Einfluss der CD40-Expression semimaturer dendritischer Zellen auf ihre Immunmodulatorische Funktion:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 5
1.1 DENDRITISCHE ZELLEN 5
1.1.1 IMMATUREDCS 5
1.1.2 MATUREDCS 6
1.1.3 IMMUNMODULATORISCHE DCS 7
1.1.3.1 DC S ,M0 8
1.1.3.2 SEMIMATURE DCS TNF_A 8
1.1.3.3 SEMIMATURE DCS IL 6 8
1.2 T-LYMPHOZYTEN 10
1.2.1 CD4 + T-ZELLEN 10
1.2.1.1 TH1-ZELLEN 12
1.2.1.2 TH2-ZELLEN 12
1.2.1.3 T REG -ZELLEN 12
1.2.1.4 TH17-ZELLEN 13
1.3 TOLL-LIKE REZEPTOREN (TLRS) 13
1.3.1 TLRS UND IHRE LIGANDEN 13
1.3.2 TLR-SIGNALWEGE 14
1.4 IMMUNREGULATION DURCH CD40-CD40L-INTERAKTIONEN 17 1.4.1 CD40 UND
CD40-LIGAND 17
1.4.2 ROLLE DER CD40-LIGATION BEI DER GENERIERUNG ADAPTIVER
IMMUNANTWORTEN 17
1.4.3 CD40-INDUZIERTE SIGNALWEGE IN APCS 18
1.4.3.1 NUCLEAR FACTOR KB (NF-KB) 18
1.4.3.2 MITOGEN-AKTIVIERTE PROTEINKINASEN (MAPKS) 19 1.4.4 REGULATION
DER CD40-EXPRESSION 19
1.4.5 MEDIZINISCHE BEDEUTUNG VON CD40 UND CD40-LIGATION 20
1.5 ZIELSETZUNG 21
2 MATERIAL UND METHODEN 23
2.1 MAEUSE 23
2.2 BAKTERIENSTAEMME UND ZELLLINIEN 23
2.2. 1 ESCHERICHIA COLI MPK 23
2.2.2 BACTEROIDES VULGATUS MPK 23
2.2.3 CD40L-EXPRIMIERENDE J558L-ZELILINIE 23
2.3 BAKTERIENKULTUR 24
2.3.1 B. VULGATUS MPK 24
2.3.2 E. COLI MPK 24
1
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IMAGE 2
2.4 ZELLKULTUR 24
2.4.1 KNOCHENMARKS-DCS (BMDCS) 24
2.4.1.1 ZELLKULTURMEDIUM FUER KNOCHENMARKS-DCS 24
2.4.1.2 ISOLATION UND KULTUR VON KNOCHENMARKS-DCS 25 2.4.2 J558L/CD40L-T
RANSFEKTANTEN 25
2.4.2.1 ZELLKULTURMEDIUM FUER J558L-ZELLEN 25
2.4.2.2 KULTUR VON J558L/CD40L-ZELLEN 26
2.4.3 T-ZELLEN 26
2.4.3.1 ZELLKULTURMEDIUM FUER T-ZELLEN 26
2.4.3.2 ISOLATION UND KULTUR VON CD4 + T-ZELLEN 26
2.5 STIMULATION VON ZELLEN 28
2.5.1 STIMULATION VON KNOCHENMARKS-DCS 28
2.5.1.1 AUSSAAT DER DCS ZUR STIMULATION 28
2.5.1.2 STIMULATION VON DCS MIT B. VULGATUS MPK, E COLI MPK UND LPS 29
2.5.1.3 RESTIMULATION MIT E. COLI MPK ODER LPS IN HOHER KONZENTRATION 29
2.5.1.4 CD40-LIGATION VON DCS DURCH KO-KULTUR MIT
J558L/CD40LTRANSFEKTANTEN 30
2.5.1.5 CD40-LIGATION VON DCS MITTELS AGONISTISCHEM MONOKLONALEN
ANTI-CD40 ANTIKOERPER 31
2.5.2 STIMULATION VON T-ZELLEN 32
2.5.2.1 STIMULATION MIT UEBERSTAENDEN VON DCS NACH CD40-LIGATION.... 32
2.6 INHIBITION INTRAZELLULAERER SIGNALWEGE 34
2.7 EXPRESSIONSANALYSE VON OBERFLAECHENMOLEKQLEN MITTELS FACS 35 2.7.1
FACS-FAERBUNG VON OBERFLAECHENMARKEM 35
2.7.2 INTRAZELLULAERE FACS-FAERBUNG VON ZYTOKINEN 36
2.7.3 FACS-MESSUNG UND AUSWERTUNG 37
2.8 MESSUNG DER ZYTOKINKONZENTRATION IM UEBERSTAND MITTELS ELISA.... 38
2.9 STATISTISCHE ANALYSE 39
3 ERGEBNISSE 40
3.1 EIGENSCHAFTEN IMMATURER, SEMIMATURER UND MATURER BMDCS 40 3.1.1
OBERFLAECHENEXPRESSION VON AKTIVIERUNGSMARKERN 40 3.1.2 ZYTOKINSEKRETION
43
3.1.3 ZYTOKINSEKRETION NACH RESTIMULATION MIT E. COLI MPK ODER LPS IN
HOHER KONZENTRATION 45
3.2 EINFLUSS DER CD40-LIGATION AUF SEMIMATURE DCS IM VERGLEICH ZU
IMMATUREN UND MATUREN DCS 48
3.2.1 AUSWIRKUNGEN DER CD40-LIGATION AUF DIE ZYTOKINSEKRETION 48 3.2.1.1
CD40-LIGATION DURCH KO-KULTUR MIT J558L/CD40L-ZELLEN 48 3.2.1.2
CD40-LIGATION MITTELS AGONISTISCHEM ANTI-CD40 MAB 53
2
IMAGE 3
3.2.2 AUSWIRKUNGEN DER CD40-LIGATION AUF DIE EXPRESSION VON
AKTIVIERUNGSMARKEM 57
3.2.2.1 CD40-LIGATION DURCH KO-KULTUR MIT J558L/CD40L-ZELLEN 58 3.2.2.2
VERGLEICH ZWISCHEN WILDTYP- UND I L - 6 D C S 64
3.2.2.3 CD40-LIGATION MITTELS AGONISTISCHEM ANTI-CD40 MAB 65
3.3 WIRKUNG DER DURCH CD40-LIGATION IN DCS INDUZIERTEN ZYTOKINE AUF
NAIVE CD4* T-ZELLEN 70
3.3.1 IFN-Y 71
3.3.2 IL-4, IL-10 UND IL-17 73
3.4 REGULATION DER CD40-INDUZIERTEN ZYTOKINE IN DCS DURCH
MITOGENAKTIVIERTE PROTEINKINASEN 74
3.4.1 P38 MAPK 74
3.4.2 ERK 77
4 DISKUSSION 80
4.1 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 80
4.2 B. VULGATUS MPK UND LPS IN NIEDRIGER KONZENTRATION INDUZIEREN EINEN
PARTIELL IL-6-ABHAENGIGEN SEMIMATUREN DC-PHAENOTYP 80 4.2.1 TOLEROGENE DCS
80
4.2.2 IL-6 ALS IMMUNMODULATORISCHES ZYTOKIN 82
4.2.3 UNTERSCHIEDLICHE BEDEUTUNG VON IL-6 FUER DIE TOLERANZ IN
SEMIMATUREN UND MATUREN DCS 84
4.3 EFFEKTE DER CD40-LIGATION IN SEMIMATUREN DCS IM VERGLEICH ZU
IMMATUREN UND MATUREN DCS 84
4.3.1 CD40-LIGATION DURCH J558UCD40L-TRANSFEKTANTEN 85 4.3.2 SELEKTIVE
CD40-STIMULATION DURCH AGONISTISCHEN ANTI-CD40 MAB.. 86 4.3.2.1
SELEKTIVE CD40-LIGATION FUEHRT NICHT ZUR UEBERWINDUNG DES
IMMUNMODULATORISCHEN PHAENOTYPS SEMIMATURER DCS 11 6 86
4.3.2.2 CD40-LIGATION MATURER DCS FUEHRT ZU EINER OPTIMIERUNG IHRER
T-ZELL-STIMULATORISCHEN EIGENSCHAFTEN 90
4.4 ROLLE DER CD40-INDUZIERTEN ZYTOKINPROFILE BEI DER
T-ZELLPOLARISIERUNG 92
4.4.1 TH1 92
4.4.2 TH2, TH17 UND T REG 97
4.5 ROLLE VON P38 MAPK UND ERK BEI DER CD40-VERMITTELTEN
ZYTOKINPRODUKTION 98
4.5.1 P38 MAPK IST AN DER CD40-INDUZIERTEN IL-12 (P70)- UND
IL-6PRODUKTION IN MATUREN DCS BETEILIGT 99
4.5.2 ERK IST EIN NEGATIVER REGULATOR DER CD40-INDUZIERTEN IL-12
(P40)-PRODUKTION IN IMMATUREN UND SEMIMATUREN DCS 100 4.5.3 EINFLUSS DES
MATURATIONSSTATUS AUF DIE AKTIVIERUNG VON MAPKS DURCH CD40-LIGATION 102
3
IMAGE 4
4.6 SCHLUSSFOLGERUNG 103
5 ZUSAMMENFASSUNG 105
6 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 107
7 LITERATUR 111
8 DANKSAGUNG 134
9 LEBENSLAUF 135
4
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