Verhalten von humanen Osteoblasten in nicht adhärenter Suspensionskultur im Vergleich zu adhärenter Zellkultur:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2012
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| Beschreibung: | 117 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 5
1.1 KNOCHENAUFBAU S
1.1.1 ARTEN VON KNOCHENGEWEBE 7
1.1.2 INTERZELLULARSUBSTANZ DES KNOCHENGEWEBES 7
1.2 SPEZIFISCHE ZELLEN DES KNOCHENS S
1.2.1 OSTEOPROGENITORZELLEN 8
1.2.2 OSTEOBLASTEN 9
1.2.3 OSTEOZYTEN 10
1.2.4 OSTEOKLASTEN 10
1.3 MARKER FUER DIE OSTEOBLASTENFUNKTION N
1.3.1 ALKALISCHE PHOSPHATASE N
1.3.2 OSTEOKALZIN N
1.3.3 OSTEONEKTIN UND OSTEOPONTIN 12
1 . 4 SIGNALWEG DER ZELLEN - DIE ZYTOKINE 13
1.4.1 INTERLEUKINE 14
1.4.1.1 LNTERLEUKIN-1 14
1.4.1.2 LNTERLEUKIN-6 14
1.4.1.3 LNTERLEUKIN-8 15
1.4.1.4 LNTERLEUKIN-16 15
1.4.1.5 LNTERLEUKIN-18 16
1 . 5 MATRIXMETALLOPROTEINASEN ( M M P ) 17
1.5.1 MATRIXMETALLOPROTEINASE-1 20
1.5.2 MATRIXMETALLOPROTEINASE-3 21
1.5.3 MATRIXMETALLOPROTEINASE-9 21
1
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IMAGE 2
1.5.4 MATRIXMETALLOPROTEINASE-13 22
1 . 6 DER BESONDERE ZELLTOD - DIE ANOIKIS 22
1 . 7 VORARBEITEN MIT SYNOVIALEN FIBROBLASTEN 23
1.7.1 SYNOVIALE FIBROBLASTEN 23
1.7.2 ERGEBNISSE D E R GENINDUKTION IN SYNOVIALEN FIBROBLASTEN 23
1 . 8 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 25
2. MATERIAL UND METHODEN 26
2 . 1 MATERIAL 26
2.1.1 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 26
2.1.2 CHEMIKALIEN, REAGENZIEN, MEDIEN 27
2.1.3 HERGESTELLTE MEDIEN 29
2.1.4 VERWENDETE PRIMERSEQUENZEN 31
2.1.5 PATIENTENGEWEBE 32
2 . 2 METHODEN 33
2.2.1 STUDIENAUFBAU 33
2.2.2 METHODEN D E R ZELLKULTUR 35
2.2.2.1 GEWINNUNG DER PRIMAEREN HUMANEN OSTEOBLASTEN 35
2.2.2.2 PASSAGIERUNG UND ERNTE DER ZELLEN 36
2.2.2.3 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 37
2.2.2.4 LANGZEITLAGERUNG DER ZELLEN 38
2.2.2.5 ZELLEN AUS DER KRYOKONSERVIERUNG AUFTAUEN 38
2.2.3 VORBEREITUNGEN FUER DIE VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 38
2.2.3.1 HERSTELLUNG DER PARAFFINBESCHICHTUNG 38
2.2.3.2 HERSTELLUNG DER BSA-BESCHICHTUNG 39
2.2.4 RNA-EXTRAKTION 40
2
IMAGE 3
2 . 2 . 5 BESTIMMUNG D E R RNA-KONZENTRATION 40
2 . 2 . 6 REVERSE TRANSKRIPTASE P C R - SYNTHESE D E R C D N A 41
2 . 2 . 7 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 42
2.2.7.1 AUFBAU UND ARBEITSPRINZIP DES LIGHTCYDERS 43
2.2.7.2 AUSWAHL DES REFERENZGENS UND RELATIVE QUANTIFIZIERUNG 44
2.2.7.3 PIPETTIERSCHEMA DES LIGHTCYCLER RT-PCR-ANSATZES 45
2.2.7.4 STANDARDPROTOKOLL FUER RT-PCR IM LIGHTCYCLER 46
2 . 2 . 8 QUALITATIVE P C R Z U M NACHWEIS D E R OSTEOBLASTENMARKER
2.2.8.1 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 49
2.2.9 STATISTISCHE AUSWERTUNG D E R ERGEBNISSE 50
3. E R G E B N I S S E 51
3.1 ZELLKULTUR UND ZELLWACHSTUM 51
3 . 2 LICHTMIKROSKOPISCHE BILDER NACH DER VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 52
3 . 3 ERGEBNIS DER ZELLZAEHLUNGEN NACH DER VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 54
3 . 4 ZELLTYPCHARAKTERISIERUNG MITTELS OSTEOBLASTENMARKER 55
3.4.1 ALKALISCHE PHOSPHATASE 56
3.4.2 OSTEOKALZIN 57
3.4.3 OSTEONEKTIN 58
3.4.4 OSTEOPONTIN 58
3.4.5 KOLLAGEN1A2 59
3 . 5 ANALYSE DER GENEXPRESSION IN OSTEOBLASTEN 60
3.5.1 GENEXPRESSION VON IL-1SS 60
3.5.2 GENEXPRESSION VON IL-6 62
3.5.3 GENEXPRESSION VON IL-8 64
3.5.4 GENEXPRESSION VON IL-16 66
3
IMAGE 4
3.5.5 GENEXPRESSION VON IL-18 68
3.5.6 GENEXPRESSION VON MMP-1 70
3.5.7 GENEXPRESSION VON M M P - 3 72
3.5.8 GENEXPRESSION VON MMP-9 74
3.5.9 GENEXPRESSION VON MMP-13 76
4 . D I S K U S S I O N 78
4 . 1 ZELLKULTUR UND ZELLWACHSTUM 78
4 . 2 ZELL VERHALTEN NACH DER VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 79
4 . 3 ZELLTYPCHARAKTERISIERUNG MITTELS OSTEOBLASTENMARKER 79
4 . 4 AUSWERTUNG DER PCR-ERGEBNISSE S I
4.4.1 INTERLEUKINE 81
4.4.2 MATRIXMETAILOPROTEINASEN 83
4 . 5 VERGLEICH DER M M P - UND INTERLEUKIN-EXPRESSIONEN IN SYNOVIALEN
FIBROBLASTEN 84
5 . Z U S A M M E N F A S S U N G 86
6 . L I T E R A T U R V E R Z E I C H N I S 87
7 . A N H A N G 102
7.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 102
7 . 2 TABELLENVERZEICHNIS 105
7 . 3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 106
8 . S E K U N D AE R D A T E N 109
9 . D A N K S A G U N G 115
1 0 . C U R R I C U L U M V I T A E 116
4
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