Genetische und phänotypische Charakterisierung eines Mausmodells für erbliche Polycythämie:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
2. LITERATURUEBERSICHT 2
2.1. DAS MUENCHENER ENU-MAUS-MUTAGENESE-PROJEKT 2
2.2. SYSTEMATISCHE PHAENOTYPISIERUNG IN DER GERMAN MOUSE CLINIC 4
2.3. HAEMATOPOESE 8
2.4. POLYGLOBULIE (ERYTHROZYTOSEN) 11
2.4.1. RELATIVE POLYGLOBULIE (PSEUDOPOLYGLOBULIE) 12
2.4.2. ABSOLUTE POLYGLOBULIE 13
2.4.3. PRIMAERE POLYGLOBULIEN 14
2.4.3.1. TSCHUWASCHIEN-POLYCYTHAEMIE 14
2.4.3.2. PRIMAERE ANGEBORENE POLYCYTHAEMIE 14
2.4.3.3. POLYCYTHAEMIA VERA 14
2.4.4. MAUSMODELLE FUER DIE POLYCYTHAEMIE 16
2.4.5. DIFFERENZIALDIAGNOSE DER POLYCYTHAEMIA VERA 17
2.5. MESENCHYMALE TUMOREN DES GASTROINTESTINALTRAKTS 17
2.5.1. GASTROINTESTINALE STROMATUMOREN 18
2.5.2. MAUSMODELLE FUER GIST 19
2.6. MEGAKOLON 20
3. MATERIAL UND METHODEN 21
3.1. VERSUCHSTIERE UND HALTUNGSBEDING^NGEN 21
3.2. ANALYSE DER LEBENSFAEHIGKEIT DER HOMOZYGOT MUTANTEN TIERE 22
3.3. KOEIPERGEWICHTSENTWICKLUNG 22
3.4. PHAENOTYPISIERUNG DER MUTANTEN MAUSLINIE MVD013 IM GMC PRIMAERSCREEN
22
3.4.1. ENTNAHME UND UNTERSUCHUNG VON BLUTPROBEN 24
3.4.2. BESTIMMUNG DER BLUTBILDPARAMETER 25
3.4.2.1. AUTOMATISCHES BLUTANALYSEGERAET ABC-VET 25
3.4.2.2. AUTOMATISCHES BLUTANALYSEGERAET SYSMEX XT-2000IV 25.
3.4.3. BESTIMMUNG DER OSMOTISCHEN RESISTENZ DER ERYTHROZYTEN 26
3.4.4. IMMUNOLOGISCHE PHAENOTYPISIERUNG VON PERIPHEREM BLUT 27
3.4.5. KLINISCHE CHEMIE 27
3.4.6. INTRAPERITONEALER GLUKOSE TOLERANZ TEST 29
3.5. BLUTGASANALYSE 30
3.6. BESTIMMUNG DER ERYTHROPOETINKONZENTRATION 30
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IMAGE 2
3.7. PATHOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 32
3.7.1. SEKTION UND MAKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 32
3.7.2. HAEMATOXILIN-EOSIN-FAERBUNG (HE) 32
3.7.3. IMMUNHISTOCHEMIE (IHC) 33
3.7.4. IMMUNHISTOCHEMIE ANALYSE 33
3.8. UNTERSUCHUNG DER ZUSAMMENSETZUNG DER KNOCHENMARKSZELLEN, DER
APOEPTOSERATEN UND DES KOLONIEWACHSTUMS DER HAEMATOPOETISCHEN
PROGENITORZELLEN 33
3.9. GENOTYPISIERUNG 34
3.9.1. KARTIERUNG DER MUTATION 34
3.9.1.1. GROBKARTIENING DER MUTATION DURCH KOPPLUNGSANALYSE 34
3.9.1.2. FEINKARTIERUNG DER MUTATION 35
3.9.1.3. PRIORISIERUNG VON KANDIDATENGENEN 35
3.9.2.1. ISOLATION DER GENOMISCHEN DNA 36
3.9.2.2. POLYMERASE-KETTENREAKTION 36
3.9.2.3. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 37
3.9.2.4. REINIGUNG VON PCR-PRODUKTEN 38
3.9.2.5. SEQUENZIERREAKTION (CYCLE-SEQUENCING) 39
3.9.2.6. REINIGUNG DES SEQUENZIERANSATZES MIT CLEAN-SEQ BEADS 40
3.10. STATISTISCHE AUSWERTUNG 40
4. ERGEBNISSE 42
4.1. ANALYSE DER LEBENSFAEHIGKEIT DER HOMOZYGOT MUTANTEN TIERE 42
4.2. KOERPERGEWICHTSENTWICKLUNG 43
4.3. HAEMATOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 46
4.3.1. HAEMATOLOGIE 46
4.3.2. BESTIMMUNG DER OSMOTISCHEN RESISTENZ DER ERYTHROZYTEN 48
4.3.3. UNTERSUCHUNG DER RETIKULOZYTENZAHL UND DES
DIFFERENTIALBLUTBILDS49
4.3.4. IMMUNOLOGISCHE PHAENOTYPISIERUNG VON PERIPHEREM BLUT 50
4.4. KLINISCH-CHEMISCHE PARAMETER 51
4.5. INTRAPERITONEALER GLUKOSE TOLERANZ TEST 53
4.6. BLUTGASANALYSE 55
4.7. SERUM ERYTHROPOETINKONZENTRATION 57
4.8. PATHOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN.... 57
4.8.1. MAKROSKOPISCHE UND HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN IM PRIMAERSCREEN
57
IMAGE 3
4.8.2. IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSE 59
4.9. BESTIMMUNG DER ZUSAMMENSETZUNG DER HAEMATOPOETISCHEN STAMMZELLEN 61
4.9.1. BESTIMMUNG DER ANZAHL DER KOLONIEBILDENDEN EINHEITEN DES
KNOCHENMARKS ANHAND DES KOLONIEWACHSTUMS IN VITRO 61
4.9.2. UNTERSUCHUNGEN AN DER MILZ: BESTIMMUNG DER ANZAHL DER
KOLONIENBILDENDEN EINHEITEN, DER MEGAKARYOZYTENZAHL UND DES
ORGANGEWICHTS 65
4.10. GENOTYPISIEIUNG 67
4.10.1. FEINKARTIERUNG DER MUTATION 67
4.10.2. PRIORISIEIUNG UND SEQUENZIERUNG DER KANDIDATENGENE 68
5. DISKUSSION 70
5.1. KLINISCHER PHAENOTYP 70
5.2. GENETISCHE CHARAKTERISIERUNG 75
5.3. FAZIT UND AUSBLICK 76
6. ZUSAMMENFASSUNG 77
7. SUMMARY 79
8. LITERATURVERZEICHNIS 81
9. ANHANG 95
10. DANKSAGUNG 105
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