Entwicklung und Validierung eines fluoreszenzmikroskopischen Schnellnachweisverfahrens für lebensfähige Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (MAP) – Zellen in Milch und Säuglingsanfangsnahrung:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2012
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| Ausgabe: | 1.Aufl. |
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INHALTSVERZEICHNIS
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
SONDERZEICHEN V
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VI
TABELLENVERZEICHNIS VII
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATUROBERSICHT 2
2.1 MYKOBAKTERIEN 2
2.2 MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS (MAP) 2
2.2.1 TAXONOMIE UND EIGENSCHAFTEN 2
2.2.2 TENAZITAET UND VERBREITUNG 3
2.3 PARATUBERKULOSE 4
2.4 PARATUBERKULOSE BEKAEMPFUNGSPROGRAMME 5
2.5 VORKOMMEN VON MAP IN LEBENSMITTELN 11
2.5.1 MAP-EXPOSITION UEBER MILCH UND MILCHPRODUKTE 12
2.5.2 EINFLUSS DER PASTEURISATION A U F MAP-ZELLEN 15
2.6 MAP UND MORBUS CROHN 17
2.7 NACHWEISMETHODEN FUER MAP IN MILCH 18
2.7.1 KULTURELLE ANZUCHT 19
2.7.2 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHER NACHWEIS 20
2.7.3 PHAGEN-ASSAY 22
2.7.4 PCR (POLYMERASE-KETTENREAKTION) 24
3 MATERIAL UND METHODEN 27
3.1 ARBEITSKONZEPT 27
3.2 LABORMATERIALIEN 28
3.3 REFERENZ-UND KONTROLLSTAEMME 30
3.4 MILCH UND SAEUGLINGSANFANGSNAHRUNG BEI DEN EINMISCHVERSUCHEN 30
3.5 VERSUCHSAUFBAU 31
3.5.1 ANZUCHT DER MAP-REFERENZSTAEMME 31
I
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.2 HERSTELLUNG DER MAP-BAKTERIENSUSPENSION 32
3.5.3 HERSTELLUNG DER VERDUENNUNGSREIHE 32
3.5.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE UEBERPRUEFUNG DER VERDUENNUNGSREIHE 33
3.5.5 KONTROLLE DER TATSAECHLICHEN BAKTERIENZAHL IN DEN VERDUENNUNGSSTUFEN
34
3.5.6 ARTIFIZIELLE KONTAMINATION VON MILCH UND SAEUGLINGSANFANGSNAHRUNG
39
3.5.7 CTC- UND AURAMIN ORANGE-FAERBUNG 40
3.5.8 AEACLIGHT*-FAERBUNG 4 3
3.5.9 KULTURELLE ANZUCHT 47
3.5.10 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 4 9
3.5.11 FASTPIAQUE TB* (FPTB)-ASSAY 50
3.5.12 UNTERSUCHUNG VON SAEUGLINGSANFANGSNAHRUNG AUS DEM DEUTSCHEN HANDEL
54
3.5.13 STATISTISCHE AUSWERTUNG 54
4 ERGEBNISSE 55
4.1 VORVERSUCHE 55
4.2 HAUPTVERSUCHE 58
4.2.2 KORRELATIONSANALYSEN DER EINGESETZTEN METHODEN 60
4.2.3 NACHWEISGRENZEN DER EINGESETZTEN METHODEN 63
4.2.4 CTC-FAERBUNG 65
4.2.5 SSACLIGHT*-FAERBUNG 65
4.2.6 FASTPLAQUETE*-PISSAY 66
4.2.7 KULTURELLE ANZUCHT 67
4.2.8 MOLEKULARBIOLOGISCHE ERGEBNISSE 71
4.3 UNTERSUCHUNG VON SAEUGLINGSANFANGSNAHRUNG AUS DEM HANDEL 74
5 DISKUSSION 76
5.1 ANALYSE DER VORVERSUCHE UND DER FLUORESZENZMIKROSKOPISCHEN
FAERBEMETHODEN 76
5.1.1 CTC-/AO-FAERBUNG 7 6
5.1.2 BACLIGHT*-FAERBUNG 78
5.2 ANALYSE DER HAUPTVERSUCHE 79
5.2.1 ERMITTLUNG DER EINMISCHKONZENTRATION 7 9
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
5.2.2 FASTPLAQUE TB*-ASSAY 81
5.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE ERGEBNISSE (UNTERSUCHUNGEN DER PLAQUES DES
FPTB-ASSAY) 82
5.2.4 KULTURELLE ANZUCHT 82
5.3 ANALYSE DER UNTERSUCHUNG VON SAEUGLINGSANFANGSNAHRUNG AUS DEM
DEUTSCHEN HANDEL. 85
6 SCHLUSSFOLGERUNGEN 86
7 ZUSAMMENFASSUNG 87
8 SUMMARY 88
9 ANHANG 89
9.1 NAEHRMEDIEN UND PUFFER 89
9.1.1 HERROLD S EGG YOLK-MEDIUM 89
9.1.2 MIDDLEBROOK 7H10-FESTNAEHRMEDIUM 89
9.1.3 MIDDLEBROOK 7H9-FLUESSIGNAEHRMEDIUM 91
9.1.4 ENZYMATISCHER LYSISPUFFER 92
9.2 SCHAUBILDER VERSUCHSAUFBAU 93
10 LITERATURVERZEICHNIS 95
DANKSAGUNG 118
ERKLAERUNG 119
III
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