Therapeutische Tumorvakzinierung mit Salmonella typhimurium: Regression des murinen Fibrosarkoms WEHI 164 - p60 durch antigenspezifische CD8-T-Zellen
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2012
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VIII
INHALTSVERZEICHNIS
I INHALTSVERZEICHNIS VII
II VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN UND AKRONYME XI
1 EINLEITUNG 1
1.1 GRUNDZUEGE DES IMMUNSYSTEMS 2
1.1.1 DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM 2
1.1.2 DAS SPEZIFISCHE IMMUNSYSTEM 2
1.1.3 ANTIGENPRAESENTATION UND ERKENNUNG DURCH DAS SPEZIFISCHE
IMMUNSYSTEM 3
1.1.3.1 DIE ROLLE DER T-ZELLEN 4
1.1.3.2 DIE ROLLE DER ANTIGENPRAESENTIERENDEN ZELLEN 5
1.1.4 DIFFERENZIERUNG DER C D 8 T-ZELL-SUBPOPULATIONEN 5
1.2 IMMUNOEDITING DER KREBSZELLE: VON DER IMMUNOSURVEILLANCE ZUM
TUMOR ESCAPE 7
1.2.1 IMMUNOSURVEILLANCE 7
1.2.2 IMMUNOEDITING UND T U M O R ESCAPE 9
1.3 SALMONELLEN 11
1.3.1 SALMONELLA ALS PATHOGEN 11
1.3.2 PATHOGENESE V O N SALMONELLA TYPHIMURIUM 12
1.3.3 DAS TYP III-SEKRETIONSSYSTEM 12
1.3.4 SALMONELLA TYPHIMURIUM ALS LEBENDIMPFSTOFFTRAEGER 15
1.4 FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG 18
2 MATERIAL UND METHODEN 19
2.1 MATERIAL 20
2.1.1 GERAETE 20
2.1.2 VERBRAUCHSMATERIALEN 21
2.1.3 CHEMIKALIEN UND BIOCHEMIKALIEN 22
2.1.4 ANTIBIOTIKA ZUR BAKTERIENKULTUR 23
2.1.5 ANTIKOERPER 2 3
2.1.5.1 VERWENDETE ANTIKOERPER FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 23
2.1.5.2 TETRAMERE 24
2.1.6 PUFFERLOESUNGEN UND MEDIEN 25
2.1.7 BAKTERIEN UND PLASMIDE 27
2.1.7.1 BAKTERIENSTAEMME 27
2.1.7.2 DAS PLASMID PHR241 27
2.1.8 DIE ZELLLINIE W E H I 164 (ATCC # CRL-1751) - P60 28
2.1.9 BALB/C MAEUSE 28
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS I X
2.2 METHODEN 29
2.2.1 ZELLKULTUR 29
2.2.1.1 AUFBEWAHRUNG UND AUFTAUEN DER FIBROSARKOMZELLEN 29
2.2.1.2 ZELLKULTURBEDINGUNGEN UND PASSAGIEREN 29
2.2.2 TUMORINJEKTION 30
2.2.2.1 ZELLZAHLBESTIMMUNG 30
2.2.2.2 VORBEREITUNG ZUR INJEKTION 30
2.2.2.3 SUBKUTANE TUMORINJEKTION 30
2.2.3 BAKTERIENKULTUR UND AUFBEWAHRUNG 30
2.2.4. IMMUNISIERUNG 31
2.2.4.1 ERMITDUNG DER KOLONIEBILDENDEN EINHEITEN 31
2.2.4.2 IMMUNISIERUNGSVORGANG 31
2.2.5. LYMPHOZYTENPRAEPARATION 31
2.2.5.1. POST-MORTEM BLUTENTNAHME 31
2.2.5.2. VERARBEITUNG DES TUMORGEWEBES 31
2.2.6. IMMUNHISTOCHEMIE 32
2.2.6.1. FAERBUNG DER LYMPHOZYTEN MIT FLUOROCHROMMARKIERTEN ANTIKOERPERN
32
2.2.6.2. TETRAMERFARBUNG 32
2.2.6.3. DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS-ANALYSE) 33
2.2.6.4. DATENANALYSE MIT FLOWJO SOFTWARE 33
2.3 STATISTISCHE ANALYSE 34
3 ERGEBNISSE 35
3.1 UEBERLEGUNGEN ZUM VERSUCHSAUFBAU BEI DER ENTWICKLUNG EINES MODELLS
ZUR KREBSIMMUNTNERAPIE MIT S. TYPHIMURIUM 36
3.2 EINFLUSS DER THERAPEUTISCHEN VAKZINIERUNG MIT SALMONELLA
SB824(PHR241) AUF DAS WACHSTUM DES MURINEN FIBROSARKOMS WEHI164 - P60 38
3.2.1 TUMORWACHSTUM: IMMUNISIERUNGSSTRATEGIEN IM VERGLEICH 38
3.2.1.1 INTRAVENOESE IMMUNISIERUNG AM TAG 0 39
3.2.1.2 INTRAVENOESE IMMUNISIERUNG AM TAG 4 40
3.2.1.3 OROGASTRISCHE IMMUNISIERUNG AM TAG 0 41
3.2.1.4 OROGASTRISCHE IMMUNISIERUNG AM TAG 4 42
3.2.2 TUMORREGRESSION: IMMUNISIERUNGSSTRATEGIEN IM VERGLEICH 4 3
3.3 GENERIERUNG ANTIGENSPEZIFISCHER CD8 T-ZELLEN NACH THERAPEUTISCHER
IMMUNISIERUNG MIT REKOMBINANTEN SALMONELLEN 45
3.3.1 NACHWEIS ANTIGENSPEZIFISCHER C D 8 T-ZELLEN IM BLUT MITTELS
TETRAMERTECHNOLOGIE 46
3.3.2 VERGLEICH DER IMMUNISIERUNGSGRUPPEN DURCH ANALYSE DER
ANTIGENSPEZIFISCHEN CD8 T-ZELLEN IM BLUT 47
3.4 KORRELATION ZWISCHEN P60 217 . 22 S - SPEZIFISCHEN EFFEKTORZELLEN I
M BLUT UND DER WAHRSCHEINLICHKEIT DER TUMORREGRESSION 49
IMAGE 3
X
INHALTSVERZEICHNIS
3.5 NACHWEIS VON P60 217 _ 225 - SPEZIFISCHEN CD8 T-ZELLEN I M
TUMORGEWEBE 50
3.6 ZEITLICHER ZUSAMMENHANG ZWISCHEN WEHI164 - P60 TUMORREGRESSION UND
P60SPEZIFISCHER CD8 T-ZELLINVASION 53
4 DISKUS SION 54
4.1 UEBERSICHT UEBER DIE EXPERIMENTELLEN BEFUNDE 55
4.2 ERGEBNISINTERPRETATION IM VERGLEICH MIT DER LITERATUR 56
4.2.1 KREBSIMMUNTHERAPIE MIT S. TYPBIMURIUM 56
4.2.2 IMMUNISIERUNG MIT REKOMBINANTEN S. TYPBIMURIUM 57
4.2.3 UEBERLEGUNGEN ZU MODELL UND METHODIK DER THERAPEUTISCHEN
IMMUNISIERUNG MIT SALMONELLA SB824(PHR241) 59
4.2.4 DETEKTION VON P602I7-225-SPEZIFISCHEN C D 8 T-ZELLEN IM BLUT 60
4.2.5 DETEKTION VON P602I7-225-SPEZIFISCHEN C D 8 T-ZELLEN IM
TUMORGEWEBE 62
4.2.6 UMGEHUNG DES TUMOR ESCAPES DURCH IMMUNISIERUNG MIT SB824(PHR241)
64
4.3 KLINISCHE RELEVANZ DER ERGEBNISSE .66
5 ZUSAMMENFASSUNG 68
6 LITERATURVERZEICHNIS 70
DANKSAGUNG 92
VEROEFFENTLICHUNGEN UND VORTRAEGE 94
LEBENSLAUF 97
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