SDF-1-Fractalkine-GPI-Fusionsmolekül erhöht die Rekrutierung der embryonalen Endothelialen Progenitor Zellen in ischämischer Muskulatur:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 4
1.1. DIE PERIPHERE ARTERIELLE VERSCHLUSSKRANKHEIT (PA VK) 4
1.2. THERAPEUTISCHE NEOVASKULARISATION 6
1.2.1. VASKULOGENESE 7
1.2.2. ANGIOGENESE 7
1.2.3. ARTERIOGENESE 8
I
1.3. ENDOTHELIALE PROGENITORZELLEN - E P C 9
1.3.1. EMBRYONALE EPC 11
1.3.2. EPC VERBESSERN DIE NEOVASKULARISATION 11
1.4. MOBILISATION UND HOMING VON EPC 12
1.5. CHEMOKINE 14
1.5.1. STROMAL CELL- DERIVED FACTOR 1 - SDF-1 15
1.5.2. FRACTALKINE - CX3CL1 19
1.5.3. GLYCOSYLPHOSPHATIDYLINOSITOL-ANKER - GPI-ANKER 20
2. ZIELSETZUNG DER ARBEIT: VERBESSERUNG DER REKRUTIERUNG VON EEPCS IN
ISCHAEMISCHEN GEWEBEN 22
3. MATERIAL UND METHODEN 23
3.1. IN VITRO METHODEN 23
3.1.1. AMPLIFIZIERUNG VON HUMANEN SDF-1A AUS DEM PCMVSPORT6 -VEKTOR 23
3.1.2. KLONIERUNG DES SDF-1A IN DEN PLRES2-VEKTOR. 24
3.1.3. AMPLIFIZIERUNG UND KLONIERUNG S1-FG IN DEN VEKTOR PCMVAAVGFP. 25
3.1.4. IN VITRO UEBEREXPRESSION VON S1FG 26
3.1.5. MEMBRAN FAERBUNG VON ZELLEN MIT FLUORESZIERENDEN FARBSTOFFEN 27
3.1.6. IN VITRO ADHAESIONSVERSUCHE MIT MONOZYTEN UND EEPC 27
3.2. IN VIVO METHODEN 29
1
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IMAGE 2
3.2.1. MODELL DES ISCHAEMISCHEN HINTERLAUFS IM KANINCHEN 29
3.2.2. LANGZEITVERSUCHE: KOLLATERALWACHSTUM, PERFUSION UND
KAPILLARDICHTE 33
3.2.3. SDF-1 - PECAM-1 - FAERBUNG 39
3.3. STATISTISCHE ANALYSEN 40
4. ERGEBNISSE 41
4.1. AMPLIFIZIERUNG HSDF-1A AUS PCMV-SPORT-6 (RZPD) 41
4.2. LIGATION HSDF-1 MIT PLRES2-PLASMID 41
4.3. LIGATION FUSIONSMOLEKUE( MIT PCMVAAVGFP-PLASMID. 42
4.4. UEBEREXPRESSION VON S1FG IN VITRO 43
4.5.1. IN VITRO ADHAESION VON EEPC UND MONOZYTEN BEI ILOE 44
4.5.3. IN VITRO ADHAESION VON EEPC UND MONOZYTEN BEI SDF1 47
4.6. IN VIVO ADHAESION: ERHOEHTE DETEKTION VON DIL-MARKIERTEN EEPCS NACH
S1FGTRANSFEKTION IM ISCHAEMISCHEN MUSKEL. 50
4.7. LANGZEITVERSUCHE - VERBESSERUNG DES PROANGIOGENEN POTENTIALS VON
EEPCS DURCH S1FG-VORBEHANDLUNG 53
4.7.1. KAPILLARWACHSTUM 53
4.7.2. KOLLATERALBILDUNG 54
4.7.3. PERFUSION (CINEDENSOMETRIE UND MIKROSPHAEREN-MESSUNG) 56
4.8. SDF-1-EXPRESSIONS-NACHWEIS IM GEWEBE 58
5. DISKUSSION 6 0
5.1. BEEINFLUSSUNG DER ADHAESION UND DES HOMING VON EEPCS 61
5.1.1. IN VITRO BEEINFLUSSUNG DER ADHAESION 61
5.1.2. BEDEUTUNG VON S1FG FUER DAS HOMING VON EEPCS IN VIVO 62
5.2. AUSWIRKUNG DER MODIFIZIERTEN REKRUTIERUNG VON EEPCS DURCH S1FG 64
5.2.1. BEEINFLUSSUNG DER KOLLATERALBILDUNG 64
5. 2.2. BEEINFLUSSUNG DER KAPILLARBILDUNG 64
5.2.3. EINFLUSS AUF DIE REGIONALE PERFUSION 65
5.3. SIGNALWEG VON SDF-1, FRACTAIKINE UND EEPCS 65
2
IMAGE 3
5.4. AUSBLICK FUER DIE THERAPEUTISCHE NEOVASKUIARISIERUNG UND GRENZEN DES
MODELLS
SOWIE GRENZEN BEI DER ANWENDUNG AM MENSCHEN 67
5.5. ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION 69
6. LITERATURVERZEICHNIS 71
7. ABBILDUNGSVERZEICHNIS, SOFTWARE UND DATENBANKEN 79
7.1. DATENBANKEN 79
7.2. SOFTWARE 79
7.3. ABBILDUNGSVERZEICHNISL QUELLENNACHWEIS 79
8. ABKUERZUNGEN...: 80
9. ANHANG 83
9.1. DANKSAGUNG 83
9.2. LEBENSLAUF 84
3
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