDMA U N D ASC 7 2
6.1.2.11 UDMA IN KOMBINATION M I T ACC 7 3
6.1.2.12 ZUSAMMENFASSUNG D E R ERGEBNISSE V O N UDMA 7 4
6.1.2.13 EGDMA 7 6
6.1.2.14 EGDMA IN KOMBINATION M I T ASC 7 7
6.1.2.15 EGDMA U N D ACC 7 8
6.1.2.16 ZUSAMMENFASSUNG D E R ERGEBNISSE VON EGDMA 7 8
6.1.2.17 GDMA 8 0
6.1.2.18 GDMA IN KOMBINATION M I T ASC 8 0
6.1.2.19 GDMA IN KOMBINATION M I T ACC 8 1
6.1.2.20 ZUSAMMENFASSUNG D E R ERGEBNISSE VON GDMA 8 2
6.2 ANALYTIK VON FA IN ZAHNKOMPOSITEN MITTELS GC-MS 8 4
IMAGE 4
6.2.1 DERIVATISIERUNGSREAKTION VON FA M I T DNPH 8 4
6.2.2 EINFLUSS D E R REAKTIONSZEIT U N D D E R DNPH-APPLIKATIONSFORM 8 5
6.2.2.1 EINFLUSS D E R REAKTIONSZEIT A U F DIE BILDUNG DES
FA-DNPH-KOMPLEXES 8 5
6.2.2.2 EINFLUSS D E R APPLIKATIONSFORM VON DNPH 8 5
6.2.3 EINFLUSS D E R FA-APPLIKATIONSFORM A U F DIE
DERIVATISIERUNGSREAKTION 8 6
6.2.3.1 VERWENDUNG VON FESTEM PARAFORMALDEHYD 8 6
6.2.3.2 VERWENDUNG VON FLUESSIGEM FORMALDEHYD (FORMALIN) 8 8
6.2.3.3 VERWENDUNG EINES FESTEN FA-DNPH-KOMPLEXES 9 1
6.2.4 AUSWAHL EINES INTERNEN STANDARDS 92
6.2.4.1 13C-FA ALS I N T E R N E R STANDARD 9 2
6.2.4.2 D-FA ALS I N T E R N E R STANDARD 9 6
6.2.5 ANALYTIK VON INHALTSSTOFFEN (FA) AUS ZAHNKOMPOSITEN MITTELS GC-MS
1 0 3
6.2.5.1 FA-NACHWEIS IN UNPOLYMERISIERTEN KOMPOSITEN 1 0 3
6.2.5.2 FA-NACHWEIS IM ELUAT POLYMERISIERTER KOMPOSITE 1 0 4
7 DISKUSSION 109
7.1 Y-H2AX-TEST 1 0 9
7.1.1 AUSWAHL D E R (KO)MONOMERE U N D I H R E R EINGESETZTEN
KONZENTRATIONEN 110
7.1.2 AUSWAHL D E R ANTIOXIDANTIEN 110
7.1.3 Y-H2AX-TEST M I T ANTIOXIDANTIEN OHNE (KO)MONOMERE 1 1 1
7.1.4 YH2AX-TEST M I T (KO)MONOMEREN U N D ANTIOXIDANTIEN 114
7.1.5 AUSBLICK 117
7.2 ANALYTIK VON FA IN ZAHNKOMPOSITEN MITTELS GC-MS 1 1 9
7.2.1 ANALYSEMETHODE FUER FA MITTLES GC-MS 120
7.2.1.1 DERIVATISIERUNG V O N FA M I T DNPH 120
7.2.1.2 LOESUNGSVERHALTEN VON PARAFORMALDEHYD 122
7.2.1.3 FA-LOESUNG (FORMALIN} 125
7.2.1.4 13C-FA ALS I N T E R N E R STANDARD 125
7.2.1.5 D-FA ALS I N T E R N E R STANDARD 127
7.2.1.6 FA-DNPH-KOMPLEX 128
7.2.1.7 OPTIMIERUNG D E R DERIVATISIERUNGSREAKTION 128
7.2.1.8 15,6 MM DNPH IN D-ETOH U N D IN ACETONITRIL 129
7.2.1.9 1,56 MM DNPH IN ACETONITRIL U N D ERSTELLEN E I N E R
KALIBRIERKURVE 129
7.2.2 FA-NACHWEIS IN ZAHNKOMPOSITEN MITTELS GC-MS 130
7.2.3 AUSBLICK/RISIKOABSCHAETZUNG 131
8 ZUSAMMENFASSUNG 135
9 SUMMARY 138
10 LITERATURVERZEICHNIS 140
IMAGE 5
11 ANHANG 1 5 4
11.1 MESSERGEBNISSE D E S Y - H 2 A X - T E S T S MIT ANTIOXIDANTIEN
OHNE (KO)MONOMERE... 1 5 4
11.2 MESSERGEBNISSE DES Y - H 2 A X - T E S T E S MIT (KO)MONOMEREN UND
ANTIOXIDANTIEN 1 6 0
11.3 GC-MS MESSUNGEN VON FA-VERDUENNUNGSREIHEN 1 7 4
12 DANKSAGUNG 178
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